微小RNA-302b在急性心肌梗死患者血清中的表达及临床意义

目的检测微小RNA-302b(miR-302b)在急性心肌梗死(AMI)患者血清中的表达,并探讨其与心肌损伤的关系。方法选取2016年陕西省第四人民医院72例AMI患者为AMI组,采用随机数字表法选取同期体检的48名健康人作为对照组。两组均通过实时荧光定量PCR法检测血清miR-302b含量(AMI组患者在临床确诊后12 h内检测),spearman法分析血清miR-302b表达与心肌酶谱的相关性。结果miR-302b在AMI组患者血清中的相对表达量显著高于对照组(3.14±0.76比1.13±0.22,t=17.706,P<0.001);AMI患者的血清miR-302b相对表达量与天门冬氨酸氨基转移酶(r=0.428,P=0.017)、乳酸脱氢酶(r=0.519,P=0.045)、肌酸激酶同工酶(r=0.718,P=0.003)和心肌肌钙蛋白I(r=0.772,P<0.001)呈正相关。ROC曲线分析示miR-302b诊断AMI的敏感度为88.6%、特异度为64.3%。结论miR-302b在AMI患者血清中呈高表达,并与心肌损伤相关。

血清微小RNA-302b在老年急性心肌梗死患者中的诊断价值

目的:探讨微小RNA-302b在老年急性心肌梗死(AMI)患者中的表达及诊断价值。方法:选取125例老年AMI患者(AMI组)和56例健康体检者(对照组),比较两组血清miR-302b、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平的变化。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平对老年AMI诊断的价值。老年AMI患者miR-302b水平与cTnI、CK-MB的相关性分析采用Pearson相关分析。结果:AMI组血清miR-302b(4.20±1.27对0.48±0.14)、cTnI[(3.13±1.32)ng/mL对(0.03±0.01)ng/mL]及CK-MB[(70.42±19.15)U/L对(10.63±2.24)U/L]水平均明显高于对照组(P均<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-302b、cTnI及CK-MB诊断AMI的临界值分别为2.68、1.50 ng/mL、60.74 U/L,3项联合诊断老年AMI的曲线下面积(AUC)最大,为0.932(95%CI:0.870~0.981),其敏感度和特异度为94.5%和89.0%。相关分析显示,老年AMI患者血清miR-302b表达水平与cTnI(r=0.817)和CK-MB(r=0.726)均呈正相关(P均<0.01)。结论:血清miR-302b在老年AMI患者中呈高表达,与cTnI、CK-MB联合检测有助于提高老年AMI诊断的敏感度和特异度。

宫颈癌组织微小RNA-99b表达与患者临床病理及信号转导和转录激活因子3/血管内皮生长因子通路相关性分析

目的 探讨宫颈癌组织微小RNA-99b(miR-99b)表达与患者临床病理及信号转导和转录激活因子3(STAT3)/血管内皮生长因子(VEGF)通路相关性;方法 选取2019年5月—2022年5月丽水市人民医院收治的72例宫颈癌患者为研究对象,分别取患者癌症组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR检测患者miR-99b、STAT3及VEGF的mRNA表达水平,分析宫颈癌组织miR-99b表达与患者临床病理特征的关系,采用Spearman相关系数分析miR-99b表达与STAT3和VEGF表达的相关性。结果 宫颈癌组织miR-99b mRNA表达水平(0.89±0.35)明显低于癌旁组织(1.45±0.64),差异有统计学意义(t=6.514、P>0.05);临床TNMⅢ~Ⅳ期、病理中高分化、有淋巴转移患者的miR-99b表达水平[(0.81±0.30)、(0.78±0.34)、(0.84±0.28)]明显低于Ⅰ~Ⅱ期、低分化、无淋巴转移患者[(1.04±0.33)、(0.97±0.23)、(1.06±0.20)],差异均有统计学意义(t=3.117、2.813、3.569,均P<0.05);miR-99b高水平表达组的STAT3、VEGF的mRNA表达水平[(0.59±0.16)、(0.67±0.22)]明显低于低水平表达组[(0.75±0.22)、(0.82±0.35)],差异均有统计学意义(t=3.574、2.235,均P<0.05);miR-99b mRNA表达与STAT3、VEGF的mRNA表达呈负相关(r=-0.747、-0.684,均P<0.05)。结论 miR-99b在宫颈癌组织呈低水平表达程度,其表达水平与宫颈癌患者临床TNM分期、病理分化程度、淋巴结转移有关。miR-99b表达与STAT3、血管内皮生长因子的表达呈负相关。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA-20b对头晕患者发生缺血性卒中有预测价值

目的:探讨年龄、血压、单侧肢体无力和言语障碍、持续时间、糖尿病(ABCD2)评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA(miRNA)-20b对头晕患者发生缺血性卒中(IS)的预测价值。方法:收集148例头晕患者,根据是否发生IS分为IS组(109例)和非IS组(39例)。比较分析2组患者一般资料、ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平。多因素Logistic回归分析头晕患者发生IS影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、miR-20b水平对评估头晕患者发生IS的预测价值。结果:IS组年龄、高血压史比例、ABCD2评分、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、泛连接蛋白水平明显高于非IS组,miR-20b水平明显低于非IS组(P均<0.05)。LDL-C升高(OR=2.575,95%CI:1.497~3.353)、ABCD2评分>3分(OR=3.069,95%CI:2.242~5.408)、泛连接蛋白升高(OR=1.089,95%CI:1.018~1.187)为头晕患者发生IS独立影响因素(P均<0.05),miR-20b为独立保护因素(OR=0.351,95%CI:0.220~0.559,P<0.05)。3个指标联合预测头晕患者发生IS的曲线下面积(AUC=0.859,95%CI:0.791~0.926)明显大于ABCD2评分(AUC=0.759,95%CI:0.669~0.849)、泛连接蛋白(AUC=0.656,95%CI:0.554~0.759)、miR-20b(AUC=0.821,95%CI:0.750~0.893)单独预测(P均<0.05)。结论:ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平为头晕患者发生IS独立影响因素,3个指标联合对头晕患者IS风险有预测价值。

环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、微小RNA-302e、核因子-κB mRNA水平变化及意义

目的:探讨毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-302e、核因子-κB(NF-κB)mRNA水平变化及意义。方法:选取毛细支气管炎患儿108例为研究对象,均行糖皮质激素治疗。比较糖皮质激素治疗前后患儿血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平变化。采用Pearson法分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA间的相关性。根据糖皮质激素治疗效果将患儿分为有效组和无效组,比较不同疗效患儿一般资料及生化指标。分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平对糖皮质激素治疗效果的影响,以及它们对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值。结果:糖皮质激素治疗后患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平低于治疗前,miR-302e水平高于治疗前(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患儿血清IL-6与TNF-α、NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.512、0.564,均P<0.05),与miR-302e呈负相关(r=-0.573,P<0.05);患儿血清TNF-α与NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.521,P<0.05),与miR-302e水平呈负相关(r=-0.559,P<0.05);患儿血清miR-302e与NF-κB mRNA水平呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。无效组患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平,以及重度病情患儿占比高于有效组,miR-302e水平低于有效组(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平异常以及病情严重程度(重度)是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素(均P<0.05)。血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值高于上述指标单独预测。结论:经糖皮质激素治疗后,毛细支气管炎患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平降低,miR-302e水平升高,四者水平异常是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素,联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值更高。

外周血单个核细胞中微小RNA200c-3p、核因子κB mRNA和膜联蛋白-5 mRNA对儿童哮喘诊断价值的比较研究

目的比较外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA200c-3p(miRNA-200c-3p)、核因子κB(NF-κB)mRNA和膜联蛋白-5(ANX-5)mRNA对儿童哮喘的诊断价值。方法纳入2022年12月至2023年12月间在唐山市妇幼保健院儿科就诊的95例哮喘儿童作为哮喘组,并分成轻度组(30例),中度组(36例),重度组(29例),同期来该院体检健康儿童40例为对照组。使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测单个核细胞中miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA的表达量。测量肺功能、1s用力呼气量(FEV 1)、用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)及FEV 1/FVC值。采用Spearman分析miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA与肺功能的相关性。使用受试者工作特征(ROC)曲线比较miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA对哮喘的诊断价值。结果miRNA-200c-3p和NF-κB mRNA表达水平在重度组、中度组、轻度组及对照组间差异显著(F=12.58和14.81,P<0.01),并依次降低。ANX-5 mRNA表达水平在四组间差异显著(F=16.34,P<0.01),并依次升高。哮喘患儿单个核细胞中miR-200c-3p和NF-κB mRNA,与FEV 1、PEF、FEV 1/FVC均呈负相关(r介于-0.80~-0.48,P<0.05),ANX-5 mRNA与FEV 1、PEF、FEV 1/FVC呈正相关(r介于0.48~0.83,P<0.001)。ROC曲线显示,外周血PBMCs中miR-200c-3p诊断儿童哮喘的AUC为0.858,敏感度为0.760,特异度为0.893,截断值为2.24,高于NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA单独诊断儿童哮喘。结论单个核细胞中miRNA-200c-3p对儿童哮喘的诊断效能优于NF-κB mRNA及ANX-5 mRNA单独诊断,是儿童哮喘诊断的敏感分子标志物。

环状RNA GRIN2B通过调控微小RNA-135b对食管癌细胞增殖和侵袭的影响实验研究

目的:探讨环状RNA GRIN2B(circ-GRIN2B)对食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用RT-qPCR检测circ-GRIN2B在食管癌细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706和正常食管上皮细胞HET-1A中的表达,筛选circ-GRIN2B表达最低的细胞株进行后续实验。在食管癌细胞中转染circ-GRIN2B过表达质粒(circ-GRIN2B组)和空载对照质粒(NC组)。采用平板克隆实验和Transwell实验检测circ-GRIN2B对食管癌细胞增殖和侵袭的影响。采用circRNADb软件预测circ-GRIN2B与微小RNA-135b(miR-135b)的结合位点并用双荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系。采用RT-qPCR检测两组miR-135b表达。采用Western blot检测细胞增殖相关蛋白[周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)、周期素C(Cyclin C)]和侵袭相关蛋白[纤维结合蛋白(FN)、转录因子8(ZLF8)、叉头盒蛋白C2(FOXC2)]表达。结果:与HET-1A细胞比较,circ-GRIN2B在细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706表达降低,且在EC9706细胞中表达量最低(均P<0.05)。circ-GRIN2B组circ-GR IN2B表达量高于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞集落数量少于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞侵袭数目小于NC组(P<0.01)。miR-135b是circ-GRIN2B的靶基因。circ-GRIN2B组miR-135b表达量低于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞增殖相关蛋白和侵袭相关蛋白表达水平较NC组降低(均P<0.05)。结论:circ-GRIN2B在食管癌细胞中低表达,其可能通过下调miR-135b表达抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。

晚期结直肠癌患者血清微小RNA-199b和微小RNA-203水平检测及其预后预测价值分析

目的:检测晚期结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-199b和miR-203水平,分析其对患者预后的预测价值。方法:选择Ⅳ期结直肠癌患者92例为结直肠癌组,选择结直肠炎患者92例为对照组。采用逆转录聚合酶链式反应检测两组血清miR-199b及miR-203水平并进行比较。根据结直肠癌患者12个月随访结果分为病死组和生存组,分析晚期结直肠癌患者预后的影响因素,评价血清miR-199b及miR-203对晚期结直肠癌患者预后的预测价值,并进行生存分析。结果:结直肠癌组血清miR-199b、miR-203低于对照组(均P<0.05)。92例Ⅳ期结直肠癌患者中病死36例,纳入病死组,其余患者纳入生存组。病死组血清基质金属蛋白酶-14(MMP-14)、趋化因子受体4(CXCR4)水平高于生存组,血清miR-199b、miR-203低于生存组(均P<0.05)。MMP-14和CXCR4是晚期结直肠癌患者病死的风险因素,miR-199b和miR-203是晚期结直肠癌患者病死的保护因素(均P<0.05)。miR-199b与MMP-14、CXCR4呈负相关(r=-0.403、-0.458,均P<0.05),miR-203与MMP-14、CXCR4呈负相关(r=-0.461、-0.479,均P<0.05)。血清miR-199b、miR-203对晚期结直肠癌患者病死均有一定预测价值,且两项联合优于单项(均P<0.05)。血清miR-199b和miR-203高表达组生存率高于低表达组(均P<0.05)。结论:晚期结直肠癌患者血清miR-199b、miR-203水平降低,对患者预后具有良好的预测价值,且两项联合预测价值更高。

微小RNA-29b通过转化生长因子-β1/Smad信号通路在间质性肺疾病A549细胞上皮-间质转化中的作用机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-29b通过调控转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路对间质性肺疾病(ILD)A549细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响机制。方法 将A549细胞分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1)、miR-29b过表达组(TGF-β1+转染miR-29b mimic)和NC组(TGF-β1+转染miR-NC)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-29b及TGF-β1 mRNA表达水平;采用CCK-8、划痕实验与Transwell检测细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;采用Western blot检测TGF-β/Smad通路相关蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,TGF-β1诱导组和NC组miR-29b表达水平、各时间点细胞增殖抑制率下降,TGF-β1 mRNA表达水平、侵袭细胞数量、划痕愈合率、TGF-β1、p-Smad2、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平均上升;与TGF-β1诱导组和NC组比较,miR-29b过表达组miR-29b表达水平、细胞增殖抑制率均升高,TGF-β1 mRNA表达水平、侵袭细胞数量和划痕愈合率、TGF-β1、p-Smad2、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05)。结论 miR-29b可通过调节TGF-β1/Smad信号通路阻止EMT进程而抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭。

微小RNA-129-5p和高迁移率族蛋白B1在缺血性脑卒中患者中的表达水平及临床意义

目的探讨微小RNA-129-5p(miR-129-5p)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在缺血性脑卒中(IS)患者中的表达水平及临床意义。方法选取2019年2月至2021年2月河北省第七人民医院收治的94例IS患者为观察组,另选取75例健康体检者为对照组。根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将观察组分为轻度组32例、中度组43例、重度组19例。根据90 d随访的改良Rankin量表评分分为预后良好组65例,预后不良组29例。检测血清miR-129-5p、HMGB1水平,并收集观察组临床资料。采用Pearson相关性分析血清miR-129-5p和HMGB1的关系。多因素Logistic回归分析IS患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-129-5p和HMGB1对IS患者预后的预测价值。结果观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平与对照组相比差异有统计学意义(t=3.038、24.863,P<0.05)。观察组血清miR-129-5p水平随神经功能缺损程度的加重而降低,HMGB1水平随之升高(F=83.466、8.423,P<0.05)。Pearson相关性分析显示,观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平呈负相关(r=-0.406,P<0.05)。预后良好组和预后不良组的同型半胱氨酸、梗死体积、入院时NIHSS评分、发病到入院时间、miR-129-5p和HMGB1水平间差异具有统计学意义(t=4.636、4.034、11.618、19.522、8.063、6.177,P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-129-5p和HMGB1水平对IS患者预后不良预测价值的曲线下面积分别为0.832、0.859。多因素Logistic回归分析显示,患者入院时NIHSS评分、发病到入院时间、HMGB1、miR-129-5p是IS患者预后不良的影响因素(OR=5.361、4.465、7.245、0.806,P<0.05)。结论IS患者血清miR-129-5p低水平、HMGB1高水平与神经功能缺损程度有关,且对不良预后有一定的预测价值。

慢性阻塞性肺疾病患者血清微小RNA-218、微小RNA-29b水平变化及对急性加重期的预测价值

目的探究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清微小RNA-218(miR-218)、微小RNA-29b(miR-29b)水平的变化及其对COPD急性加重期的预测价值。方法选取2022年5月至2023年5月于湖北民族大学附属民大医院治疗的116例COPD患者为病例组,根据入院后28 d的病情分为加重组(68例)和稳定组(48例);另选取同期116例体检健康者为对照组。采用荧光定量PCR法测定血清中miR-218、miR-29b的水平,采用多因素logistic回归分析COPD急性加重期的影响因素,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-218、miR-29b水平对COPD急性加重期的预测价值。结果病例组血清miR-218、miR-29b水平明显低于对照组(P<0.05)。加重组患者的年龄、性别、体重指数以及合并高血压、糖尿病、高脂血症的比例与稳定组比较差异无统计学意义(P>0.05),病程及吸烟史比例高于稳定组(P<0.05),miR-218、miR-29b水平均低于稳定组(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,miR-218、miR-29b为COPD急性加重期的独立保护因素(P<0.05),病程、吸烟史为COPD急性加重期的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-218、miR-29b水平预测COPD急性加重期的曲线下面积(AUC)分别为0.797、0.775,二者联合预测的AUC为0.876,优于单独预测(Z二者联合-miR-218=2.162、Z二者联合-miR-29b=2.296,P=0.031、0.022),二者联合预测的敏感度为95.59%,特异性为64.58%。结论COPD患者血清miR-218、miR-29b水平明显下调,且为COPD急性加重期的独立保护因素,二者联合应用对COPD急性加重期具有更高的预测价值。

TRIM52-AS1靶向微小RNA-378a-3p对乳腺癌细胞迁移侵袭和NF-κB信号通路的影响

目的阐述TRIM52反义RNA 1(TRIM52-AS1)靶向微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的生物学作用。方法qPCR检测乳腺癌细胞中TRIM52-AS1的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证TRIM52-AS1和miR-378a-3p的靶向关系,培养BT474细胞并进行分组:siRNA-NC组(阴性对照)、siRNA-TRIM52-AS1组(沉默TRIM52-AS1表达)和siRNA-TRIM52-AS1+miR-378a-3p inhibitor组(同时沉默TRIM52-AS1和miR-378a-3p表达)。噻唑蓝比色(MTT)法、划痕实验和Transwell实验检测BT474细胞的增殖、迁移和侵袭情况,Western blot检测磷酸化核因子κB(NF-κB)p65、核因子κB抑制蛋白(IKBα)的磷酸化水平。结果TRIM52-AS1在乳腺癌细胞中高表达(P<0.05)。与siRNA-NC组比较,siRNA-TRIM52-AS1组细胞的增殖、迁移和侵袭能力减弱及p-p65水平降低和p-IKBα水平升高(P<0.05)。miR-378a-3p是TRIM52-AS1的靶基因且受TRIM52-AS1的负调控。siRNA-TRIM52-AS1+miR-378a-3p inhibitor组较siRNA-TRIM52-AS1组细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强,且p-IKBα水平降低及p-p65水平升高(P<0.01)。结论TRIM52-AS1通过靶向miR-378a-3p促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭,调控NF-κB信号通路活性。TRIM52-AS1作为癌症驱动因子,可能成为乳腺癌的潜在治疗靶点。

miRNA-302b在结肠癌HT-29细胞“干性”维持中的作用

目的探讨miRNA-302b在结肠癌HT-29细胞"干性"维持中的作用及可能机制。方法体外培养人结肠癌细胞株HT-29,转染miRNA-302b模拟物(miRNA-302b mimics),同时以未转染组(control)和阴性模拟物转染组(negative control-mimics,NC-mimics)作为对照,采用实时定量反转录聚合酶链反应法(real-time PCR)检测HT-29细胞结肠癌"干性"标志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2mRNA的表达情况;采用蛋白印迹法(Western blot)检测以上"干性"标志蛋白表达的变化;采用克隆形成实验及干细胞成球实验分别观察HT-29细胞克隆形成和细胞球形成能力的变化。结果 Realtime PCR结果示,miR-302b mimics转染HT-29细胞48 h,"干性"标志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2 mRNA表达一致性上调(P<0.05);Western blot结果示Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2蛋白表达也上调(P<0.05)。克隆形成实验及干细胞成球实验结果示,miR-302b mimics转染后HT-29细胞克隆形成和细胞球形成能力增强,与control组和NC-mimics组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-302b可通过上调"干性"标志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2的表达促进HT-29细胞的克隆形成和细胞球形成能力,从而在结肠癌"干性"维持中发挥重要作用。

微小RNA-133b对心肌纤维化的影响

目的研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Westernblot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。结果qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133bmimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133binhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs21、45、69、93和117h后,与阴性对照组相比,miR-133bmimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133binhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagenⅢ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagenⅢ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133bmimic和WT3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimiccontrol和WT3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133bmimic和MUT3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimiccontrol和MUT3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。

婴儿血管瘤组织中微小RNA-130a、B淋巴细胞瘤-2的表达观察

目的观察婴儿血管瘤(Infantile hemangioma,IH)组织中微小RNA(micro RNA,miR)-130a、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达变化。方法 33例IH患者,其中增殖期17例、退化期16例,留取IH组织、瘤旁正常皮肤组织。采用荧光实时定量PCR法检测IH组织、瘤旁正常皮肤组织中miR-130a和Bcl-2 mRNA,采用SP免疫组织化学法检测IH组织、瘤旁正常皮肤组织BCl-2蛋白,分析IH组织miRNA-130a、Bcl-2 mRNA表达的相关性。结果 IH组织、瘤旁正常皮肤组织中miR-130a相对表达量分别为3.71±1.23、 0.87±0.21,退化期、增殖期IH组织miRNA-130a相对表达量分别为3.68±1.40 、3.72±1.63;IH组织及瘤旁正常皮肤组织Bcl-2 mRNA相对表达量分别为1.213±0.272 、0.614±0.22,退化期、增殖期IH组织Bcl-2 mRNA相对表达量比较分别为3.68±1.40 、 3.72 ±1.63,与瘤旁正常皮肤组织比较,退化期、增殖期IH组织miRNA-130a及Bcl-2 mRNA相对表达量均升高( P 均<0.05)。与瘤旁正常皮肤组织比较,IH组织Bcl-2蛋白光密度值和阳性面积率均升高( P 均<0.05);与退化期IH组织、瘤旁正常皮肤组织比较,增殖期IH组织Bcl-2蛋白光密度值和阳性面积率均升高( P 均<0.05)。IH组织中miR-130a 与Bcl-2 mRNA的表达呈正相关( r =0.451, P =0.008)。结论IH组织miR-130a、Bcl-2 mRNA及蛋白表达均升高,增殖期IH组织Bcl-2蛋白表达高于退化期。miR-130a、Bcl-2可能协同促进IH的发生、发展。

微小RNA-148b在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨微小RNA(miRNA)-148b在乳腺癌中的表达及意义。方法选取2008年3月—2010年3月我院肿瘤外科乳腺癌患者手术切除标本80例(乳腺肿瘤组织)、乳腺癌旁组织标本80例及正常乳腺组织标本20例。采用real-time PCR技术检测miRNA-148b水平;乳腺肿瘤细胞培养,分为空白对照组不加任何药物,阴性对照组加入安慰剂处理细胞,抑制剂组加入5-氟尿嘧啶10μg/ml预先处理细胞48 h,进行MDA-MB-231细胞培养与转染。结果正常乳腺组织、乳腺癌旁组织、乳腺肿瘤组织中miRNA-148b表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001);其中乳腺肿瘤组织中miRNA-148b表达量较正常乳腺组织和乳腺癌旁组织均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染24 h后,空白对照组、阴性对照组、抑制剂组中miRNA-148b表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001);其中抑制剂组中miRNA-148b表达量较空白对照组和阴性对照组均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3组转染24 h后MDA-MB-231细胞增殖比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组转染48、72 h后MDA-MB-231细胞增殖比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中转染48、72 h后抑制剂组较空白对照组和阴性对照组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miRNA-148b在人乳腺癌组织及MDA-MB-231细胞株中的表达较正常及癌旁组织低,并且在高表达水平的同时也伴有细胞增殖升高的特点。通过转染miRNA-148b抑制剂后,miRNA-148b表达水平明显上调,细胞增殖现象下降。miRNA-148b可能在乳腺癌的发生及发展阶段都发挥着重要的作用。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-20b、微小RNA-199a水平与神经功能缺损程度及侧支循环形成的关系

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA(miRNA)-20b、miRNA-199a水平与神经功能缺损程度及侧支循环形成的关系。方法选择126例AIS患者为观察组,根据脑侧支循环形成情况进一步分为一级侧支循环组(45例)、二级侧支循环组(41例)、三级侧支循环组(40例),另选取126例健康体检者为对照组。采用实时定量PCR法检测两组研究对象血清miRNA-20b、miRNA-199a的相对表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测3组AIS患者血清缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,采用中国卒中量表(CSS)评估患者入院时神经功能缺损程度。比较观察组和对照组的血清miRNA-20b、miRNA-199a水平,3组AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a、HIF-1α、VEGF水平及CSS评分,分析AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a水平与CSS评分、HIF-1α、VEGF水平的相关性。结果观察组血清miRNA-20b、miRNA-199a的相对表达水平均高于对照组(均P<0.05)。随着侧支循环级数增加,AIS患者的CSS评分、血清miRNA-20b、miRNA-199a水平降低,血清HIF-1α、VEGF水平升高(P<0.05)。AIS患者的血清miRNA-20b水平与miRNA-199a水平呈正相关,且血清miRNA-20b水平、miRNA-199a水平均分别与CSS评分呈正相关,与血清HIF-1α、VEGF水平呈负相关(均P<0.05)。结论AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a水平呈高表达,两者与AIS患者神经功能缺损程度呈正相关,并可能通过降低HIF-1α、VEGF表达水平,减少侧支循环的形成。