微小RNA-29b靶向卷曲蛋白6参与急性髓系白血病细胞柔红霉素耐药的分子机制

目的探究微小RNA-29b(miR-29b)靶向卷曲蛋白6(FZD6)参与急性髓系白血病(AML)细胞柔红霉素(DNR)耐药的分子机制。方法CCK-8检测AML细胞系在不同DNR浓度下的生存能力,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AML细胞系中miR-29b的表达。选取THP-1细胞为研究对象,分为Control组(正常培养)、miR-NC mimics组(转染miR-NC mimics)、miR-29b mimics组(转染miR-29b mimics)、miR-29b mimics+pcDNA组(转染miR-29b mimics和pcDNA)、miR-29b mimics+pcDNA-FZD6组(转染miR-29b mimics和pcDNA-FZD6),转染24 h后使用10 mM DNR处理培养24 h。qRT-PCR和免疫印迹(Western blot)检测各组DNR处理的THP-1细胞中miR-29b和FZD6表达水平。生物信息学和双荧光素酶报告基因预测并检测miR-29b和FZD6靶向关系。CCK-8、Edu法和流式细胞术分别检测DNR处理的各组THP-1细胞增殖和凋亡情况。结果AML细胞系对DNR的耐药性是呈浓度依赖性的,qRT-PCR结果显示,miR-29b在AML细胞系THP-1(1.00±0.05)、KG-1(1.87±0.16)、HL-60(2.96±0.21)及Kasumi-1(3.73±0.29)中的表达逐渐增高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测、qRT-PCR及Western blot证明miR-29b可直接负靶向FZD6(0.32±0.04,0.37±0.05,0.48±0.06,P<0.05)。miR-29b过表达可使AML细胞对DNR的耐药性减弱,抑制细胞增殖,增强细胞凋亡能力(43.59±5.24,21.97±3.13,P<0.05)。上调FZD6可一定程度上逆转上调miR-29b表达对THP-1细胞增殖和凋亡的影响(65.21±6.39,38.26±4.09,P<0.05)。结论miR-29b通过靶向抑制FZD6降低AML细胞对DNR的耐药性。

维持性血液透析患者血清微小RNA-29b水平与矿物质骨代谢紊乱指标的相关性分析

目的探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者血清微小RNA(microRNA,miR)-29b水平与慢性肾脏病-矿物质骨代谢紊乱(chronic kidney disease-mineral and bone metabolism disorder,CKD-MBD)指标的相关性。方法选取2019年2月至2021年11月鄂州市中心医院血液净化中心进行规律MHD的患者116例作为MHD组,根据血钙、磷、全段甲状旁腺素(intact parathyroid hormone,iPTH)指标范围将其分为达标组(未合并CKD-MBD)与未达标组(合并CKD-MBD)。另选取体检健康者116名为对照组。检测血清miR-29b、钙、磷、iPTH、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、白蛋白(albumin,Alb)、β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、25羟维生素D[25 hydroxyvitamin D,25(OH)D]水平,比较其在各组中的差异。Pearson法分析未达标组miR-29b与各临床指标相关性;logistic回归模型分析miR-29b降低的相关影响因素。结果MHD组患者以下指标水平高于对照组:血磷[(1.50±0.37)mmol/L比(1.12±0.26)mmol/L]、ALP[(96.07±13.54)U/L比(72.39±11.95)U/L]、β2-MG[(1.73±0.51)mg/L比(1.48±0.36)mg/L]、25(OH)D[(21.30±5.47)μg/L比(16.82±3.15)μg/L]、iPTH[(325.08±84.90)ng/L比(50.74±9.36)ng/L];以下指标水平低于对照组:Hb[(114.93±7.26)g/L比(125.74±10.51)g/L]、Alb[(37.25±3.82)g/L比(43.18±4.04)g/L]、miR-29b[(0.72±0.15)比(1.06±0.12)],差异有统计学意义(P<0.05)。116例MHD患者中9例(7.76%)同时达到CKD-MBD指南中规定的钙、磷、iPTH目标值。达标组血清miR-29b表达水平(0.92±0.17)高于未达标组(0.70±0.15),差异有统计学意义(P<0.05)。未达标组血清miR-29b与25(OH)D、磷、iPTH存在负相关(r=−0.592、r=−0.546、r=−0.601,P均<0.05),与年龄、体重指数、透析时间、Hb、ALP、Alb、钙、β2-MG不存在相关性(P均>0.05)。25(OH)D[OR(95%CI):1.627(1.110~2.384)]、磷[OR(95%CI):1.461(1.064~2.007)]、iPTH[OR(95%CI):1.539(1.092~2.169)]是导致miR-29b降低的危险因素(P<0.05)。结论miR-29b在合并矿物质骨代谢紊乱的MHD患者中呈下调表达,且与25(OH)D、磷、iPTH呈负相关。

微小RNA-29b评估冠状动脉斑块破裂的价值及机制研究

目的探讨冠状动脉综合征患者微小RNA(microRNA,miR)-29b评估稳定性冠状动脉疾病(SCAD)斑块破裂早期预警价值及其导致冠状动脉斑块破裂的可能机制。方法选择2020年4月至2022年4月三二〇一医院诊治的210例SCAD患者,根据干预手段分为PCI组95例和冠状动脉造影(CAG)组115例。比较2组治疗前后外周血miR-29b表达水平。将人外周血单核细胞分为空白对照组(未做任何处理)、miR-29b组(转染miR-29b)以及miR-29b空白对照组(转染miR-29b空白质粒),比较3组细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)、NF-κB、白细胞介素6(IL-6)mRNA和蛋白表达情况。结果PCI组术后miR-29b表达高于术前;PCI组术后miR-29b表达明显高于CAG组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-29b诊断冠状动脉斑块破裂的截断值为0.86,曲线下面积为0.838(95%CI:0.707~0.970)。多因素logistic回归分析显示,miR-29b是SCAD患者发生冠状动脉斑块破裂的独立预测因素(OR=0.598,95%CI:0.394~0.908,P=0.016)。Pearson相关分析显示,SCAD患者术前miR-29b与人外周血单核细胞EMMPRIN mRNA呈负相关(r=-0.575,P<0.01)。miR-29b组的EMMPRIN、NF-κB、IL-6mRNA以及蛋白表达量明显低于空白对照组和miR-29b空白对照组(P<0.05)。结论SCAD患者PCI术后miR-29b表达升高是冠状动脉斑块破裂的保护因素,其作为机制可能为miR-29b通过下调单核细胞EMMPRIN的表达而抑制斑块破裂。

微小RNA-29a及水通道蛋白4与创伤性脑损伤和预后的关系

目的探究微小RNA-29a(miR-29a)/水通道蛋白(AQP)4在早期急性创伤性脑水肿(TBE)中的表达和术后神经功能损伤及预后的相关性。方法收集2018年1月至2019年6月重庆医科大学附属第三医院神经疾病中心收治的老年重型脑挫伤患者50例,根据术前头颅CT检查结果分为阴性组5例、轻度组11例、中度组20例、重度组14例。检测患者血清及组织miR-29a水平、组织AQP4水平,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估患者术后神经功能损伤情况,格拉斯哥昏迷评分(GCS)评价患者预后情况,GCS4~5分纳入预后良好组11例,GCS<4分纳入预后不良组39例。结果阴性组、轻度组、中度组和重度组组织AQP4蛋白表达量逐渐增加,同时组织和血清miR-29a相对表达量逐渐降低(P<0.01);血清和组织miR-29a相对表达量与组织AQP4蛋白表达量均呈负相关性(r=-0.748、r=-0.538,P<0.01);组织AQP4蛋白表达量与NIHSS评分呈正相关性(r=0.634,P<0.01),而血清和组织miR-29a相对表达量与NIHSS评分呈负相关性(r=-0.700、r=-0.801,P<0.01)。与预后良好组比较,预后不良组组织AQP4蛋白表达量升高,组织、血清miR-29a相对表达量降低(P<0.01)。ROC曲线分析显示,术前血清miR-29a相对表达量预测患者预后不良曲线下面积为0.879(95%CI:0.746~1.000)。结论老年患者早期急性TBE后脑水肿程度越严重,组织中AQP4表达越高,同时组织与血清中miR-29a表达越低,与术后神经功能下降有关。检测血清miR-29a相对表达量可提供一定的预后信息。

微小RNA-29在肝纤维化进程中的作用

微小RNA（miRNA）是一段含21~23个核苷酸的小的内源性非编码RNA,通过与靶基因mRNA的3＇-UTR部分或完全互补结合抑制翻译或降解mRNA,进而调节细胞的生物学功能。肝星状细胞由静息态向活化态转化是肝纤维化发生发展的核心过程。近年研究发现,miRNA-29（miR-29）在静息态的肝星状细胞中高表达,且在肝纤维化进程中扮演重要角色,可调控参与肝纤维化形成的多种细胞因子和肝星状细胞的活化增殖等。本文针对近年来miR-29在肝星状细胞活化和肝纤维化进程中的作用进行综述。

白藜芦醇调节微小RNA-29b表达抑制高糖诱导的大鼠视网膜muller细胞凋亡

目的研究白藜芦醇(RSV)防护糖尿病早期视损伤的分子机制。方法通过建立视网膜muller细胞(RMCs)体外高糖模型,采用免疫荧光双标、qRT-PCR、western blot、Annexin V/PI流式细胞技术检测高糖和RSV对微小RNA-29b(miR-29b)、特异蛋白1(SP1)表达及RMCs凋亡的影响。结果高糖培养后,miR-29b和SP1表达明显改变,RMCs凋亡率明显增加,RSV干预可明显抑制高糖诱导的miR-29b和SP1异常表达和RMCs凋亡;通过预先在RMCs中转染miR-29b类似物和miR-29b抑制剂研究发现,RSV抑制凋亡作用受明显影响(P<0.05)。结论 RSV通过调节miR-29b表达发挥抗糖尿病早期视损伤作用。

宫颈癌组织中微小RNA-29c的水平及临床意义

目的探讨微小RNA-29c(miR-29c)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法收集本院2013年6月至2018年7月经病理确诊的100例宫颈癌患者的组织标本,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织中的miR-29c水平,分析miR-29c水平与宫颈癌临床病理特征(年龄、FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、病理类型、宫旁浸润、间质浸润、LVSI和淋巴结转移)的关系,以114例子宫肌瘤全子宫切除术后的正常宫颈组织作对照。基于Kaplan-Meier plotter在线生存分析数据库(http://kmplot.com/analysis/)分析miR-29c表达与宫颈癌患者临床预后的关系。结果 QPCR检测发现宫颈癌组织中的miR-29c水平为0.326±0.090,低于正常宫颈组织的1.039±0.372,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-29c水平与宫颈癌患者的年龄、病理类型和宫旁浸润无关(P>0.05),但与FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、间质浸润、LVSI和淋巴结转移有关(P<0.05),其中FIGO分期较晚(Ⅱ期)、肿瘤较大(>4 cm)、低分化、间质浸润较深(>1/2)、有LVSI和淋巴结转移的miR-29c水平和高表达率均低于FIGO分期较早(Ⅰ期)、肿瘤较小(≤4 cm)、高中分化、间质浸润较浅(>1/2)和无LVSI和淋巴结转移者(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,miR-29c高表达在宫颈癌中与良好的预后有关(HR=0.57,95%CI:0.36～0.91,P=0.018)。结论 miR-29c在宫颈癌组织中呈低表达,且与临床分期、血管侵犯和淋巴结转移有关,参与宫颈癌的发生发展,在宫颈癌的防治中有一定价值。

血清微小RNA-29a水平与妊娠糖尿病孕妇母婴结局的相关性

目的分析血清微小RNA-29a水平与妊娠糖尿病(GDM)孕妇母婴结局的相关性。方法纳入245例GDM孕妇,233例随访至分娩结束,根据母婴结局将其分为对照组(n=168)和不良结局组(n=65)。比较两组孕妇的一般资料、血清微小RNA-29a水平和其他实验室指标;应用多因素Logistic回归模型分析GDM孕妇发生母婴不良结局的影响因素;应用受试者工作特征曲线分析危险因素预测GDM孕妇发生母婴不良结局的价值。结果完成随访的233例GDM孕妇中,65例GDM孕妇出现母婴不良结局,发生率为27.90%。不良结局组的孕期增重大于对照组,空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)和微小RNA-29a水平均高于对照组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,孕期增重、空腹血糖、HbA1c和微小RNA-29a水平均是GDM孕妇发生母婴不良结局的独立危险因素(均P<0.05)。微小RNA-29a预测GDM孕妇发生母婴不良结局的曲线下面积为0.821,大于孕期增重、空腹血糖、HbA1c的曲线下面积(均P<0.05)。结论微小RNA-29a水平升高的GDM孕妇发生母婴不良结局的风险增高,该指标有助于GDM孕妇母婴结局的评估。

依普利酮通过靶向微小RNA-192和微小RNA-29a/b/c减轻糖尿病肾病模型大鼠肾损伤机制研究

目的:探讨依普利酮通过靶向微小RNA(miR)-192和miR-29a/b/c减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的机制。方法:将30只成年雄性SD大鼠分为对照组、模型组、依普利酮组,每组10只。通过实时定量PCR(RT-qPCR)分析各实验组大鼠肾脏组织中miR-192和miR-29a/b/c的mRNA表达水平。使用血糖仪检测大鼠血糖,并对大鼠整体和肾脏组织样本进行称重。通过相关商用试剂盒检测大鼠尿蛋白、肌酐和血尿素氮的浓度。通过蛋白印迹分析大鼠肾脏组织中转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Smad家族蛋白3(Smad3)的蛋白表达。通过免疫组化分析大鼠肾脏切片中TGF-β_(1)、Smad3和α-SMA的表达。结果:模型组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平低于对照组,miR-192的mRNA表达水平高于对照组(均P<0.05)。依普利酮组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平高于模型组,miR-192的mRNA表达水平低于模型组(均P<0.05)。模型组体重低于对照组,空腹血糖和肾脏质量/体重高于对照组(均P<0.05)。依普利酮组体重高于模型组,空腹血糖和肾脏质量/体重低于模型组(均P<0.05)。模型组尿蛋白、肌酐和血尿素氮水平高于对照组,而依普利酮组低于模型组(均P<0.05)。三组大鼠GFR比较差异有统计学意义,且模型组低于对照组,依普利酮组高于模型组(均P<0.05)。模型组基底膜变薄,肾小球萎缩,近曲小管损伤,经依普利酮治疗后得到改善。模型组TGF-β_(1)、Smad3和α-SMA平均光密度(MOD)高于对照组,而依普利酮组MOD低于模型组(均P<0.05)。结论:依普利酮通可减轻DN模型大鼠肾损伤,机制与靶向miR-192和miR-29a/b/c表达调控TGF-β_(1)/Smad信号通路有关。

糖尿病视网膜病变病人血清微小RNA-29c、微小RNA-194的表达

目的检测微小RNA-29c(miR-29c)和微小RNA-194(miR-194)在糖尿病视网膜病变(DR)病人血清中的表达特点及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测在汉中市人民医院就诊的98例DR病人、98名Ⅱ型糖尿病(T2DM)病人和98例同期体检健康者(NC)血清中miR-29c和miR-194的表达水平,多因素logistic回归分析影响DR发生的危险因素。Pearson相关分析DR病人血清miR-29c和miR-194与各生化指标的相关性。结果DR组、DM组和NC组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、踝臂指数(ABI)、脉搏波传导速度(PWV)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);DR组和DM组血清中糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)水平及miR-29c表达水平分别为(9.40±1.61)%比(8.53±1.78)%、(9.41±1.76)比(8.42±1.67)mmol/L、(1.29±0.57)比(1.12±0.25)明显高于NC组:(7.93±2.64)%、(6.41±1.62)mmol/L、(1.01±0.10),DR组明显高于DM组,而DR组和DM组miR-194表达水平明显低于NC组,DR组明显低于DM组(P<0.05);DR病人血清中miR-29c相对表达量与HbA1c、FPG水平均呈正相关(P<0.05),与血清miR-194相对表达量负相关(P<0.05);DR病人miR-194与miR-29c相对表达量呈负相关(P<0.05);多因素logistic回归分析发现,FPG水平高、HbA1c水平高、miR-29c水平高是DR发生的独立危险因素(均P<0.05),miR-194水平高是DR发生的保护因素(P<0.05)。结论DR病人血清中miR-29c表达相对DM病人和健康者上调,miR-194表达下调,miR-29c和miR-194与DR的发生发展有关。

子宫内膜癌组织中长链非编码RNA核富含丰富的转录本1、微小RNA-29a的表达及临床意义

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)、微小RNA(miR)-29a的表达及临床意义。方法选取2017年7月至2022年6月在郑州人民医院诊治的EC患者45例,检测癌组织和癌旁组织LncRNA NEAT1、miR-29a表达,并分析癌组织中LncRNA NEAT1、miR-29a表达与临床病理特征的关系,以及LncRNA NEAT1、miR-29a表达对EC的诊断价值。结果EC患者癌组织LncRNA NEAT1表达明显高于癌旁组织(t=7.951,P<0.001),miR-29a表达与癌旁组织比较明显较低(t=5.616,P<0.001)。肿瘤大小≥2cm、临床分期Ⅲ~Ⅳ期EC患者癌组织中LncRNA NEAT1表达高于肿瘤大小<2cm、临床分期Ⅰ~Ⅱ期EC(t=2.251,P=0.030;t=2.273,P=0.028);临床分期Ⅰ~Ⅱ期EC患者癌组织中miR-29a表达高于临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者(t=3.091,P=0.003)。ROC曲线分析得出,LncRNA NEAT1、miR-29a、两者联合诊断测EC的AUC分别为0.861、0.700、0.934。在最佳临界值点对应的敏感性、特异性分别为:LncRNA NEAT1为62.2%、100.0%,miR-29a为100.0%、48.9%,两者联合为100.0%、75.6%。结论EC癌组织LncRNA NEAT1呈高表达,miR-29a呈低表达,均和临床分期有关,且前者还与肿瘤大小有关,LncRNA NEAT1、miR-29a联合可为诊断EC提供参考。

微小RNA-29a-3p靶向Serpinh1调控人胃癌细胞系BGC823增殖和侵袭的分子机制

目的探讨微小RNA(miR)-29a-3p影响Serpinh1对胃癌细胞的增殖与侵袭,并分析其相关的分子机制。方法检测miR-29a-3p在胃癌BGC823细胞中的表达水平,并评估miR-29a-3p在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。通过Western blotting和荧光素酶分析证明,miR-29a-3p与Serpinh13’UTR直接结合。此外,采用MTT法、集落形成法和Transwell法在体外检测miR-29a-3p/Serpinh1轴对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果转染后miR-29a-3p模拟物(mimic)组中miR-29a-3p的表达明显高于miR-29a-3p阴性对照和空白组,转染miR-29a-3p mimic后BGC823细胞增殖能力显著降低。荧光素酶分析显示,miR-29a-3p通过靶向Serpinh13’-非翻译区(3’UTR)抑制Serpinh1的表达。此外,miR-29a-3p的过表达通过靶向Serpinh1显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。结论MiR-29a-3p可靶向作用于Serpinh1,从而调控胃癌细胞的增殖与侵袭。

扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠微小RNA-29家族表达的影响

目的通过观察扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠微小RNA-29家族(mi-croRNA-29,miR-29)的表达影响,探讨其抗心肌纤维化的可能作用机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎术制备大鼠急性心肌梗死模型,随机分为模型组、扶正化瘀组和卡托普利组,假手术组只穿线不结扎,每组6只,连续8周灌胃给予相应药物或去离子水。采用HE染色、心脏指数评分、Masson染色的方法评价心脏整体形态结构、重构程度及纤维化程度,并运用实时荧光定量PCR法检测miR-29家族表达水平。结果(1)与假手术组相比,模型组大鼠心脏指数比值、胶原容积分数升高(P<0.01);与模型组相比,扶正化瘀组、卡托普利组大鼠心脏指数比值、胶原容积分数均降低(P<0.01)。(2)与假手术组相比,模型组大鼠心肌梗死边缘区组织中miR-29a-3p、miR-29b-3p、miR-29c-3p、miR-29b-5p、miR-29c-5p表达显著下调(P<0.05)。与模型组比较,扶正化瘀组miR-29b-3p、miR-29a-5p、miR-29b-5p、miR-29c-5p表达上调(P<0.05);卡托普利组miR-29a-5p、miR-29b-5p、miR-29c-5p表达水平显著升高(P<0.01),miR-29a-3p、miR-29b-3p、miR-29c-3p表达水平进一步下调(P<0.01)。结论扶正化瘀胶囊可改善大鼠心肌梗死后心肌纤维化,其作用机制可能与上调部分miR-29家族成员的表达有关。

微小RNA-29a-3p调节卷曲蛋白4表达影响高脂血症大鼠种植体骨整合的实验研究

目的研究microRNA-29a-3p(miR-29a-3p)对高脂环境下大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化和高脂血症大鼠种植体骨整合的影响及其作用位点。方法 1)体外实验:对BMSCs分别进行普通和高脂成骨诱导,通过逆转录实时定量聚合酶链反应和Western blot检测miR-29a-3p及成骨相关因子碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关基因2(Runx2)的基因和蛋白质表达;高脂培养的BMSCs分别转染miR-29a-3p模拟物、抑制物及阴性对照(NC)质粒,RT-qPCR检测miR-29a-3p、ALP及Runx2基因表达情况,Western blot检测ALP、Runx2蛋白表达情况。通过靶基因预测软件(Target Scan、MiRNA.org等)预测miR-29a-3p与成骨相关的靶基因为卷曲蛋白4(Fzd4),双荧光素酶报告检测miR-29a-3p与Fzd4的相互作用关系。2)体内实验:高脂血症大鼠为实验组,普通大鼠为对照组,两组分别植入种植体,检测种植体周围骨组织中miR-29a-3p、ALP、Runx2的表达差异;行种植体-骨组织的硬组织切片,亚甲基蓝-酸性品红染色,进行组织学观察。分别将miR-29a-3p过表达慢病毒载体及空白对照慢病毒载体注射入高脂血症大鼠,种植体植入后3、10 d检测种植体周围骨组织中ALP、Runx2的表达变化以研究miR-29a-3p对高脂血症大鼠成骨的作用。结果高脂组与普通组相比,ALP、Runx2和miR-29a-3p表达下调,BMSCs成骨分化能力下降。miR-29a-3p模拟物组与抑制物组相比,ALP、Runx2表达升高,BMSCs成骨分化能力增强。体内实验也得到了相似结果。双荧光素酶报告基因分析证实miR29a-3p通过直接结合3’-UTR抑制Fzd4表达。结论miR-29a-3p对高脂环境下大鼠BMSCs成骨分化起正向调节作用,可直接与Fzd4结合调节成骨分化;mi R-29a-3p能够促进高脂血症大鼠种植体周围成骨标志基因的表达,有利于骨整合。

非瓣膜性房颤患者血清微小RNA-29b、MMP-9水平变化及其意义

目的观察非瓣膜性房颤患者血清微小RNA-29b(miR-29b)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,并探讨其意义。方法入选非瓣膜性房颤患者51例(观察组)、窦性心律患者31(对照组),所有患者入院后采用心脏彩超检查测左房内径(LAD);均于第2天清晨取空腹静脉血5 m L,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-29b,采用酶联免疫法检测血清MMP-9。结果对照相与观察组比,LAD显著增大(P<0.01),miR-29b显著降低(Z=-7.45,P<0.01),MMP-9明显升高(Z=-7.52,P<0.01)。Spearman秩相关分析显示,非瓣膜性房颤患者血清miR-29b与LAD呈负相关关系(r=-0.40,P<0.01);血清MMP-9与LAD呈正相关关系(r=0.41,P<0.01);血清miR-29b与MMP-9呈负相关关系(r=-0.89,P<0.01)。结论非瓣膜性房颤患者血清miR-29b水平降低,MMP-9水平升高,二者成负相关关系,可能在心房结构重构中发挥作用。

正常人眼结膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中p53的表达变化及其对微小RNA-29b表达的影响

目的检测正常人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)活化为肌成纤维细胞(MFs)过程中微小RNA(miR)-29b和p53的表达水平,探讨p53表达变化对miR-29b表达的影响。方法收集安徽医科大学第一附属医院2016年3—7月行眼科斜视手术术眼正常Tenon囊组织,用组织块培养法培养出原代HTFs,传代至2~4代并进行实验。将细胞分为4个组:HTFs组细胞常规培养;TGF-β1活化组细胞用10 ng/ml TGF-β1处理;将成纤维细胞活化为肌成纤维细胞;siRNA转染组及阴性对照组分别采用含p53 siRNA以及阴性siRNA转染细胞后经10 ng/ml TGF-β1活化。分别采用免疫组织化学染色法和细胞划痕实验检测HTFs组和TGF-β1活化组细胞p53蛋白表达水平及细胞迁移能力。采用荧光定量PCR法检测各组细胞miR-29b和p53 mRNA相对表达量。结果原代HTFs呈长梭形,细胞间呈螺旋状排列,TGF-β1活化后细胞转化为MFs,细胞形态不规则,排列呈无序状态。TGF-β1活化组细胞中p53蛋白染色强度显著强于HTFs组,差异有统计学意义(t=-10.384,P<0.05)。TGF-β1活化组细胞的相对迁移距离明显大于HTFs组细胞,差异有统计学意义(t=9.750,P=0.000)。HTFs组、TGF-β1活化组、siRNA转染组及阴性对照组细胞中p53 mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、3.95±2.61、0.06±0.06和0.98±0.16,miR-29b相对表达量分别为1.00±0.00、0.54±0.09、5.10±2.31和1.03±0.09,总体比较差异均有统计学意义(F=6.688,P=0.006;F=13.640,P=0.000)。TGFβ1活化组细胞p53 mRNA相对表达量显著高于HTFs组和siRNA转染组,miR-29b相对表达量显著低于HTFs组和siRNA转染组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在HTFs转变为MFs过程中,p53显著升高,miR-29b明显降低;抑制p53表达后,miR-29b表达升高。p53与miR-29b之间可能存在相互作用来调控纤维化瘢痕的形成。

慢性心力衰竭患者血清微小RNA-29b和血小板源性生长因子水平与病情严重程度、心室重构的相关性

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血清微小RNA-29b(miRNA-29b)相对表达水平、血小板源性生长因子(PDGF)表达水平与CHF患者病情严重程度和心室重构的相关性。方法将148例CHF患者作为CHF组(根据美国纽约心脏病协会心功能分级标准将患者分为Ⅰ~Ⅱ级亚组47例、Ⅲ级亚组52例、Ⅳ级亚组49例;根据是否发生心室重构,将患者分为心室重构亚组44例和非心室重构亚组104例),另选取150例健康人作为对照组。测定所有研究对象血清miRNA-29b的相对表达水平、血清PDGF表达水平和超声心动图左心室重构指标[左室质量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积(LVEDV)]。比较对照组和不同心功能分级亚组之间及心室重构亚组与非心室重构亚组之间血清miRNA-29b相对表达水平、PDGF水平的差异,对比对照组和不同心功能分级亚组的左心室重构指标;分析CHF患者血清miRNA-29b相对表达水平和PDGF水平的相关性,以及二者与左心室重构指标的相关性。结果 (1)对照组、Ⅰ~Ⅱ级亚组、Ⅲ级亚组、Ⅳ级亚组的血清miRNA-29b相对表达水平依次降低、血清PDGF水平依次升高;与非心室重构CHF患者比较,心室重构患者血清miRNA-29b相对表达水平降低、血清PDGF水平升高(均P<0.05);对照组、Ⅰ~Ⅱ级亚组、Ⅲ级亚组、Ⅳ级亚组CHF患者LVMI、LVEDV水平依次升高,LVEF水平依次降低,且Ⅲ级亚组、Ⅳ级亚组CHF患者的心室重构率高于Ⅰ~Ⅱ级亚组患者(均P<0.05)。(2)Pearson相关性分析显示,CHF组患者血清miRNA-29b相对表达水平与PDGF表达水平呈负相关;miRNA-29b相对表达水平与LVMI、LVEDV均呈负相关,与LVEF呈正相关;PDGF表达水平与LVMI、LVEDV呈正相关,与LVEF呈负相关(均P<0.05)。结论 CHF患者血清miRNA-29b表达下调,而PDGF水平升高,两者与病情严重程度及心室重构关系密切。miRNA-29b可能通过靶向调控PDGF参与CHF的发生和发展。

冠心病患者术前血清超氧化物歧化酶和微小RNA-29b表达及与冠脉CTA钙化积分相关性研究

目的:观察冠心病患者术前血清中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、微小RNA-29b(miR-29b)的表达水平,分析其与冠脉CTA钙化积分(CACS)的关联性。方法:选择87例确诊为冠心病的患者作为观察组,留取术前血清标本,选择87例体检证实无明显器质性疾病的成人血清标本作为对照组,应用ELISA法检测两组血清中SOD的表达,应用实时荧光定量PCR法检测两组血清中miR-29b的表达。检测观察组患者CACS积分。结果:观察组中SOD和miR-29b明显低于对照组。观察组中SOD和miR-29b的表达在不同病变程度和不同CACS评分分组的表达中差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示观察组中SOD与CACS、miR-29b与CACS呈负相关性。结论:冠心病患者术前血清中SOD和miR-29b低表达在病变形成中有促进作用。临床中检测SOD和miR-29b在一定程度上反应病变严重程度,可为临床预测病变的风险性及判断病变程度提供帮助。

下调长链非编码RNAHOXA-AS3靶向促进微小RNA-29b对结肠癌细胞LOVO凋亡和奥沙利铂敏感性的影响

目的探讨下调长链非编码RNA(lncRNA)HOXA-AS3靶向促进微小RNA-29b(miR-29b)对结肠癌细胞LOVO凋亡和奥沙利铂敏感性的影响。方法实时聚合酶链反应测定结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW620和正常结肠上皮细胞NCM460中HOXA-AS3表达变化。结肠癌细胞LOVO分成control组、si-NC组、si-HOXA-AS3组、L-OHP+si-NC组、L-OHP+si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组、si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组、L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组和L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组。采用MTT实验、流式细胞术和Western blot分别分析细胞增殖、凋亡以及细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达情况。生物学信息学软件预测HOXA-AS3的靶miRNA,荧光素酶活性测定试剂盒验证HOXA-AS3和miR-29b的靶向关系。结果与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW620中HOXA-AS3表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结肠癌细胞LOVO中HOXA-AS3表达水平均高于结肠癌细胞SW1116、HCT116、SW620,差异有统计学意义(P<0.05)。与control组、si-NC组比较,si-HOXA-AS3组结肠癌细胞LOVO增殖活性降低,凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-HOXA-AS3组、L-OHP+si-NC组比较,L-OHP+si-HOXA-AS3组结肠癌细胞LOVO增殖活性降低,凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组比较,si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组结肠癌细胞LOVO增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组比较,L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组结肠癌细胞LOVO增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。下调HOXA-AS3靶向促进miR-29b表达。结论下调HOXA-AS3可通过靶向促进miR-29b诱导结肠癌细胞LOVO凋亡并提高奥沙利铂敏感性。

微小RNA-29a在膝骨关节炎兔子中的表达及其对干细胞生长因子β、血管内皮生长因子表达和炎症反应的影响

目的探讨微小RNA(miRNA)-29a在膝骨关节炎(KOA)兔子中的表达水平及其对干细胞生长因子β(SCGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平及炎症反应的影响。方法(1)在48只新西兰兔中取8只作为空白对照组,另外40只用于建立KOA模型,建模成功后随机平均分为非干预组、SCGF-β组、VEGF组和SCGF-β+VEGF组。SCGF-β组、VEGF组和SCGF-β+VEGF组分别采用相应抗体干预,空白对照组与非干预组采用等量生理盐水干预。干预1周后,检测各组血清miRNA-29a、SCGF-β、VEGF、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)的表达水平。(2)取非干预组兔子的软骨组织制备KOA软骨细胞,利用miRNA-29a模拟物(Mimic组)、miRNA-29a阴性对照物(NC组)和miRNA-29a抑制物(Inhibitor组)转染细胞。正常组不予干预。7 d后检测各组软骨细胞miRNA-29a的表达水平及SCGF-β、VEGF mRNA和蛋白的相对表达水平。结果(1)与空白对照组相比,非干预组、SCGF-β组、VEGF组及SCGF-β+VEGF组的血清miRNA-29a表达水平均降低,而血清SCGF-β、VEGF、TNF-α和CRP水平均升高(均P<0.05)。SCGF-β组和SCGF-β+VEGF组的血清SCGF-β表达水平均低于VEGF组与非干预组,VEGF组和SCGF-β+VEGF组的血清VEGF表达水平均低于SCGF-β组与非干预组;SCGF-β组、VEGF组和SCGF-β+VEGF组的血清TNF-α和CRP表达水平均低于非干预组,且SCGF-β+VEGF组的血清TNF-α和CRP表达水平均低于SCGF-β组与VEGF组(均P<0.05)。(2)正常组及NC组miRNA-29a相对表达水平低于Mimic组,高于Inhibitor组;且Inhibitor组miRNA-29a相对表达水平低于Mimic组(均P<0.05);3组转染后的软骨细胞SCGF-β、VEGF的蛋白及mRMA相对表达水平均为Inhibitor组>NC组>Mimic组(均P<0.05)。结论KOA兔子血清miRNA-29a的表达水平降低,血清SCGF-β、VEGF、TNF-α和CRP的表达水平升高,下调SCGF-β和VEGF表达可抑制KOA兔子体内的炎症反应。上调miRNA-29a表达水平可抑制KOA软骨细胞SCGF-β、VEGF的表达,这有助于减轻KOA引起的炎症反应,从而控制病情。