微小RNA-30a调控丝裂原活化蛋白激酶通路对主动脉夹层大鼠的影响

目的探讨微小RNA(miR)-30a调控MAPK通路对主动脉夹层大鼠模型夹层形成、炎性因子及血管收缩的影响。方法选取SD大鼠50只,建立主动脉夹层大鼠模型,将其随机分为对照组、模型组、miR-NC组、miR-30a组、miR-30a抑制剂组,各组10只。组织病理学染色观察大鼠主动脉组织变化、主动脉中膜弹力纤维与胶原纤维变化;采用PCR、尾动脉压力计、ELISA法对各组miR-30a表达、干预前后收缩压情况、血清炎性因子表达进行检测;采用Western blotting检测各组大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-6、MMP-2蛋白表达以及MAPK通路相关蛋白表达。结果MiR-30a抑制剂组血管壁撕裂程度和内动脉壁排列紊乱有所改善;miR-30a抑制剂组改善血管重构;与对照组相比,模型组miR-30a表达较高,与miR-NC组相比,miR-30a组、miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05;干预前,各组收缩压比较差异无统计学意义,P>0.05;与对照组相比,模型组收缩压较高,与miR-NC组相比,miR-30a组表达较高,miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05;与对照组相比,模型组肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β表达较高,与miR-NC组相比,miR-30a组表达较高,miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05;与对照组相比,模型组、MMP-6、MMP-2、Ras、Raf、P38 MAPK及ERK1/2蛋白表达较高,与miR-NC组相比,miR-30a组表达较高,miR-30a抑制剂组表达较低,P<0.05。结论MiR-30a参与主动脉夹层的形成、炎症反应、调控主动脉夹层血管重构,可能是通过调控MAPK信号通路实现的。

长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

精神分裂症患者血清微小RNA-181c、微小RNA-30e的表达及其临床意义

目的:探讨精神分裂症患者血清微小RNA-181c(miR-181c)、微小RNA-30e(miR-30e)的表达,并分析其与患者认知功能、预后的关系。方法:选取本院2018年5月至2020年5月收治的138例精神分裂症患者为研究组,另选取同期健康体检者123例为对照组。受试者均采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清miR-181c、miR-30e表达,使用认知功能成套测验共识版(MCCB)进行认知功能评估并进行对比分析;随访1年,根据患者预后情况将其分为预后良好组与预后不良组,采用多因素Logistic回归性分析法分析血清miR-181c、miR-30e表达与精神分裂症患者预后不良的关系。结果:研究组血清miR-181c、miR-30e表达均高于对照组(P均<0.05),MCCB测评中各分测验评分及总评分均低于对照组(P均<0.05);血清miR-181c、miR-30e表达与MCCB总评分呈负相关(P均<0.05);研究组随访1年,预后不良80例(57.97%);预后良好组的有攻击行为占比、MCCB总评分<50分占比及血清miR-181c、miR-30e表达均高于预后良好组(P均<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,有攻击行为、MCCB总评分<50分及血清miR-181c、miR-30e表达升高均是精神分裂症患者预后不良的独立危险因素(P均<0.05)。结论:精神分裂症患者血清miR-181c、miR-30e表达均明显升高,且与认知功能障碍具有相关性,可能是精神分裂症患者预后不良的危险因素。

微小RNA-30d-5p通过葡萄糖调节蛋白78调控骨髓基质细胞成骨分化的机制

目的探讨微小RNA(miR)-30d-5p对骨髓基质细胞成骨分化和凋亡的影响及其作用机制。方法将骨髓基质细胞分为miR-30d-5p过表达阴性对照组、miR-30d-5p过表达组、miR-30d-5p抑制阴性对照组和miR-30d-5p抑制组。碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨效果,茜素红染色检测钙结节沉淀情况,TUNEL检测凋亡水平。Real-time PCR、Western blotting检测mRNA和蛋白表达水平,生物信息学分析网站Targetscan 7.1预测miR-30d-5p的潜在结合位点。结果MiR-30d-5p过表达后,细胞成骨分化能力和矿化能力均降低(P<0.05),而细胞凋亡水平升高(P<0.05)。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和成骨特异性Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。但是,miR-30d-5p抑制剂处理细胞后,细胞成骨分化能力和矿化能力均有提升(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05)。GRP78和RUNX2蛋白水平均升高(P<0.05)。MiR-30d-5p结合位点位于GRP78基因3’UTR的142~148 bp处。结论MiR-30d-5p通过下调GRP78蛋白的表达抑制骨髓基质细胞成骨分化,并且促进细胞凋亡。

血清miR-485和miR-30表达对糖尿病肾病患者的诊断价值

目的探讨血清微小RNA-485(miR-485)和miR-30的表达对糖尿病肾病(DN)患者的诊断价值。方法选取2022年1月至2023年1月我院收治的96例DN患者为DN组,同时期本院收治的96例单纯糖尿病患者为糖尿病组,同时期在本院进行体检的96例健康志愿者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定3组人员血清miR-485、miR-30表达水平;采用Logistic模型分析DN发生的影响因素,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-485、miR-30水平对DN的诊断价值。结果对照组、糖尿病组、DN组血清miR-485与miR-30表达水平均依次降低(P<0.05)。DN组患者糖尿病病程、空腹血糖、餐后2 h血糖、血肌酐、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均高于糖尿病组,高密度脂蛋白胆固醇水平低于糖尿病组,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病病程、餐后2 h血糖、血肌酐、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇均是导致DN发生的危险因素(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇、miR-485、miR-30表达水平均是保护因素(P<0.05)。血清miR-485、miR-30联合诊断DN的ROC曲线下面积(AUC)为0.914,高于二者单独诊断的AUC(Z=2.168,P=0.030;Z=2.882,P=0.004)。结论DN患者血清miR-485、miR-30表达均下调,二者均是DN发生的保护因素,可作为诊断DN的临床指标,且二者联合诊断的效果更好。

大黄附子汤加减方对慢性肾衰竭患者血清miR-30a、miR-182表达水平的影响

目的:观察大黄附子汤加减方对慢性肾衰竭(CRF)患者血清微小RNA-30a(miR-30a)、微小RNA-182(miR-182)表达水平的影响。方法:选取109例CRF患者,按随机数字表法分为对照组55例及观察组54例,观察组脱落2例,纳入52例,对照组脱落3例,纳入52例。对照组采取常规治疗,观察组在对照组基础上应用大黄附子汤加减方治疗。2组均治疗12周。比较2组临床疗效及不良反应发生情况,比较2组治疗前后肾功能指标值[血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾小球滤过率(eGFR)]、肾纤维化指标值[Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、层黏蛋白(LN)]、血清miR-30a、miR-182表达水平的变化,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-30a、miR-182表达水平对治疗效果的预测价值,采用Pearson检验分析miR-30a、miR-182表达水平与eGFR的相关性。结果:观察组临床疗效总有效率为86.54%,对照组临床疗效总有效率为67.31%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组血清BUN、SCr水平均较治疗前下降(P<0.05),eGFR水平较治疗前升高(P<0.05);观察组血清BUN、SCr均低于对照组(P<0.05),eGFR水平高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组血清PC-Ⅲ、LN水平均较治疗前下降(P<0.05),观察组血清PC-Ⅲ、LN水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组miR-30a、miR-182表达水平均较治疗前降低(P<0.05),观察组miR-30a、miR-182表达水平均低于对照组(P<0.05)。观察组治疗总有效45例、无效7例。与有效者比较,无效者入院时血清miR-30a、miR-182表达水平均升高(P<0.05)。ROC曲线显示,血清miR-30a、miR-182联合预测治疗效果的AUC、灵敏度、特异度依次为0.808、85.71%、75.60%。Pearson检验显示,观察组miR-30a、miR-182表达水平与eGFR呈负相关(P<0.05)。用药过程中,2组未见严重不良反应。结论:大黄附子汤加减方治疗CRF的临床疗效较好,有助于促进肾功能恢复,延缓肾纤维化进展,下调血清miR-30a、miR-182表达水平,且miR-30a联合miR-182检测对于治疗效果有较高的预测价值。

广西壮族人群微小RNA-30基因多态性分布特征及其与血脂水平的关系

目的 探讨微小RNA(miR)-30基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs1192037A/T在广西壮族人群中的分布特点,比较其与其他人群的多态性差异,并统计分析不同基因型的常见血脂检测项目水平。方法 采用SNPscan技术检测236例广西壮族人群志愿者rs1192037A/T位点基因型,分析其基因型和等位基因频率在不同性别和组间的分布差异,用罗氏全自动生化仪检测研究对象的常见血脂水平。结果 rs1192037A/T存在AA、AT和TT 3种基因型,其分布频率分别为11.0%、38.6%和50.4%;rs1192037A/T的基因型和等位基因频率在不同性别间差异均无统计学意义(P>0.05);与人类基因组计划(HapMap)公布的欧洲人、日本人、非洲人、印第安人和墨西哥人分型数据相比较的SNP分型数据相比,其差异均具有统计学意义(P<0.05);而与日本人和北京汉族人相比,其差异无统计学意义(P>0.05)。rs1192037 A/T 3种基因型间TG的差异有统计学意义(P<0.05),且携带AT和TT基因型人群TG水平显著高于携带AA基因型人群。结论 广西壮族人群miR-30基因rs1192037多态性在不同人群间存在不同程度差异;rs1192037A/T多态性与TG水平高低有关。

miR-30a-3p通过靶向调控BAFF在肾癌细胞迁移和血管生成能力中的作用研究

目的:研究微小RNA(miR)-30a-3p对肾细胞癌(RCC)细胞的转移和血管生成表型的影响。方法:结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库提供的RCC中miR-30a-3p表达数据分析miR-30a-3p在RCC细胞系中的表达特征。结合生物信息学网站预测miR-30a-3p与B细胞激活因子(BAFF)3’非翻译区(3’-UTR)的结合。将RCC细胞系ACHN和786O分为LV-miR-30a-3p组[感染过表达miR-30a-3p的慢病毒载体]、LV-NC组[感染慢病毒载体阴性对照]、LV-miR-30a-3p+pcDNA-BAFF组[联合感染LV-miR-30a-3p和过表达BAFF的载体(pcDNA-BAFF)]以及LV-miR-30a-3p+pcDNA-EV组[联合感染LV-miR-30a-3p和空载体(pcDNA-EV)]。Transwell迁移小室法检测细胞的迁移能力,小管形成实验检测细胞血管生成能力。qPCR检测miR-30a-3p的表达。Western blot检测BAFF、促血管生成蛋白血管内皮生长因子A(VEGFA)的蛋白表达。双荧光素酶基因报告实验检测ACHN细胞中的miR-30a-3p对BAFF的靶向调控作用。结果:分析TCGA数据库中数据,与Normal组比,Cancer组的miR-30a-3p表达都显著降低(P<0.05);与HK-2细胞比,ACHN和786O细胞系中miR-30a-3p的表达都明显降低(均P<0.05)。与LV-NC组比,LV-miR-30a-3p组miR-30a-3p表达增加(均P<0.05),LV-miR-30a-3p组的细胞迁移、小管生成、及BAFF和VEGFA表达均下调(均P<0.05)。经过生物信息学预测以及双荧光素酶报告基因实验验证发现BAFF是miR-30a-3p的靶基因。与LV-miR-30a-3p+pcDNA-EV组比较,LV-miR-30a-3p+pcDNA-BAFF组的细胞迁移、小管生成率及BAFF表达均上调(均P<0.05)。结论:miR-30a-3p通过靶向抑制BAFF抑制RCC细胞的迁移和血管生成能力。

血清miR-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中表达及意义

目的 探讨血清微小RNA(miR)-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中表达特点及意义。方法 选取老年急性心肌梗死患者86例为急性心肌梗死组,健康志愿者50例为对照组。采集空腹肘静脉血5 ml,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清miR-30a、miR-221表达水平;进行全球急性冠脉事件登记(GRACE)评分,分为低危组(总积分≤108分)、中危组(总积分109~140分)、高危组(总积分>140分);进行心脏彩超检查,记录心室重构相关超声指标;出院后进行1年随访,将全因死亡、再次血运重建、恶性心律失常纳入不良预后进行分析。结果 急性心肌梗死组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于对照组(P<0.01)。冠脉病变三支组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于双支病变和单支病变组,双支病变组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于单支病变组(P<0.05)。随着老年急性心肌梗死患者GRACE危险评分的增加,血清miR-30a、miR-221表达水平逐渐升高。左心房内径(LAD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室质量指数(LVMI)、左心室重构指数(LVRI)在各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);随着老年急性心肌梗死患者GRACE危险评分的增加,LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI逐渐升高,LVRI逐渐降低。老年急性心肌梗死血清miRNA-30a表达水平与LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI呈显著正相关,与LVRI呈显著负相关(P<0.01);血清miR-221表达水平与LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI呈显著正相关(P<0.01),与LVRI呈显著负相关(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清miR-30a、miR-221对老年急性心肌梗死患者预后均具有较高的预测价值(P<0.05),其中联合检测的预测价值最高[曲线下面积(AUC)=0.924]。结论 老年急性心肌梗死患者血清miR-30a、miR-221高表达,且与冠脉病变支数、GRACE评分、心室重构密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

微小RNA-30a在后发性白内障中对上皮间质转化的调控机制

目的探讨微小RNA(miR)-30a在后发性白内障(PCO)中对晶状体上皮细胞上皮间质转化(EMT)的作用及调控机制。方法通过实时荧光定量PCR检测43例PCO晶状体上皮组织和18例正常晶状体上皮组织中的miR-30a和EMT标志物E-cadherin、Fibronectin表达水平,并通过Pearson相关系数分析miR-30a与EMT标志物表达水平的相关性。检测过表达miR-30a后对人晶状体上皮细胞株SAR01/04增殖和侵袭能力的影响,以及对EMT相关蛋白的表达调控。利用miRNA靶基因预测软件预测miR-30a的靶基因,并通过荧光素酶报告基因进行靶基因和结合序列验证。在PCO和正常晶状体上皮原代细胞中过表达miR-30a后检测EMT相关蛋白的表达差异。结果miR-30a和E-cadherin在PCO晶状体上皮细胞中呈低表达水平,而Fibronectin呈高表达水平。miR-30a与E-cadherin呈显著正相关关系(r=0.754,P<0.001),而miR-30a与Fibronectin呈显著负相关关系(r=-0.857,P<0.001)。过表达miR-30a后能够降低人晶状体上皮细胞株SAR01/04的增殖和侵袭活力、上调E-cadherin表达、下调Fibronectin、Cox-2和Slug的表达。报告基因分析显示miR-30a能够通过结合到Slug基因的3’-UTR序列而下调Slug的表达。在PCO和正常晶状体上皮原代细胞中过表达miR-30a能上调E-cadherin表达、下调Fibronectin、Slug和Cox-2的表达。结论miR-30a通过调控Slug的表达来抑制人晶状体上皮细胞的EMT发生而减弱增殖和侵袭。

床边间歇性血液透析治疗老年重症肾衰竭患者的疗效及对血清瘦素和微小RNA-30a水平的影响

目的探讨床边间歇性血液透析治疗老年重症肾衰竭患者的疗效及对血清瘦素和微小RNA-30a水平的影响。方法将64例重症肾衰竭老年患者随机分为两组,对照组进行普通血液透析治疗,研究组进行床边间歇性血液透析治疗。比较两组治疗后临床疗效情况、对血清瘦素和微小RNA-30a水平的影响及生活质量评估。结果研究组临床效果高于对照组(P<0.05);两组治疗后血清瘦素和微小RNA-30a水平均有所下降,且研究组低于对照组(P<0.05);两组治疗后肌酐水平、尿素水平均有所降低,且研究组低于对照组(P<0.05);研究组治疗后认知功能、社会功能、角色功能及躯体功能评分均高于对照组(P<0.05)。结论老年重症肾衰竭患者治疗中应用床边间歇性血液透析治疗效果良好,血清瘦素及微小RNA-30a得到控制并有所降低,肾功能指标明显改善,生活质量显著提升。

首发精神分裂症病人血清微小RNA-24-2、微小RNA-30b的检测水平及意义

目的检测首发精神分裂症(FES)病人血清中微小RNA-24-2(mir-24-2)、微小RNA-30b(mir-30b)水平,并探讨血清中mir-24-2、mir-30b表达水平与FES发病的关系。方法前瞻性选取2016年11月至2018年9月于武汉市精神卫生中心就诊的98例FES病人为研究对象(FES组);同期选取76例健康体检者作为对照(对照组)。分析两组受试者一般资料;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组受试者血清中mir-24-2、mir-30b表达水平,并对FES病人进行阳性与阴性症状量表(PANSS)评分;分析FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS评分相关性;分析血清中mir-24-2、mir-30b水平对FES的诊断价值。结果FES组血清mir-24-2(1.81±0.58)、mir-30b水平(1.46±0.37)、PANSS总评分(78.64±12.31)分、阳性症状评分(12.64±3.73)分、阴性症状评分(20.56±4.32)分、认知评分(8.73±1.84)分、兴奋评分(8.96±2.13)分、抑郁情绪评分(6.75±2.06)分显著高于对照组[(1.00±0.31)、(1.00±0.26)、(35.42±5.37)分、(4.51±1.12)分、(6.94±1.21)分、(3.86±0.95)分、(4.19±0.38)分、(4.12±1.08)分](均P<0.05);FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分均呈正相关(P<0.05);血清mir-24-2、mir-30b诊断FES的曲线下面积(AUC)分别为0.863(95%CI:0.808~0.919)、0.856(95%CI:0.801~0.911),特异度分别为93.4%、84.2%,灵敏度分别为68.4%、76.5%;两者联合诊断FES的AUC为0.936(95%CI:0.899~0.973),特异度为88.2%,灵敏度为89.8%。结论血清mir-24-2、mir-30b水平在FES病人中明显升高,且与PANSS评分呈正相关。血清mir-24-2、mir-30b可能有助于疾病诊断,对评价精神分裂症的早期危险性有重要意义。

血清微小RNA-106b-5p、RNA-30a-5p水平与结直肠癌患者预后的关系及其诊断价值

目的分析结直肠癌患者血清微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)、miR-30a-5p表达水平与结直肠癌患者预后的关系及其诊断结直肠癌的临床价值。方法选取2013年1月—2014年12月安徽省安庆市第一人民医院肿瘤科手术治疗的结直肠癌患者(结直肠癌组)、门诊确诊的结直肠腺瘤患者(结直肠腺瘤组)和同期健康体检者(健康对照组)作为研究对象,各90例,检测其血清miR-106b-5p、miR-30a-5p表达水平,随访结直肠癌患者的预后情况,并以受试者工作特征曲线(ROC)评估血清miR-106b-5p、miR-30a-5p诊断结直肠癌的价值。结果结直肠癌组血清miR-106b-5p表达水平高于结直肠腺瘤组及健康对照组,血清miR-30a-5p表达水平低于结直肠腺瘤组及健康对照组(F=295.073、374.052,P均=0.000);结直肠癌患者血清miR-106b-5p表达在不同肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及临床分期比较差异有统计学意义(t/P=3.382/0.001、3.130/0.002、3.069/0.003、4.638/0.000),而血清miR-30a-5p表达在不同肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期比较差异有统计学意义(t/P=3.626/0.000、2.605/0.011、3.265/0.002、3.113/0.002);血清miR-106b-5p高表达亚组、miR-30a-5p低表达亚组患者的术后5年总生存率及中位生存时间均分别低于血清miR-106b-5p低表达亚组、miR-30a-5p高表达亚组(χ^2=11.449,12.613,P均<0.01);ROC分析结果表明,血清miR-106b-5p、miR-30a-5p诊断结直肠癌的AUC为0.785、0.692,敏感度为0.824、0.676,特异度为0.794、0.739,约登指数为0.618、0.415。结论血清miR-106b-5p在结直肠癌患者中升高,血清miR-30a-5p在结直肠癌患者中降低,二者均与不良预后有关,具有作为结直肠癌预后预测和诊断生物标志物的潜能。

微小RNA-30a对缺氧条件下心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨微小RNA-30a(miR-30a)对缺氧条件下心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将H9C2细胞随机分为对照组(未做处理)、缺氧组(缺氧处理24 h)、缺氧+阴性对照(NC)组(转染miR-30a阴性对照后,缺氧处理24 h)和缺氧+miR-30a组(转染miR-30a mimics后,缺氧处理24 h)。采用实时定量PCR检测各组细胞中miR-30a的表达水平,比色法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western blot检测STAT3信号通路相关蛋白信号转导与转录因子3(STAT3)、p-STAT3和切割型活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)的表达。结果缺氧处理后H9C2细胞中miR-30a、cleaved caspase-3和p-STAT3表达明显升高,细胞上清液中SOD含量降低,MDA和LDH含量升高,细胞存活率降低,凋亡率升高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。转染miR-30a mimics上调miR-30a表达后,能够明显增强缺氧处理下的上述作用。结论 MiR-30a可通过激活STAT3信号通路增强氧化应激损伤,促进缺氧诱导的细胞凋亡。

慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清微小RNA-30a mRNA与微小RNA-196b mRNA相对表达量及临床意义

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30a mRNA与miR-196b mRNA在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)肝纤维化患者血清中的相对表达量及临床意义。方法选取2016年1月至2018年12月在江苏省张家港市第一人民医院行经皮肝组织活检确诊为CHB肝纤维化的139例患者为CHB肝纤维化组,选取130例同期健康体检者为对照组。对CHB肝纤维化患者进行肝组织病理学检查。采用Au480全自动生化分析仪检测血清天门冬氨酸氨基移酶(aspartate transferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)及白蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中金属蛋白酶-1抑制剂(metalloproteinase tissue inhibitor-1,TIMP-1)浓度;采用荧光定量聚合酶链反应检测miR-30a和miR-196bmRNA相对表达量,计算FIB-4指数。对CHB肝纤维化患者进行肝组织病理学检查确定肝纤维化分期。采用Pearson法分析miR-30a mRNA和miR-196bmRNA相对表达量及其与各临床指标的相关性;采用受试者工作特征(receiver operatorcharacteristic,ROC)曲线评价miR-30a和miR-196b对肝纤维化的诊断价值。结果与对照组相比,CHB肝纤维化患者组血清中ALT [(65.34±13.53)U/L vs(18.28±3.14)U/L]、AST [(52.84±14.02)U/L vs(25.84±1.26)U/L]、TIMP-1 [(183.98±42.07)ng/ml vs(80.59±13.09)ng/ml]和FIB-4指数(1.33±0.09 vs 0.78±0.06)显著升高,miR-30a mRNA相对表达量(0.60±0.08 vs 1.00±0.09)和miR-196b mRNA相对表达量(0.45±0.04 vs 1.00±0.02)显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。139例患者中S0~S1期占32.37%(45/139),S2~S3期占45.32%(63/139),S4期占22.31%(31/139)。S0~S1期患者miR-30a mRNA相对表达量、miR-196b mRNA相对表达量、TIMP-1和FIB-4指数分别为0.83±0.06、0.76±0.05、(142.68±13.21)ng/ml、0.84±0.08,S2~S3期患者上述指标分别为0.69±0.06、0.41±0.08、(257.50±53.05)ng/ml、1.23±0.09,S4期患者上述指标分别0.28±0.02、0.21±0.05、(383.52±62.31)ng/ml、2.48±0.19,血清中miR-30a mRNA相对表达量和miR-196b mRNA相对表达量随纤维化分期的增加而降低,TIMP-1和FIB-4指数随肝纤维化分期的增加而增加(P均<0.05)。CHB肝纤维化患者血清miR-30a和miR-196b与TIMP-1、FIB-4和肝纤维化分期呈负相关(P <0.05),与ALT和AST无相关性(P> 0.05)。miR-30a mRNA相对表达量、miR-196b mRNA相对表达量、TIMP-1和FIB-4指数诊断CHB肝纤维化患者肝纤维化的ROC曲线下面积(area under ROC curve,AUC)分别为0.847(95%CI:0.756~0.928)、0.942(95%CI:0.860~0.983)、0.792(95%CI:0.721~0.855)、0.895(95%CI:0.821~0.967),miR-196b mRNA相对表达量的AUC显著高于其他指标(P均<0.001)。以0.468作为临界值,miR-196b mRNA相对表达量诊断的灵敏度和特异度分别为89.45%和83.60%。结论 CHB肝纤维化患者血清中miR-30a mRNA和miR-196ba mRNA相对表达量降低,检测miR-30a和miR-196ba mRNA相对表达量有助于评估CHB肝纤维化患者的肝纤维化程度。

TPT1-AS1靶向调控微小RNA-30c-5p及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1(TPT1-AS1)对微小RNA-30c-5p(miR-30c-5p)的靶向调控作用及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测结直肠癌组织相较于癌旁组织及结直肠癌细胞(DLD-1、HCT116、SW480和LoVo)相较于人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的TPT1-AS1水平。脂质体法向LoVo细胞转染TPT1-AS1特异性siRNA(si-TPT1-AS1组)并设转染si-NC的阴性对照组和未转染的空白对照组,qPCR检测TPT1-AS1和miR-30c-5p水平,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活性、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)及其磷酸化形式p-STAT3的水平,在线预测并结合双荧光素酶报告实验验证miR-30c-5p与TPT1-AS1的相互作用关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织的TPT1-AS1水平升高至2.020±0.080,而miR-30c-5p水平降低至0.597±0.044(P<0.05),且结直肠癌组织的TPT1-AS1水平与miR-30c-5p水平呈负相关(r=-0.801,P<0.001)。4株结直肠癌细胞的TPT1-AS1水平均表现为异常高表达(P<0.05),功能验证实验选择TPT1-AS1表达最高的LoVo细胞。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组LoVo细胞活力减弱,TPT1-AS1水平降低而miR-30c-5p水平升高(P<0.05)。si-TPT1-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18.650±3.346)%和(108.326±17.383)个,均低于空白对照组的(90.963±4.328)%和(275.675±21.078)个及阴性对照组的(93.165±4.317)%和(281.431±23.880)个(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组的STAT3水平无显著变化,而p-STAT3和MMP-3水平降低(P<0.05)。MiR-30c-5p模拟物降低了野生型TPT1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型TPT1-AS1的荧光素酶活性。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌中TPT1-AS1高表达,且增强了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,TPT1-AS1可能通过靶向miR-30c-5p来发挥促癌作用。TPT1-AS1的发现为结直肠癌的诊治和预后评估及下一步的转化研究提供了新的思路。

微小RNA-30c在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨微小RNA(miRNA)-30c在胃癌组织中的表达及意义。方法从105例临床获取的新鲜胃癌组织和匹配的胃正常组织样本及胃癌细胞系中分别提取总RNA,应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测miRNA-30c的表达水平,并分析miRNA-30c与临床病理特征的关系。利用MTT法检测miR-30c对细胞增殖的作用。结果 miRNA-30c在胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0. 001),并且在胃癌细胞系中表达低于正常胃上皮细胞,并且miRNA-30c可以抑制胃癌细胞的增殖。Kaplan-Meier生存分析显示:miRNA-30c高表达胃癌患者总生存期优于低表达组(P<0. 05)。结论 miRNA-30c低表达与胃癌不良预后有关,并且miRNA-30c可以抑制胃癌细胞的增殖。

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的:探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法:在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果:与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平下降(P<0.01),细胞Notch1蛋白表达升高(P<0.001),细胞的迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.05)以及细胞的管状形成能力(P<0.01)增强。结论:miR-30c-5p能够通过抑制Notch1的表达降低人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成能力,参与子痫前期的发病。

肺泡灌洗液中miR-30a-5p、CCL16表达与肺结核患者结核杆菌耐药性的关系

目的 探讨耐药肺结核患者支气管肺泡灌洗液中微小RNA-30a-5p(microRNA-30a-5p, miR-30a-5p)和C-C基序趋化因子配体16(C-C motif chemokine ligand 16, CCL16)表达水平变化,为结核病防治提供理论基础。方法 选取2018年2月1日-2021年6月30日在我院治疗的活动性肺结核患者182例作为研究对象(观察组),并根据是否对结核杆菌耐药情况将其分为耐药组和非耐药组,选择同期90例非肺结核的健康人(因胸痛经纤维支气管镜检查排除肺结核)作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平,采用ELISA法检测CCL16水平,采用流式细胞分析法检测外周血T细胞亚群分布,采用Pearson分析法分析耐药肺结核患者支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p与CCL16表达水平相关性,采用Logistic逐步回归分析法分析肺结核患者结核杆菌耐药性的影响因素。结果 非耐药组与耐药组CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞水平及CD4/CD8比值均显著低于对照组,CD8^(+)T细胞水平显著高于对照组(P均<0.05);耐药组CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞水平及CD4/CD8比值均显著低于非耐药组,CD8^(+)T细胞水平显著高于非耐药组(P均<0.05)。非耐药组与耐药组支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平均显著低于对照组,CCL16水平均显著高于对照组(P均<0.05);耐药组肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平显著低于非耐药组,CCL16水平显著高于非耐药组(P均<0.05)。有吸烟史、广泛耐药的肺结核患者肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平显著低于无吸烟史、耐多药的肺结核患者,CCL16水平显著高于无吸烟史、耐多药的肺结核患者(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,耐药肺结核患者肺泡灌洗液中miR-30a-5p与CCL16表达水平呈显著负相关(r=-0.556,P <0.001);Logistics多因素回归分析显示,有吸烟史、肺部空洞、miR-30a-5p <0.72、CCL16≥5.34 pg/ml为影响肺结核患者耐药性的危险因素(P均<0.05)。结论 耐药肺结核患者支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平降低,CCL16水平升高,检测miR-30a-5p、CCL16水平可反映机体感染结核杆菌后机体发生的免疫应答情况,为耐药肺结核的治疗提供参考。

微小RNA-30a:肿瘤治疗的潜在靶点

微小RNA(miRNA)是长约20~25个核苷酸的内源性非编码RNA,主要通过抑制mRNA翻译和诱导mRNA降解而调节靶基因的表达,人类大约30%的基因受miRNAs调节。研究发现,大量miRNAs在肿瘤中表达失调,常常引起多种重要过程的紊乱,包括细胞增殖、侵袭与转移、凋亡以及耐药等。在肿瘤的发生过程中,不同的miRNA可能起着类似抑癌基因或者癌基因的作用,参与调节肿瘤细胞发生、发展等过程。miR-30a是miRNA的成员之一,通过调节靶基因的表达,参与调控肿瘤细胞增殖、转移和凋亡等过程。不同肿瘤血清中miR-30a的表达水平对肿瘤的早期诊断、治疗以及预后判断有着重要作用。此外,miR-30a的表达失调还与抗肿瘤药物耐药性的产生密切相关,推测其有望成为肿瘤治疗的一个潜在新靶标。本文就近年来miR-30a在肿瘤中作用的最新研究进展作一综述。