微小RNA-302c在高糖下对人肾小球系膜细胞的影响

目的探讨微小RNA-302c(miR-302c)在高糖环境下对人肾小球系膜细胞功能的影响。方法采用双荧光素酶报告实验验证miR-302c是否参与TIMP3表达的调控;在高糖环境下培养人肾小球系膜细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞miR-302c以及TIMP3 mRNA相对表达量,检测肾小球系膜细胞的存活数,采用qRT-PCR方法检测细胞炎症因子IL-6以及IL-8 mRNA的表达。结果经双荧光素酶报告基因实验证实TIMP3是miR-302c的直接靶基因;在不同糖浓度下培养人肾小球系膜细胞,结果发现,与正常糖培养相比较,高糖处理下的人肾小球系膜细胞的miR-302c表达显著性增加,TIMP3 mRNA表达显著性下降,同时存活细胞的数量显著性减少。与正常糖培养相比较,高糖培养下人肾小球系膜细胞的炎症因子IL-6以及IL-8 mRNA的表达显著性增高。结论高糖环境下miR-302c的表达上调,并靶向下调TIMP3的表达,可能促使炎症因子分泌增加、参与高糖环境下对人肾小球系膜细胞的损伤作用。

精神分裂症患者血清微小RNA-181c、微小RNA-30e的表达及其临床意义

目的:探讨精神分裂症患者血清微小RNA-181c(miR-181c)、微小RNA-30e(miR-30e)的表达,并分析其与患者认知功能、预后的关系。方法:选取本院2018年5月至2020年5月收治的138例精神分裂症患者为研究组,另选取同期健康体检者123例为对照组。受试者均采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清miR-181c、miR-30e表达,使用认知功能成套测验共识版(MCCB)进行认知功能评估并进行对比分析;随访1年,根据患者预后情况将其分为预后良好组与预后不良组,采用多因素Logistic回归性分析法分析血清miR-181c、miR-30e表达与精神分裂症患者预后不良的关系。结果:研究组血清miR-181c、miR-30e表达均高于对照组(P均<0.05),MCCB测评中各分测验评分及总评分均低于对照组(P均<0.05);血清miR-181c、miR-30e表达与MCCB总评分呈负相关(P均<0.05);研究组随访1年,预后不良80例(57.97%);预后良好组的有攻击行为占比、MCCB总评分<50分占比及血清miR-181c、miR-30e表达均高于预后良好组(P均<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,有攻击行为、MCCB总评分<50分及血清miR-181c、miR-30e表达升高均是精神分裂症患者预后不良的独立危险因素(P均<0.05)。结论:精神分裂症患者血清miR-181c、miR-30e表达均明显升高,且与认知功能障碍具有相关性,可能是精神分裂症患者预后不良的危险因素。

毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、微小RNA-302e、核因子-κB mRNA水平变化及意义

目的:探讨毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-302e、核因子-κB(NF-κB)mRNA水平变化及意义。方法:选取毛细支气管炎患儿108例为研究对象,均行糖皮质激素治疗。比较糖皮质激素治疗前后患儿血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平变化。采用Pearson法分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA间的相关性。根据糖皮质激素治疗效果将患儿分为有效组和无效组,比较不同疗效患儿一般资料及生化指标。分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平对糖皮质激素治疗效果的影响,以及它们对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值。结果:糖皮质激素治疗后患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平低于治疗前,miR-302e水平高于治疗前(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患儿血清IL-6与TNF-α、NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.512、0.564,均P<0.05),与miR-302e呈负相关(r=-0.573,P<0.05);患儿血清TNF-α与NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.521,P<0.05),与miR-302e水平呈负相关(r=-0.559,P<0.05);患儿血清miR-302e与NF-κB mRNA水平呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。无效组患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平,以及重度病情患儿占比高于有效组,miR-302e水平低于有效组(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平异常以及病情严重程度(重度)是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素(均P<0.05)。血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值高于上述指标单独预测。结论:经糖皮质激素治疗后,毛细支气管炎患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平降低,miR-302e水平升高,四者水平异常是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素,联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值更高。

甲状腺癌患者血清miR-302e、MYCBP2及B7-H3表达水平与临床分期和预后的相关性研究

目的甲状腺癌(TC)患者血清微小RNA-302e(miR-302e),MYC结合蛋白2(MYCBP2)及共刺激分子(B7-H3)表达水平与临床分期和预后的相关性研究。方法选取本院2018年7月至2020年7月期间接诊的138例TC患者作为疾病组,同期选取138例进行体检的健康者作为对照组。根据对患者随访3年的结果,将疾病组分为预后不良组(n=20)和预后良好组(n=118)。采用qRT-PCR法检测血清miR-302e、MYCBP2水平,ELISA法检测血清B7-H3水平;TargetScanHuman网站预测miR-302e与MYCBP2的靶向关系;运用ROC曲线分析血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3对TC患者预后的预测价值。结果与对照组(1.05±0.23、1.03±0.22、28.46±4.18μg/L)相比,疾病组血清miR-302e(1.78±0.40),B7-H3(34.33±5.94μg/L)水平明显升高,血清MYCBP2(0.82±0.15)水平降低,差异有统计学意义(t=18.586,9.265,9.494,P<0.05);与临床分期Ⅰ+Ⅱ期患者(1.65±0.37、0.90±0.15、32.68±3.29μg/L)相比,Ⅲ+Ⅳ期患者血清miR-302e(2.16±0.48),B7-H3(39.20±4.08μg/L)水平明显升高,血清MYCBP2(0.58±0.14)水平降低,差异有统计学意义(t=6.511,9.510,11.084,P<0.05);预后不良组临床分期Ⅲ期+Ⅳ期占比、淋巴结转移占比、血清miR-302e(2.16±0.45),B7-H3水平(43.26±6.85μg/L)显著高于预后良好组,血清MYCBP2(0.58±0.11)低于预后良好组(1.72±0.39、0.86±0.16、32.82±5.79μg/L),差异有统计学意义(χ^(2)=10.954,24.620,t=4.561,7.519,7.257,P<0.05);MYCBP2与miR-302e可能有靶向关系,且经Pearson相关性分析,MYCBP2与miR-302e呈负相关性(r=-0.513,P<0.001);血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3、临床分期、淋巴结转移是TC患者预后的影响因素(P<0.05);血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3联合预测TC患者预后的曲线下面积(AUC)为0.975,优于各自单独预测(Z_(联合vs miR-302e)=2.448、Z_(联合vs MYCBP2)=3.024、Z_(联合vs B7-H3)=2.133,P=0.014、0.003、0.033)。结论TC患者血清miR-302e,B7-H3水平明显升高,血清MYCBP2明显降低,与患者临床分期及预后密切相关,3项联合检测对患者预后有更高的预测价值。

子宫内膜癌组织中miRNA-302c的表达变化及其意义

目的观察子宫内膜癌组织中miRNA-302c的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择2012年1月~2013年12月收治的51例子宫内膜癌患者的手术切除肿瘤组织标本为观察组,同期因子宫肌瘤行全子宫切除术的40例患者的正常子宫内膜组织标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组标本中的miRNA-302c。分析51例子宫内膜癌患者肿瘤组织标本miRNA-302c相对表达量与临床病理参数的关系。采用受试者工作曲线和最大约登指数法确定用子宫内膜癌组织标本miRNA-302c表达量预测患者死亡和复发的截断值,将其用截断值分为高miRNA-302c表达组和低miRNA-302c表达组,采用Kaplan-Meier法计算并比较高、低miRNA-302c表达组的3年累计生存率和复发率。结果观察组、对照组miRNA-302c表达量分别为1.721±2.804、4.024±6.518,两组相比P<0.05。51例子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织标本miRNA-302c表达量与临床分期、分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。用肿瘤组织标本miRNA-302c表达量预测患者死亡的截断值为1.568,用其将51例子宫内膜癌患者分为高miRNA-302c表达组(miRNA-302c表达量<1.568)30例和低miRNA-302c表达组(miRNA-302c表达量≥1.568)21例,其3年累计生存率分别为96.67%(29/30)、90.47%(19/21),P<0.05。用肿瘤组织标本miRNA-302c表达量预测患者复发的截断值为1.803,用其将51例子宫内膜癌患者分为高miRNA-302c表达组(miRNA-302c表达量<1.803)24例和低miRNA-302c表达组(miRNA-302c表达量≥1.803)27例,其复发率分别为16.67%(4/24)、29.63%(8/27),P<0.05。结论子宫内膜癌组织miRNA-302c表达降低。检测子宫内膜癌组织miRNA-302c表达有助于判断子宫内膜癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移及预测预后、复发。

微小RNA-200c靶向抑制EFNA1基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-200c靶向抑制肝配蛋白A1(EFNA1)基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法选取胃癌细胞株SGC7901,随机分为miR-200c模拟物组、模拟物对照组、miR-200c抑制物组、抑制物对照组,分别转染miR-200c模拟物、模拟物对照寡核苷酸、miR-200c抑制物、抑制物对照寡核苷酸,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭。采用双荧光素酶实验验证miR-200c对EFNA1基因的靶向抑制作用。取本院手术切除的胃癌和相应癌旁组织标本48例份,通过免疫组化法检测EFNA1蛋白表达,分析胃癌组织中EFNA1蛋白表达与患者性别、年龄、吸烟、饮酒、病理类型、浸润深度、淋巴结及远处转移、肿瘤部位间的关系。结果与模拟物对照组相比,miR-200c模拟物组胃癌细胞SGC7901增殖活性降低(P<0.05),总凋亡率升高(P<0.05),侵袭能力降低(P<0.05)。miR-200c模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(P<0.05),而miR-200c抑制物组的荧光素酶活性高于抑制物对照组(P<0.05)。EFNA1蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁组织,其高表达与胃癌淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理特征均不相关(P均>0.05)。结论胃癌组织中EFNA1基因呈高表达,miR-200c可通过靶向EFNA1基因抑制胃癌细胞增殖及侵袭,促进凋亡。

脐带血浆微小RNA-141检测对新生儿早发型败血症的鉴别诊断价值

目的 分析脐带血微小RNA(miR)-141检测对新生儿早发型败血症(EOS)的诊断价值。方法 回顾性分析2021年1月1日—12月31日宝鸡市妇幼保健院由围产期发热母体分娩的568例新生儿,根据EOS诊断将新生儿分为EOS组(n=56)及非EOS组(n=484),剔除28例。采用实时聚合酶链反应检测脐带血miR-141水平。所有EOS患儿至少进行为期28 d的随访研究。结果 EOS组新生儿脐带血miR-141水平显著低于非EOS组[0.519(0.329,0.651)对0.920(0.712,1.264),Z=-12.483,P<0.001]。多因素logistic回归分析显示,产前母体白细胞计数(WBC)升高(P=0.041)、B族溶血链球菌感染(P=0.001)、产时体温峰值高(P=0.002)以及脐带血miR-141降低(P<0.001)都与EOS风险独立相关。经受试者工作特征曲线分析,脐带血miR-141鉴别诊断EOS的曲线下面积(AUC)[0.877(95%CI:0.828~0.927)]高于新生儿血清降钙素原[0.631(95%CI:0.554~0.708)]。且产前母体WBC联合脐带血miR-141鉴别诊断EOS的AUC为0.888(95%CI:0.841~0.936),较产前母体WBC[0.690(95%CI:0.620~0.760)]单独鉴别诊断价值更优(Z=-1.814,P=0.013)。结论 脐带血miR-141可能是EOS有用的潜在诊断和预后生物标志物。

化瘀散水煎剂通过调控miR-129-5p/FOXC1轴抑制肝癌裸鼠移植瘤生长

目的:探讨化瘀散水煎剂通过调控微小RNA-129-5p/叉头框蛋白C1(FOXC1)轴对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法:建立肝癌裸鼠移植瘤模型,并分为裸鼠NC组、化瘀散水煎剂组、化瘀散水煎剂+inhibitor-NC组、化瘀散水煎剂+miR-129-5p inhibitor组,每组8只。qRT-PCR法检测miR-129-5p、FOXC1 mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-129-5p与FOXC1靶向调控关系,观察记录裸鼠的瘤重及移植瘤体积,HE染色观察移植瘤组织形态,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学染色检测瘤组织Ki-67、Cleaved Caspase-3、FOXC1表达,Western blot检测Ki-67、Cleaved Caspase-3、FOXC1蛋白表达。结果:miR-129-5p在肝癌细胞中表达显著下降,FOXC1 mRNA表达显著升高,其中HepG2细胞变化最显著(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-129-5p与FOXC1存在靶向调控关系;与NC组相比,化瘀散水煎剂组肿瘤细胞出现坏死,凋亡数增加,miR-129-5p、Cleaved Caspase-3显著升高,移植瘤质量和体积、FOXC1、Ki-67表达显著降低(P<0.05);下调miR-129-5p逆转化瘀散水煎剂对肝癌移植瘤的抑制作用(P<0.05)。结论:化瘀散水煎剂可能通过上调miR-129-5p从而下调FOXC1表达,进而抑制肝癌移植瘤生长。

宫颈癌组织中微小RNA-29c的水平及临床意义

目的探讨微小RNA-29c(miR-29c)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法收集本院2013年6月至2018年7月经病理确诊的100例宫颈癌患者的组织标本,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织中的miR-29c水平,分析miR-29c水平与宫颈癌临床病理特征(年龄、FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、病理类型、宫旁浸润、间质浸润、LVSI和淋巴结转移)的关系,以114例子宫肌瘤全子宫切除术后的正常宫颈组织作对照。基于Kaplan-Meier plotter在线生存分析数据库(http://kmplot.com/analysis/)分析miR-29c表达与宫颈癌患者临床预后的关系。结果 QPCR检测发现宫颈癌组织中的miR-29c水平为0.326±0.090,低于正常宫颈组织的1.039±0.372,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-29c水平与宫颈癌患者的年龄、病理类型和宫旁浸润无关(P>0.05),但与FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、间质浸润、LVSI和淋巴结转移有关(P<0.05),其中FIGO分期较晚(Ⅱ期)、肿瘤较大(>4 cm)、低分化、间质浸润较深(>1/2)、有LVSI和淋巴结转移的miR-29c水平和高表达率均低于FIGO分期较早(Ⅰ期)、肿瘤较小(≤4 cm)、高中分化、间质浸润较浅(>1/2)和无LVSI和淋巴结转移者(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,miR-29c高表达在宫颈癌中与良好的预后有关(HR=0.57,95%CI:0.36～0.91,P=0.018)。结论 miR-29c在宫颈癌组织中呈低表达,且与临床分期、血管侵犯和淋巴结转移有关,参与宫颈癌的发生发展,在宫颈癌的防治中有一定价值。

依普利酮通过靶向微小RNA-192和微小RNA-29a/b/c减轻糖尿病肾病模型大鼠肾损伤机制研究

目的:探讨依普利酮通过靶向微小RNA(miR)-192和miR-29a/b/c减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的机制。方法:将30只成年雄性SD大鼠分为对照组、模型组、依普利酮组,每组10只。通过实时定量PCR(RT-qPCR)分析各实验组大鼠肾脏组织中miR-192和miR-29a/b/c的mRNA表达水平。使用血糖仪检测大鼠血糖,并对大鼠整体和肾脏组织样本进行称重。通过相关商用试剂盒检测大鼠尿蛋白、肌酐和血尿素氮的浓度。通过蛋白印迹分析大鼠肾脏组织中转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Smad家族蛋白3(Smad3)的蛋白表达。通过免疫组化分析大鼠肾脏切片中TGF-β_(1)、Smad3和α-SMA的表达。结果:模型组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平低于对照组,miR-192的mRNA表达水平高于对照组(均P<0.05)。依普利酮组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平高于模型组,miR-192的mRNA表达水平低于模型组(均P<0.05)。模型组体重低于对照组,空腹血糖和肾脏质量/体重高于对照组(均P<0.05)。依普利酮组体重高于模型组,空腹血糖和肾脏质量/体重低于模型组(均P<0.05)。模型组尿蛋白、肌酐和血尿素氮水平高于对照组,而依普利酮组低于模型组(均P<0.05)。三组大鼠GFR比较差异有统计学意义,且模型组低于对照组,依普利酮组高于模型组(均P<0.05)。模型组基底膜变薄,肾小球萎缩,近曲小管损伤,经依普利酮治疗后得到改善。模型组TGF-β_(1)、Smad3和α-SMA平均光密度(MOD)高于对照组,而依普利酮组MOD低于模型组(均P<0.05)。结论:依普利酮通可减轻DN模型大鼠肾损伤,机制与靶向miR-192和miR-29a/b/c表达调控TGF-β_(1)/Smad信号通路有关。

糖尿病视网膜病变病人血清微小RNA-29c、微小RNA-194的表达

目的检测微小RNA-29c(miR-29c)和微小RNA-194(miR-194)在糖尿病视网膜病变(DR)病人血清中的表达特点及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测在汉中市人民医院就诊的98例DR病人、98名Ⅱ型糖尿病(T2DM)病人和98例同期体检健康者(NC)血清中miR-29c和miR-194的表达水平,多因素logistic回归分析影响DR发生的危险因素。Pearson相关分析DR病人血清miR-29c和miR-194与各生化指标的相关性。结果DR组、DM组和NC组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、踝臂指数(ABI)、脉搏波传导速度(PWV)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);DR组和DM组血清中糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)水平及miR-29c表达水平分别为(9.40±1.61)%比(8.53±1.78)%、(9.41±1.76)比(8.42±1.67)mmol/L、(1.29±0.57)比(1.12±0.25)明显高于NC组:(7.93±2.64)%、(6.41±1.62)mmol/L、(1.01±0.10),DR组明显高于DM组,而DR组和DM组miR-194表达水平明显低于NC组,DR组明显低于DM组(P<0.05);DR病人血清中miR-29c相对表达量与HbA1c、FPG水平均呈正相关(P<0.05),与血清miR-194相对表达量负相关(P<0.05);DR病人miR-194与miR-29c相对表达量呈负相关(P<0.05);多因素logistic回归分析发现,FPG水平高、HbA1c水平高、miR-29c水平高是DR发生的独立危险因素(均P<0.05),miR-194水平高是DR发生的保护因素(P<0.05)。结论DR病人血清中miR-29c表达相对DM病人和健康者上调,miR-194表达下调,miR-29c和miR-194与DR的发生发展有关。

微小RNA-138-5p通过调控Kelch重复蛋白影响缺氧/复氧心肌细胞增殖与凋亡

目的探讨微小RNA(miRNA/miR)-138-5p、Kelch重复蛋白(KLHDC10)在缺氧/复氧(H/R)心肌细胞H9C2中增殖、凋亡的功能及二者的作用关系。方法2018年5月至2019年12月,建立H/RH9C2细胞模型;正常培养的H9C2细胞记为对照组。用miRNA阴性对照(miR-con)、miR-138-5p模拟物(miR-138-5p mimics)、过表达空载体(pcDNA-con)和KLHDC10过表达载体(pcDNA-KLHDC10)不同处理方法处理H/RH9C2细胞。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Westernblotting)检测细胞中miR-138-5p、KLHDC10、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测细胞的存活和凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性。结果H/R组于对照组,H/RH9C2细胞中miR-138-5p的表达水平明显降低[(0.34±0.03)比(1.00±0.11)],KLHDC10的表达水平明显升高,细胞存活率显著降低[(62.03±6.20)%比(100.04±10.05)%],凋亡率显著升高[(28.16±2.82)%比(7.22±0.72)%],同时下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3的蛋白水平(P<0.05)。过表达miR-138-5p、抑制KLHDC10可明显促进H/R H9C2细胞存活,抑制凋亡,上调cyclinD1、下调cleaved-caspase-3的蛋白水平。miR-138-5p明显抑制野生型KLHDC10的H9C2细胞荧光素酶活性,并负向调控H9C2细胞中KLHDC10蛋白水平;过表达KLHDC10可逆转miR-138-5p对H/RH9C2细胞的存活和凋亡的调控作用。结论miR-138-5p可促进H/RH9C2细胞的存活,抑制凋亡,其机制之一为靶向下调KLHDC10。

miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

微小RNA-30c在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨微小RNA(miRNA)-30c在胃癌组织中的表达及意义。方法从105例临床获取的新鲜胃癌组织和匹配的胃正常组织样本及胃癌细胞系中分别提取总RNA,应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测miRNA-30c的表达水平,并分析miRNA-30c与临床病理特征的关系。利用MTT法检测miR-30c对细胞增殖的作用。结果 miRNA-30c在胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0. 001),并且在胃癌细胞系中表达低于正常胃上皮细胞,并且miRNA-30c可以抑制胃癌细胞的增殖。Kaplan-Meier生存分析显示:miRNA-30c高表达胃癌患者总生存期优于低表达组(P<0. 05)。结论 miRNA-30c低表达与胃癌不良预后有关,并且miRNA-30c可以抑制胃癌细胞的增殖。

微小RNA-31-5p调控蛋白激酶Cε通路在远程缺血预处理保护兔脊髓缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)在远程缺血预处理(RIPC)保护兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)中的作用及其机制。方法将60只日本大耳白兔分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、RIPC组、RIPC+miR-NC组、RIPC+miR-31-5p mimic组,每组12只。采用夹闭腹主动脉30 min建立SCIRI模型,通过鞘内注射miR-31-5p mimic质粒构建miR-31-5p过表达模型,除sham组和I/R组外,其余各组于闭腹主动脉前1 h实施RIPC。再灌注48 h后,对动物进行后肢运动功能评分和血-脊髓屏障(BSCB)通透性检测;苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓组织形态学变化;TUNEL检测脊髓组织神经元凋亡情况;逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测脊髓组织miR-31-5p和蛋白激酶Cε(PKCε)和脑源性神经营养因子(BDNF)的mRNA表达;Western Blot检测脊髓组织PKCε、BDNF蛋白表达。结果与sham组相比,I/R组后肢运动功能评分降低,伊文思蓝(EB)含量、神经元凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05),且脊髓神经元数量减少,空泡化明显,胞核固缩;与I/R组相比,RIPC组后肢运动功能评分、PKCε和BDNF的mRNA和蛋白表达增加,EB含量、神经元凋亡率、miR-31-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),且正常神经元明显增多,少数细胞空泡变性,核仁明显;使用miR-31-5p mimic上调miR-31-5p的表达可显著减弱RIPC对兔SCIRI的保护作用(P<0.05)。结论 miR-31-5p的表达在RIPC后降低,并可通过激活PKCε蛋白,上调脊髓组织中BDNF的表达,减轻SCIRI。

微小RNA-125b及其靶基因信号素分子4C在乳腺癌中的表达及意义

目的：探讨微小RNA（microRNA,miR）-125b及其靶基因信号素分子（SEMA）4C在乳腺癌组织（BRCR）及其癌旁正常组织（NCT）中的表达情况,并分析其与临床病理学特征的关联性及意义.方法：采用荧光定量PCR检测24 例BRCR及其NCT中miR-125b的表达,采用免疫组织化学方法检测40例BRCR及其NCT中SEMA4C的表达.统计分析两者表达水平与患者的年龄、组织学分级、临床分期、淋巴结转移,雌、孕激素受体和人表皮生长因子受体-2（cerbB-2）等临床病理学特征间的关联性.结果：SEMA4C表达在BRCR中高于NCT,SEMA4C表达在淋巴结转移和cerbB-2表达间差异均有统计学意义（P〈0.01和P〈0.05）,而在患者年龄,组织学分级,肿瘤临床分期及雌、孕激素受体表达间差异均无统计学意义（P〉0.05）.miR-125b表达在BRCR中低于NCT（P〈0.05）,其表达在SEMA4C、淋巴结转移以及cerbB-2差异均有统计学意义（P=0.034 -P=0.022）.结论：在乳腺浸润性导管癌中SEMA4C表达升高,miR-125b表达降低,两者均与cerbB-2过表达以及淋巴结转移均有一定关系,提示SEMA4C为miR-125b靶基因之一,miR-125b可能是一个新的乳腺癌标志物.

幽门螺杆菌感染诱导微小RNA-181c对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染诱导微小RNA-181c(miR-181c)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测Hp感染人正常胃黏膜GES-1细胞和胃癌细胞(BGC-823、SGC-7901、AGS)的miR-181c水平。采用脂质体向SGC-7901细胞转染miR-181c抑制物(Inhibitor组)或阴性对照序列(NC组),另取未转染的细胞为对照组;转染48 h后采用QPCR检测miR-181c水平,活细胞计数(CCK-8)法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数以评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,QPCR和Western blotting检测Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)-9和神经型钙黏蛋白(N-cad)水平。结果QPCR检测结果显示Hp感染后各细胞的miR-181水平较感染前均升高(P<0.05),GES-1、BGC-823、SGC-7901和AGS细胞Hp感染后的miR-181c水平分别为感染前的4.37、1.63、3.25和2.09倍。与对照组和NC组相比,Inhibitor组SGC-7901细胞的miR-181c水平和转染48、72 h后的增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组SGC-7901细胞的划痕愈合率和穿膜细胞数量分别为(21.679±3.762)%和(128.056±21.463)个,低于对照组的(65.004±2.309)%和(325.07±34.082)个及NC组的(65.675±2.914)%和(328.035±31.391)个,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和NC组相比,Inhibitor组的Bcl-2、MMP-9和N-cad水平均降低(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论Hp感染可升高胃癌细胞的miR-181c水平,下调该miR-181c水平对增殖、侵袭和迁移具有明显抑制作用,为Hp感染的胃癌治疗提供了新的靶点。

早期食管癌患者外周血微小RNA-15b和微小RNA-34c的表达水平及其临床意义

目的探讨早期食管癌患者外周血中微小RNA(miRNA)-15b和miRNA-34c表达水平及其临床意义。方法纳入113例早期食管癌患者(食管癌组)及113例健康者(对照组)。检测两组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平。分析miRAN-15b和miRAN-34c与早期食管癌发生及临床病理特征关系,并评估两者对早期食管癌诊断价值。结果食管癌组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平均低于对照组(均P<0.05)。低分化早期食管癌患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于高、中分化患者(均P<0.05),TNM分期Ⅱ期患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于TNM分期Ⅰ期患者(均P<0.05)。miRNA-15b相对表达水平≤0.78、miRNA-34c相对表达水平≤0.69是早期食管癌发生的危险因素(均P<0.05)。外周血血清miRNA-15b相对表达水平与miRNA-34c相对表达水平联合预测早期食管癌的曲线下面积为0.949(P<0.001),敏感度为93.00%,特异度为81.80%,均高于单一指标。结论早期食管癌患者血清中miRNA-15b与miRNA-34c均低表达,这可能与食管癌发生与发展有关。两者联合诊断早期食管癌价值较高。

微小RNA-29c在胶质瘤中的表达及其对细胞分裂周期蛋白42的调控作用和对细胞增殖的影响

目的探究微小RNA-29c(miRNA-29c)在胶质瘤中的表达水平以及表达水平对胶质瘤增殖的影响。方法选取手术切除的胶质瘤组织标本80例,根据世界卫生组织肿瘤分类分级标准,将组织标本进行分级,同时收集非胶质瘤组织标本25例作为对照组。将上述收集的组织标本制作为微组织阵列。同时切取5μm×5μm组织切片留用蛋白细胞分裂周期蛋白42(CDC42)免疫组化检测以及miRNA-29c原位杂交检测。结果非胶质瘤组织标本miRNA-29c表达水平明显高于胶质瘤组织标本表达,miRNA-29c表达水平随着肿瘤分化级别的提升而降低;非胶质瘤组标本CDC42表达水平明显低与胶质瘤组,且随着胶质瘤分化级别提高CDC42水平明显增加;miRNA-29c靶mRNA生物信息学预测结果提示人CDC42mRNA是miRNA-29c潜在的靶mRNA;人胶质瘤细胞U87MG经过miRNA-29c mimics转染48 h后,转染组细胞miRNA-29c表达水平明显高于空白对照组以及Scr转染对照组,通过转染方式可将miRNA-29c mimics成功转入人胶质瘤细胞U87MG,并且能够成功表达;miRNA-29c mimics转染组CDC42表达明显低于两对照组,在人胶质瘤细胞U87MG中miRNA-29c可以降解CDC42 mRNA的表达,从而降低CDC42蛋白的表达水平;miRNA-29c mimics转染组人胶质瘤细胞增殖活性在48、72、96 h明显低于空白对照组与Scr转染对照组,miRNA-29c可以有效的抑制人胶质瘤细胞U87MG增殖活性。结论 miRNA-29c是人胶质瘤的有效抑瘤miRNA之一,miRNA-29c表达水平可作为临床上判断胶质瘤分化分级的参考依据,miRNA-29c表达水平的降低减少了对其下游基因CDC42的抑制作用,引起CDC42表达的异常增加,导致肿瘤细胞的异常增殖。研究结果显示miRNA-29c在胶质瘤的发生发展过程中起着重要的调控作用。

胎盘早剥血清ET-1、miR-517c表达及其临床价值

目的检测胎盘早剥孕妇血清内皮素1(ET-1)、微小RNA-517c(miR-517c)的表达情况,并探讨二者的临床价值。方法选取2016年6月至2019年6月于邯郸市中心医院产检疑为胎盘早剥的173例孕妇作为观察组,进一步经病理检查分为胎盘早剥组(n=104)和未发生胎盘早剥组(n=69),进一步将胎盘早剥组患者分为轻度(n=66),重度(n=38),同时选取150名正常妊娠孕妇作为对照组。采用qRT-PCR法测定血清miR-517c表达水平;采用ELISA法检测血清ET-1表达水平;分析不同临床病理特征胎盘早剥孕妇血清ET-1、miR-517c的表达水平;采用ROC曲线分析ET-1、miR-517c对胎盘早剥的诊断价值。结果观察组孕妇血清ET-1、miR-517c表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度早剥组ET-1、miR-517c表达水平均高于轻度早剥组,产后出血占比高于轻度早剥组,差异有统计学意义(P<0.05);严重程度为重型以及未发生DIC和PPT的孕妇ET-1高表达和miR-517c高表达比例显著高于轻型以及发生DIC和PPT的孕妇,差异有统计学意义(P<0.05);血清ET-1表达水平诊断胎盘早剥的AUC为0.643,敏感度为0.548,特异性为0.768;血清miR-517c表达水平诊断胎盘早剥的AUC为0.765,敏感度为0.683,特异性为0.783;二者联合诊断的AUC为0.783,敏感度为0.625,特异性为0.870。结论胎盘早剥患者血清ET-1、miR-517c均呈高表达,二者对胎盘早剥具有一定的诊断价值。