宫颈癌组织中微小RNA-29c的水平及临床意义

目的探讨微小RNA-29c(miR-29c)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法收集本院2013年6月至2018年7月经病理确诊的100例宫颈癌患者的组织标本,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织中的miR-29c水平,分析miR-29c水平与宫颈癌临床病理特征(年龄、FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、病理类型、宫旁浸润、间质浸润、LVSI和淋巴结转移)的关系,以114例子宫肌瘤全子宫切除术后的正常宫颈组织作对照。基于Kaplan-Meier plotter在线生存分析数据库(http://kmplot.com/analysis/)分析miR-29c表达与宫颈癌患者临床预后的关系。结果 QPCR检测发现宫颈癌组织中的miR-29c水平为0.326±0.090,低于正常宫颈组织的1.039±0.372,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-29c水平与宫颈癌患者的年龄、病理类型和宫旁浸润无关(P>0.05),但与FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、间质浸润、LVSI和淋巴结转移有关(P<0.05),其中FIGO分期较晚(Ⅱ期)、肿瘤较大(>4 cm)、低分化、间质浸润较深(>1/2)、有LVSI和淋巴结转移的miR-29c水平和高表达率均低于FIGO分期较早(Ⅰ期)、肿瘤较小(≤4 cm)、高中分化、间质浸润较浅(>1/2)和无LVSI和淋巴结转移者(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,miR-29c高表达在宫颈癌中与良好的预后有关(HR=0.57,95%CI:0.36～0.91,P=0.018)。结论 miR-29c在宫颈癌组织中呈低表达,且与临床分期、血管侵犯和淋巴结转移有关,参与宫颈癌的发生发展,在宫颈癌的防治中有一定价值。

糖尿病视网膜病变病人血清微小RNA-29c、微小RNA-194的表达

目的检测微小RNA-29c(miR-29c)和微小RNA-194(miR-194)在糖尿病视网膜病变(DR)病人血清中的表达特点及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测在汉中市人民医院就诊的98例DR病人、98名Ⅱ型糖尿病(T2DM)病人和98例同期体检健康者(NC)血清中miR-29c和miR-194的表达水平,多因素logistic回归分析影响DR发生的危险因素。Pearson相关分析DR病人血清miR-29c和miR-194与各生化指标的相关性。结果DR组、DM组和NC组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、踝臂指数(ABI)、脉搏波传导速度(PWV)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);DR组和DM组血清中糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)水平及miR-29c表达水平分别为(9.40±1.61)%比(8.53±1.78)%、(9.41±1.76)比(8.42±1.67)mmol/L、(1.29±0.57)比(1.12±0.25)明显高于NC组:(7.93±2.64)%、(6.41±1.62)mmol/L、(1.01±0.10),DR组明显高于DM组,而DR组和DM组miR-194表达水平明显低于NC组,DR组明显低于DM组(P<0.05);DR病人血清中miR-29c相对表达量与HbA1c、FPG水平均呈正相关(P<0.05),与血清miR-194相对表达量负相关(P<0.05);DR病人miR-194与miR-29c相对表达量呈负相关(P<0.05);多因素logistic回归分析发现,FPG水平高、HbA1c水平高、miR-29c水平高是DR发生的独立危险因素(均P<0.05),miR-194水平高是DR发生的保护因素(P<0.05)。结论DR病人血清中miR-29c表达相对DM病人和健康者上调,miR-194表达下调,miR-29c和miR-194与DR的发生发展有关。

微小RNA-29c表达水平与胃癌生物学行为的关系

目的探讨微小RNA-29c（miR-29c）在胃癌发生、发展过程中的作用。方法采用微小RNA（miRNAs）微阵列芯片技术检测胃癌组织中miRNAs表达谱，并筛选差异表达的miRNAs；采用实时定量PCR检测miR-29c在胃癌组织和相应正常胃上皮组织、正常胃上皮细胞系GES-1、胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中的表达水平；采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法和流式细胞术检测miR-29c对胃癌细胞增殖、细胞周期及药物敏感性的作用；应用实时定量PCR、Westernblot和荧光素酶报告基因技术研究髓样细胞白血病1（Mcl-1）与miR-29c之间的关系。结果与正常胃上皮组织比较，胃癌组织中表达上升超过2倍的miRNAs有7个，分别为miR-374b、miRPlus-E1212、miR-338-5p、miR-297、miR-21、miR-135b、miR-18a；表达下降的miRNAs有9个，分别为miR-29b-2、miR-1260、miRPlUS-E1241、miR-S1-5p、miR-48a、miR-29c、miR-647、miR-196b和ebv-miR-BART5。miR-29c在胃癌组织和正常胃上皮组织中的相对表达量分别为0．70±0．34和1．00±0．06（P〈0．05），分化越差的细胞系miR-29c表达水平越低（P〈0．05）。miR-29c表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、Laur6n分型、Bon＇mann分型和Ming分型有关（均P〈0．05）。在BGC-823胃癌细胞中，miR-29c过表达可以抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，使细胞周期受阻于S期，并增加肿瘤细胞对化疗药物多西紫杉醇的敏感性（均P〈0．05）。Mcl-1mRNA在胃癌组织和正常胃上皮组织中的相对表达量分别为3．47±1．34和1．00±0．20（P〈0．01），miR-29c和Mcl-1mRNA在胃癌组织中的表达呈负相关（r=一0．633，P〈0．05）。miR-29e直接靶向调控Mcl-1在胃癌细胞中的表达。结论胃癌组织具有自己独特的miRNAs表达谱。miR-29c的表达水平与胃癌的生物学行为相关。miR-29c参与对Mcl-1的靶向调控，可能是胃癌的发病机制之一。

微小RNA-29c在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-29c在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、侵袭力的影响。方法选择长春大学医院及吉林大学第一医院2013年1月至2015年12月23例膀胱组组织标本及相应的癌旁组织标本，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定膀胱癌及癌旁组织中miRNA-29c的表达。miRNA-29c质粒转染膀胱癌124细胞，RT-PCR测定转染124细胞中miRNA-29c的表达量，噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖，流式细胞仪测定细胞凋亡，Transwell检测细胞侵袭力。结果膀胱癌组织中miRNA-29c相对表达量（0．41±0．17）明显低于癌旁组织（1．00±0，00）（P〈0．05）。A组的miRNA-29c相对表达量（354．36±13．54）明显高于B组（1．21±0．02）和C组（1．00±0．01）（P〈0．05）。A组细胞早期凋亡率（25．63±0．86）％和总凋亡率（26．21±0．25）％均明显高于B组[（8．01±0．15）％、（8．69±0．13）％]和c组[（6．52±0．12）％、（6．81±0．16）％，P〈0．05]。A组细胞吸光度（A）值（0．589±0．302）明显低于B组（0．823±0．354）和c组（0．921±0．424，P〈0．05）。A组细胞侵袭数（56．24±2．15）明显低于B组（92．31±2．76）和c组（113．24±12．17，P〈0．05）。T24A组c-myc蛋白表达量（0．39±0．03）低于124B组（1．33±0．23）和c组（1．28±0．17，P〈0．05）。结论膀胱癌组织中miRNA-29c的表达量下降，miRNA-29e能够促进膀胱癌细胞凋亡，抑制膀胱癌细胞增殖，降低膀胱癌细胞的侵袭力，miRNA-29c抑制膀胱癌细胞增殖可能和蛋白激酶B（Akt）通路有关。

微小RNA-29b-1＊和微小RNA-29c对膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的 观察微小RNA（miR）-29b-1＊和miR-29c对膀胱癌T24细胞的活性和增殖的影响.方法 构建携带目标miRNAs干扰基因的慢病毒（pGCsil-H1-CMV-GFP）载体、阳性克隆的聚合酶链反应（PCR）鉴定.用293T细胞包装慢病毒形成慢病毒重组体,并用孔稀释法测定滴度.T24细胞中转染慢病毒重组体及转染效率测定.用噻唑蓝（MTT）比色法对4组处于对数生长期的实验组[空细胞对照组、转染阴性对照慢病毒细胞组、转染miR-29b-1＊基因RNA干扰（RNAi）慢病毒细胞组、转染miR-29c基因RNAi慢病毒细胞组]进行连续5d的细胞增殖分析.结果 实时定量PCR（Real-time PCR）验证结果显示：T24细胞中miR-29b-1 ＊和miR-29c表达水平比较于空细胞组分别为3.47和4.40；MTT比色法显示,转染阴性对照慢病毒细胞组与空细胞对照组细胞比较,增殖受到轻度抑制；而转染miR-29b-1＊、miR-29c基因RNAi慢病毒细胞组与染阴性对照慢病毒细胞组和空细胞对照组细胞比较,增殖均受到明显抑制,前者抑制效果更明显.结论 细胞增殖MTT法分析显示通过RNAi降低miR-29b-1＊、miR-29c的表达均能引起T24细胞的增殖抑制.

依普利酮通过靶向微小RNA-192和微小RNA-29a/b/c减轻糖尿病肾病模型大鼠肾损伤机制研究

目的:探讨依普利酮通过靶向微小RNA(miR)-192和miR-29a/b/c减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的机制。方法:将30只成年雄性SD大鼠分为对照组、模型组、依普利酮组,每组10只。通过实时定量PCR(RT-qPCR)分析各实验组大鼠肾脏组织中miR-192和miR-29a/b/c的mRNA表达水平。使用血糖仪检测大鼠血糖,并对大鼠整体和肾脏组织样本进行称重。通过相关商用试剂盒检测大鼠尿蛋白、肌酐和血尿素氮的浓度。通过蛋白印迹分析大鼠肾脏组织中转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Smad家族蛋白3(Smad3)的蛋白表达。通过免疫组化分析大鼠肾脏切片中TGF-β_(1)、Smad3和α-SMA的表达。结果:模型组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平低于对照组,miR-192的mRNA表达水平高于对照组(均P<0.05)。依普利酮组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平高于模型组,miR-192的mRNA表达水平低于模型组(均P<0.05)。模型组体重低于对照组,空腹血糖和肾脏质量/体重高于对照组(均P<0.05)。依普利酮组体重高于模型组,空腹血糖和肾脏质量/体重低于模型组(均P<0.05)。模型组尿蛋白、肌酐和血尿素氮水平高于对照组,而依普利酮组低于模型组(均P<0.05)。三组大鼠GFR比较差异有统计学意义,且模型组低于对照组,依普利酮组高于模型组(均P<0.05)。模型组基底膜变薄,肾小球萎缩,近曲小管损伤,经依普利酮治疗后得到改善。模型组TGF-β_(1)、Smad3和α-SMA平均光密度(MOD)高于对照组,而依普利酮组MOD低于模型组(均P<0.05)。结论:依普利酮通可减轻DN模型大鼠肾损伤,机制与靶向miR-192和miR-29a/b/c表达调控TGF-β_(1)/Smad信号通路有关。

食管鳞状细胞癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c、VEGF-A表达变化及其相关性

目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)癌组织及癌旁组织中miRNA-29家族(miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c)及血管内皮生长因子A(VEGF-A)的相对表达量变化,并探讨他们之间的关系。方法收集手术切除并经病理检查确诊的ESCC癌组织及癌旁组织,应用qRT-PCR及免疫组织化学染色技术分别检测miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c、VEGF-A的相对表达量,并分析其相关关系;进一步应用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因系统推测和验证miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同调控同一靶基因VEGF-A的分子调节机制。结果与癌旁组织比较,ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c呈低表达(P均<0.05);VEGF-A呈高表达(P<0.05),且其之间呈负相关关系(miRNA-29a:r=-0.955;miRNA-29b:r=-0.950;miRNA-29c:r=-0.893,P均<0.01)。生物信息学分析结果发现,VEGF-A能够与miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c进行特异性结合,可能为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因。双荧光素酶报告基因系统验证了VEGF-A是miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因。结论 ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c低表达,VEGFA高表达;且他们之间具有负相关关系。VEGF-A为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶向调节基因。

胶质瘤miR-29c表达异常减少及其对肿瘤细胞增殖的影响

目的：探讨microRNA-29c（miR-29c）在胶质瘤中的表达及其对细胞分裂周期蛋白42（CDC42）的调控作用和对细胞增殖的影响。方法：用锁定寡核苷酸原位杂交法和免疫组织化学法检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29c和CDC42的表达水平，实时荧光定量RT-PCR、Western blot及MTS法分别检测U87MG细胞中miR-29c瞬时表达、CDC42 mRNA和蛋白表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响。结果：各级别胶质瘤的miR-29c表达水平均明显低于非肿瘤对照脑组织，且随肿瘤级别升高而显著降低，各组间的差异均有统计学意义（P〈0.001）。而CDC42表达水平则呈相反趋势，其表达水平随胶质瘤良恶性级别增加相应升高，除Ⅰ～Ⅱ级组与非肿瘤对照组之间外，其余各组间的差异均有统计学意义（P〈0.001）。与对照组相比， miR-29c转染组的CDC42 mRNA（P〈0.001）和蛋白表达水平（P〈0.01）均明显降低。miR-29c转染组细胞的增殖能力明显低于U87MG空白对照组和Scr转染组（P〈0.05）。结论：miR-29c是胶质瘤的抑瘤miRNA，其表达水平可作为评价胶质瘤良恶性级别的重要参考指标。miR-29c在胶质瘤中表达减少解除了其对靶基因CDC42转录后水平的抑制作用，并导致肿瘤细胞无限增殖。表明miR-29c表达异常减少可能是引起胶质瘤发生、发展的关键事件。

非增殖性糖尿病视网膜病变患者血清miR-29c的表达及相关分析

目的 :观察微小RNA-29c(miR-29c)在非增殖性糖尿病视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)患者血清中的表达水平,探讨其在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发病机制中的作用。方法:选择2型糖尿病NPDR患者及无视网膜病变(non-diabetic retinopathy,NDR)患者各30例。收集血清样本,应用荧光定量PCR方法检测血清miR-29c的相对表达水平。应用Pic Tar、Target Scan与Mi Randa软件综合预测miR-29c的靶基因,取三款软件的交集作为最终靶基因。结果:miR-29c在NPDR患者血清中的表达量明显高于NDR组(P<0.05),其表达量与Hb A1c呈显著正相关(r=0.379,P<0.05)。预测miR-29c靶基因集合富集在磷酸肌醇代谢、细胞因子及受体的相互作用、细胞外基质与受体信号作用通路中。结论:NPDR患者血清miR-29c表达显著上调,miR-29c可能通过调控细胞因子的相互作用、磷酸肌醇代谢等途径参与DR的发生发展。

脑胶质瘤患者血清miR-720、miR-29c表达及临床意义

目的探讨miR-720、miR-29c在脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法选取脑胶质瘤患者87例(胶质瘤组),体检健康者50例(对照组),分别采集胶质瘤组手术前后及对照组清晨空腹肘静脉血。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-720和miR-29c表达,分析脑胶质瘤患者血清miR-720、miR-29c表达与其临床病理特征及预后的关系。结果与对照组比较,胶质瘤组术前、术后血清miR-720相对表达量均升高,血清miR-29c相对表达量均降低;与术前相比,胶质瘤组术后血清miR-720相对表达量降低,血清miR-29c相对表达量升高;组间及组内比较P均<0.05。血清miR-720表达与脑胶质瘤肿瘤分化程度呈负相关,血清miR-29c表达与肿瘤分化程度呈正相关(P均<0.05);血清miR-720、miR-29c表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理类型、肿瘤位置、KPS评分均无关(P均>0.05)。脑胶质瘤组miR-720高表达者与低表达者1年生存率分别为74.37%、92.50%,miR-29c高表达者与低表达者1年生存率分别为92.86%、73.33%(33/45),两者比较P均<0.05。结论 miR-720高表达、miR-29c低表达共同促进脑胶质瘤的发生及发展。血清miR-720、miR-29c具有作为脑胶质瘤生物靶标的潜能。

miR-29c通过Tiam1抑制人食管鳞状细胞癌侵袭和转移的研究

目的研究微小RNA(mi R)-29c通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭和迁移的影响。方法通过细胞划痕和transwell实验观察mi R-29c过表达的ESCC细胞侵袭迁移能力的变化;通过免疫印迹法和sensor reporter实验研究mi R-29c对Tiam1的调控作用和靶标位点;在细胞"拯救"实验中通过免疫印迹法检测相关蛋白表达量的变化以及用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变,研究mi R-29c抑制ESCC细胞侵袭迁移的调节机制。结果细胞划痕实验和transwell实验显示mi R-29c能抑制ESCC细胞的侵袭迁移;通过生物信息学方法预测mi R-29c的靶基因是Tiam1;免疫印迹法和sensor reporter检测结果显示mi R-29c通过与Tiam1 3'-非翻译区(UTR)结合降解Tiam1;细胞功能"拯救"实验的细胞划痕、免疫印迹法和免疫荧光结果显示mi R-29c能抑制Tiam1的表达,导致激活态Rac1-三磷酸鸟苷(GTP)减少,致使细胞运动状态改变,迁移能力减弱;而人工合成的针对Tiam1的特异si RNA分子si Tiam1的干涉作用能"拯救"mi R-29C对ESCC细胞迁移能力的抑制。结论 mi R-29C通过降解Tiam1 m RNA,下调了Rac1的激活水平,导致细胞运动状态变化,从而抑制ESCC细胞的侵袭迁移。

肺炎支原体肺炎患儿外周血miR-29c、miR-146a与炎症因子的相关性研究

目的 探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血微小RNA-29c(miR-29c)、微小RNA-146a(miR-146a)与炎症因子的相关性。方法 选取2018年5月至2020年10月于本院诊治的96例MPP患儿为MPP组,同期69例细菌性肺炎患儿为细菌性肺炎组,87例体检健康儿童作为健康对照组。比较三组儿童外周血miR-29c、miR-146a及炎症因子血清白介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平;分析MPP患儿miR-29c、miR-146a与炎症因子的相关性。根据是否发生重症MPP将MPP患儿分为重症组(n=45)和轻症组(n=51),比较不同病情组miR-29c、miR-146a水平。结果 三组儿童外周血miR-29c、miR-146a水平的差异有统计学意义(F值分别是117.929、87.687,P<0.05),MPP组<细菌性肺炎组<健康对照组;炎症因子IL-17、TNF-α、IL-1β水平的差异有统计学意义(F值分别是129.282、107.023、386.649,P<0.05),MPP组>细菌性肺炎组>健康对照组。Pearson相关性分析显示,MPP患儿miR-29c、miR-146a与IL-17、TNF-α、IL-1β均呈负相关(r分别是-0.512、-0.550、-0.494,r分别是-0.329、-0.282、-0.340,P<0.05)。此外,重症MPP患儿miR-29c、miR-146a水平低于轻症组患儿,差异有统计学意义(t值分别是3.477、3.453,P<0.05)。结论 MPP儿童外周血miR-29c、miR-146a呈相对低水平,且与IL-17、TNF-α、IL-1β呈负相关关系;miR-29c、miR-146a可能参与MPP发病过程,其水平随病情加重而降低。

二甲双胍通过miR-29c调控SIRT1/PGC-1α通路减轻脑卒中大鼠神经损伤

目的:探究二甲双胍(MET)减轻脑卒中大鼠神经损伤的作用及其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术(sham)组(n=15)、模型(model)组(n=30)、MET(100 mg·kg^(−1)·d^(−1))组(n=30)、MET(100 mg·kg^(−1)·d^(−1))+agomir-NC(40 nmol/d)组(n=30)和MET(100 mg·kg−1·d−1)+agomir(40 nmol/d miR-29c agomir)组(n=30)。采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备全脑缺血脑卒中模型,sham组大鼠只分离血管,不夹闭总动脉。造模前1周,给予MET组、MET+agomir-NC组和MET+agomir组大鼠腹腔注射相应药物,而sham组和model组腹腔注射等量生理盐水,以上各组均每天1次,每次0.2 mL,连续7 d。分别于术后24、48和72 h检测各组大鼠神经功能缺损评分,HE染色观察海马组织形态学变化并计数存活神经元,RT-qPCR检测海马组织miR-29c、沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的mRNA水平,Western blot法检测SIRT1和PGC-1α的蛋白表达水平。结果:在相同时点,与model组比较,MET组大鼠神经功能缺损评分显著降低,神经元存活率显著增加(P<0.05);与MET+agomir-NC组比较,MET+agomir组大鼠神经功能缺损评分显著升高,神经元存活率显著降低(P<0.05)。随着时间的延长,除sham组外,其余各组大鼠神经功能缺损评分呈升高趋势,神经元存活率呈降低趋势。术后72 h,与sham组比较,model组大鼠海马miR-29c表达水平显著升高,SIRT1和PGC-1α的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与model组比较,MET组大鼠海马miR-29c表达水平显著降低,SIRT1和PGC-1α的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与MET+agomir-NC组比较,MET+agomir组大鼠海马miR-29c表达水平显著升高,SIRT1和PGC-1α的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:MET能够缓解脑卒中大鼠神经损伤,这可能与其下调miR-29c、促进SIRT1/PGC-1α通路激活有关。

CT分级联合血清miR-29c对重症急性胰腺炎预后评估的研究

目的探讨CT分级联合血清微小RNA-29c对重症急性胰腺炎(SAP)预后的评估作用。方法回顾性选取2014年6月至2019年11月于西部战区总医院就诊的SAP患者165例,根据患者预后分为生存组(n=91)和死亡组(n=74)。收集患者CT影像学资料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测2组血清miR-29c水平,采用Logistic回归分析影响SAP患者死亡的危险因素,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析CT分级联合血清miR-29c对SAP不良预后的预测价值。结果死亡组D级患者所占比例(24.32%)显著低于生存组(79.12%),E级患者所占比例(75.68%)显著高于生存组(20.88%),差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组SAP患者血清miR-29c水平(1.04±0.24)低于生存组(2.41±0.72),差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,急性生理与慢性健康评估Ⅱ(APACHEⅡ)评分、Balthazar CT分级、血清miR-29c均是影响SAP患者死亡的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线显示,CT分级及血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积为0.774、0.873,两者联合预测的曲线下面积为0.896,敏感度与特异度分别为90.1%、94.6%。结论CT分级、血清miR-29c均是影响SAP患者死亡的独立危险因素,应用CT分级联合血清miR-29c共同评估SAP患者的预后具有一定临床指导意义。

miR-29c通过下调TNFR1信号通路减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤

目的:探讨微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制。方法:构建慢病毒(lentivirus,LV)介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22,分为空载体细胞株(LV-vector)组、LV-vector+TNF-α组、miR-29c过表达细胞株(LV-miR-29c)+TNF-α组和miR-29c低表达细胞株(LV-miR-29c sponge)+TNF-α组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验评价TNF-α对HT22细胞的毒性作用;免疫荧光染色观察肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)的表达;RT-qPCR检测miR-29c和TNFR1 mRNA的表达;Western blot检测TNFR1、TNFR相关死亡域蛋白(TNFR-associated death domain protein,TRADD)、Fas相关死亡结构域蛋白(Fasassociated death domain protein,FADD)、pro-caspase-8、cleaved caspase-8、pro-caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平;Hoechst和TUNEL染色检测细胞凋亡率。结果:(1)CCK-8和LDH释放实验结果显示,与LV-vector组相比,LVvector+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组细胞活力显著上升(P<0.05),且LDH释放显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05)。(2)RT-qPCR和免疫荧光结果显示,与LV-vector组相比,LVvector+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1表达显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05)。(3)Western blot结果显示,与LVvector组相比,LV-vector+TNF-α组细胞中TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平表达显著下调(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05)。(4)Hoechst和TUNEL染色结果显示,与LV-vector组相比,LV-vector+TNF-α组凋亡细胞数目显著增加(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组凋亡细胞数目显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c+sponge+TNF-α组凋亡细胞数显著增加(P<0.05)。结论:miR-29c减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤,其机制可能与抑制TNFR1信号通路激活导致的细胞凋亡有关。

miR-29c在肾纤维化大鼠中的表达水平及其与肾间质纤维化程度的关系

目的探讨miR-29c在肾纤维化大鼠中的表达水平及其与肾间质纤维化(RIF)程度的关系。方法将20只4周龄雄性SD大鼠随机分为单侧输尿管梗阻(UUO)组和假手术组(Sham组),各10只。结扎UUO组大鼠左侧输尿管,仅游离Sham组大鼠输尿管但不结扎。造模后3 d、7 d,比较两组大鼠血清和肾组织中miR-29c的表达水平、肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad3蛋白表达水平,以及RIF程度评分,并采用Spearman秩相关检验分析血清和肾组织中miR-29c表达水平与RIF程度的关系。结果造模后3 d、7 d,UUO组大鼠的血清和肾组织中miR-29c表达水平均低于Sham组,肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平均高于Sham组,RIF程度评分高于Sham组;建模后7 d,UUO组血清和肾组织miR-29c表达水平较建模后3 d降低,肾组织TGF-β1、Smad3蛋白表达水平和RIF程度评分较建模后3 d升高(均P<0.05)。相关性分析显示,UUO组大鼠血清和肾组织中miR-29c表达水平与肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平及RIF程度评分均呈负相关(均P<0.05)。结论肾纤维化大鼠血清与肾组织中的miR-29c表达水平降低,且与RIF程度呈负相关,miR-29c可能通过调节TGF-β1/Smad3通路参与RIF的发生与发展。

CT分级联合血清miR-29c对重症胰腺炎预后评估的研究

目的:探讨CT分级联合血清微小RNA-29c(miR-29c)对重症胰腺炎(SAP)预后的评估作用。方法:回顾性分析2015年6月-2019年11月于本院就诊的139例SAP患者的资料。根据患者预后结果分为生存组108例和死亡组31例。收集患者CT影像学资料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测各组血清miR-29c水平,采用logistic回归分析影响SAP患者死亡的危险因素,采用ROC曲线分析CT分级联合血清miR-29c对SAP不良预后的预测价值。结果:死亡组D级患者所占比例低于生存组,E级患者所占比例高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组SAP患者血清miR-29c水平低于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组白细胞、红细胞、血红蛋白、白蛋白、C反应蛋白及血淀粉酶指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);死亡组SAP患者APACHEⅡ评分高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析结果显示,APACHEⅡ评分、CT分级、血清miR-29c水平均是影响SAP患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,CT分级预测SAP不良预后的曲线下面积为0.626,灵敏度为61.3%,特异度为63.9%。血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积为0.966,灵敏度为96.8%,特异度为88.9%。CT分级联合血清miR-29c预测SAP不良预后的曲线下面积为0.972,灵敏度为96.8%,特异度为90.7%。结论:CT分级、血清miR-29c均是影响SAP患者死亡的独立危险因素,应用CT分级联合血清miR-29c共同评估SAP患者的预后具有一定临床指导意义。

miR-29c和NASP在非小细胞肺癌细胞中的表达、对后者生物学行为影响及靶向关系预测验证

目的观察非小细胞肺癌细胞A549中微小RNA-29c(miR-29c)、细胞核自身抗原精子蛋白(NASP)的表达变化,探讨二者对非小细胞肺癌细胞A549增殖迁移侵袭和凋亡的影响,并预测、验证二者之间的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞A549与正常人肺上皮细胞HBE,采用qRT-PCR法检测细胞中miR-29cmRNA、NASP mRNA,Western blotting法检测细胞中NASP蛋白。将非小细胞肺癌细胞A549分为miR-NC组(转染miR-29c阴性对照序列)、miR-29c组(转染miR-29c过表达序列)、si-NC组(转染NASP沉默阴性对照序列)、si-NASP组(转染NASP沉默序列)、miR-29c+NC组(miR-29c过表达序列和NASP过表达阴性对照序列共转染)和miR-29c+NASP组(miR-29c过表达和NASP过表达序列共转染)。采用CCK8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术测算各组细胞的凋亡率;Transwell法检测各组细胞迁移、侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测试验鉴定miR-29c与NASP之间的靶向关系。结果与正常肺上皮细胞HBE相比,非小细胞肺癌细胞A549中的miR-29c表达降低,NASP表达升高(P均<0.05)。与miR-NC组相比,miR-29c组A549细胞增殖活性减弱,凋亡率升高,迁移、侵袭个数减少(P均<0.05)。与si-NC组相比,si-NASP组A549细胞增殖活性减弱,凋亡率升高,迁移、侵袭个数减少(P均<0.05)。与miR-29c+NC组相比,miR-29c+NASP组A549细胞增殖活性升高,凋亡率降低,迁移、侵袭个数增加(P均<0.05)。双荧光素酶实验证实miR-29c与NASP之间存在靶向关系。结论非小细胞肺癌细胞A549中miR-29c呈高表达、NASP呈低表达。miR-29c抑制肺癌A549细胞增殖和迁移侵袭,并促进其凋亡,而NASP促进肺癌A549细胞的增殖和迁移侵袭,并抑制其凋亡,并且过表达NASP可逆转miR-29c对A549细胞增殖和迁移、侵袭能力的抑制作用和对其凋亡的诱导作用。miR-29c与NASP之间存在靶向关系。

血清miR-224、miR-29c表达在ST段抬高型心肌梗死患者预后评估中的价值

目的探讨血清微小RNA-224(miR-224)、微小RNA-29c(miR-29c)表达水平在急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者预后评估中的价值。方法选取2017年1月至2019年12月于该院确诊为STEMI且行经皮冠状动脉介入(PCI)治疗的患者222例为研究对象,依据12个月随访期内是否发生主要不良心血管事件(MACE)将STEMI患者分为MACE组、非MACE组。比较两组患者一般资料及血清miR-29c、miR-224表达水平差异;采用乘积极限法(K-M)法分析患者生存情况,并采用COX回归分析影响STEMI患者预后的相关因素。结果222例STEMI患者在12个月随访期内,有52例患者发生MACE,发生率为23.42%。与非MACE组相比,MACE组LVEF、miR-224、miR-29c水平均较低(P<0.05),TG、LDL-C水平均较高(P<0.05)。miR-224高水平患者无进展生存期均值为11.450个月,miR-224低水平患者无进展生存期均值为10.847个月;miR-29c高水平患者无进展生存期均值为11.495个月,miR-29c低水平患者无进展生存期均值为10.802个月;miR-224、miR-29c高水平患者无进展生存率均明显高于miR-224、miR-29c低水平患者(Long-rank检验χ^(2)=9.749、15.933,P<0.05)。COX回归模型结果显示,低LVEF、LDL-C高水平、miR-224低水平、miR-29c低水平均是STEMI患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论血清miR-224低水平、miR-29c低水平是STEMI患者预后的独立危险因素,可能成为预测STEMI患者预后的潜在指标。

血清miR-29c、bFGF水平与糖尿病视网膜病变的关系

目的探讨血清微小RNA-29c(miR-29c)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法选取154例2型糖尿病(T2DM)患者,根据是否合并视网膜病变分为DR组(n=65)和NDR组(n=89),另选取同期64例体检健康者为对照组。Spearman相关性分析DR组血清miR-29c与bFGF水平的相关性,多因素Logistic回归分析DR发生影响因素,ROC曲线分析血清miR-29c、bFGF水平对DR的诊断价值。结果对照组、NDR组、DR组血清miR-29c、bFGF水平逐渐升高(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,DR组血清miR-29c与bFGF水平呈正相关(rs=0.593,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,病程(OR=1.132,95%CI:1.046~1.226)、糖化血红蛋白(HbA1c)(OR=2.021,95%CI:1.499~2.725)、miR-29c(OR=2.113,95%CI:1.132~3.943)、bFGF(OR=3.808,95%CI:1.178~5.304)为DR独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-29c与bFGF联合诊断DR的灵敏度、特异度(76.92%和83.15%)均高于单独miR-29c(64.62%和78.65%)、bFGF(75.38%和60.67%)诊断。结论T2DM患者血清miR-29c、bFGF水平明显升高,两者密切相关,共同参与了视网膜病变发生,联合检测血清miR-29c、bFGF水平可提升DR诊断效能。