长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

2型糖尿病患者血清hsa-miR-30c-5p水平表达对微血管并发症的预测价值研究

目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清人微小核糖核酸(homo sapiensmicroRNA,hsa-miR)-30c-5p表达对微血管并发症的预测价值。方法选取2021年5月~2022年9月巴中市中心医院收治的T2DM患者205例为糖尿病组,并根据患者微血管并发症情况将糖尿病组进一步分为并发组(n=124)和未并发组(n=81),另选取同期健康体检者205例为对照组,均采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerasechain reaction,RT-PCR)检测受试者血清hsa-miR-30c-5p表达并进行比较。采用多因素Logistic回归分析影响微血管并发症的因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线预测血清hsa-miR-30c-5p表达对T2DM患者发生微血管并发症的价值。结果并发组、未并发组的血清hsa-miR-30c-5p表达分别为0.58±0.06,0.72±0.08,均低于对照组(0.89±0.21),差异具有统计学意义(t=16.038,7.079,均P=0.001);并发组低于未并发组,差异具有统计学意义(t=14.289,P=0.001)。糖尿病病程[OR(95%CI):3.873(2.976~4.770)]、尿酸[OR(95%CI):2.125(1.211~3.040)]、糖化血红蛋白[OR(95%CI):2.680(1.745~3.616)]均为T2DM患者发生微血管并发症的独立危险因素(均P<0.05),葡萄糖目标范围内时间[OR(95%CI):0.491(0.135~0.846)]、血清hsa-miR-30c-5p[OR(95%CI):0.532(0.146~0.817)]均为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素(均P<0.05)。血清hsa-miR-30c-5p表达预测T2DM患者发生微血管并发症的敏感度、特异度、曲线下面积(95%置信区间)分别为81.45%,85.19%,0.802(0.741~0.854)。结论T2DM患者血清hsa-miR-30c-5p表达异常降低,且血清hsa-miR-30c-5p为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素,对T2DM患者发生微血管并发症具有一定的预测价值。

微小RNA-30c-2-3p在缺氧预处理心肌细胞保护中的作用

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30c-2-3p在心肌细胞缺氧预处理心肌保护中的作用。方法新生SPF级大鼠心肌细胞培养72 h后,接种于6孔板中,密度为5×10^5个/ml,按随机数字表法分为3组(每组72个培养孔,检测各指标时每组取6孔,重复3次):对照组(Sham组)、缺氧/复氧组(AR组)和缺氧预处理组(PAR组)。Sham组心肌细胞正常培养,AR组心肌细胞进行缺氧3 h/复氧6 h处理,PAR组心肌细胞在进行缺氧3 h/复氧6 h处理前行缺氧30 min/复氧30 min单循环处理。复氧6 h后,各组采用比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测miRNA-30c-2-3p和X-box结合蛋白-1(X-box binding protein-1,XBP1)mRNA表达水平,Western blot法检测XBP1s(内质网应激后,XBP1剪接后翻译成具有转录调节活性的XBP1)和免疫球蛋白结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BiP)表达情况。采用双荧光素酶基因报告实验验证miRNA-30c-2-3p和XBP1的靶向关系。结果与Sham组比较,AR组和PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率升高,miRNA-30c-2-3p、XBP1 mRNA和XBP1s、BiP表达升高(P<0.05)。与AR组比较,PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率降低,miRNA-30c-2-3p表达降低,XBP1 mRNA和XBP1s、BIP表达升高(P<0.05)。双荧光素酶基因报告结果证实XBP1为miRNA-30c-2-3p的靶基因。结论缺氧预处理可能是通过低表达miRNA-30c-2-3p进而增加XBP1s表达而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,BiP可能是XBP1产生心肌保护效应的下游因子之一。

首发精神分裂症病人血清微小RNA-24-2、微小RNA-30b的检测水平及意义

目的检测首发精神分裂症(FES)病人血清中微小RNA-24-2(mir-24-2)、微小RNA-30b(mir-30b)水平,并探讨血清中mir-24-2、mir-30b表达水平与FES发病的关系。方法前瞻性选取2016年11月至2018年9月于武汉市精神卫生中心就诊的98例FES病人为研究对象(FES组);同期选取76例健康体检者作为对照(对照组)。分析两组受试者一般资料;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组受试者血清中mir-24-2、mir-30b表达水平,并对FES病人进行阳性与阴性症状量表(PANSS)评分;分析FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS评分相关性;分析血清中mir-24-2、mir-30b水平对FES的诊断价值。结果FES组血清mir-24-2(1.81±0.58)、mir-30b水平(1.46±0.37)、PANSS总评分(78.64±12.31)分、阳性症状评分(12.64±3.73)分、阴性症状评分(20.56±4.32)分、认知评分(8.73±1.84)分、兴奋评分(8.96±2.13)分、抑郁情绪评分(6.75±2.06)分显著高于对照组[(1.00±0.31)、(1.00±0.26)、(35.42±5.37)分、(4.51±1.12)分、(6.94±1.21)分、(3.86±0.95)分、(4.19±0.38)分、(4.12±1.08)分](均P<0.05);FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分均呈正相关(P<0.05);血清mir-24-2、mir-30b诊断FES的曲线下面积(AUC)分别为0.863(95%CI:0.808~0.919)、0.856(95%CI:0.801~0.911),特异度分别为93.4%、84.2%,灵敏度分别为68.4%、76.5%;两者联合诊断FES的AUC为0.936(95%CI:0.899~0.973),特异度为88.2%,灵敏度为89.8%。结论血清mir-24-2、mir-30b水平在FES病人中明显升高,且与PANSS评分呈正相关。血清mir-24-2、mir-30b可能有助于疾病诊断,对评价精神分裂症的早期危险性有重要意义。

TPT1-AS1靶向调控微小RNA-30c-5p及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1(TPT1-AS1)对微小RNA-30c-5p(miR-30c-5p)的靶向调控作用及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测结直肠癌组织相较于癌旁组织及结直肠癌细胞(DLD-1、HCT116、SW480和LoVo)相较于人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的TPT1-AS1水平。脂质体法向LoVo细胞转染TPT1-AS1特异性siRNA(si-TPT1-AS1组)并设转染si-NC的阴性对照组和未转染的空白对照组,qPCR检测TPT1-AS1和miR-30c-5p水平,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活性、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)及其磷酸化形式p-STAT3的水平,在线预测并结合双荧光素酶报告实验验证miR-30c-5p与TPT1-AS1的相互作用关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织的TPT1-AS1水平升高至2.020±0.080,而miR-30c-5p水平降低至0.597±0.044(P<0.05),且结直肠癌组织的TPT1-AS1水平与miR-30c-5p水平呈负相关(r=-0.801,P<0.001)。4株结直肠癌细胞的TPT1-AS1水平均表现为异常高表达(P<0.05),功能验证实验选择TPT1-AS1表达最高的LoVo细胞。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组LoVo细胞活力减弱,TPT1-AS1水平降低而miR-30c-5p水平升高(P<0.05)。si-TPT1-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18.650±3.346)%和(108.326±17.383)个,均低于空白对照组的(90.963±4.328)%和(275.675±21.078)个及阴性对照组的(93.165±4.317)%和(281.431±23.880)个(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组的STAT3水平无显著变化,而p-STAT3和MMP-3水平降低(P<0.05)。MiR-30c-5p模拟物降低了野生型TPT1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型TPT1-AS1的荧光素酶活性。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌中TPT1-AS1高表达,且增强了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,TPT1-AS1可能通过靶向miR-30c-5p来发挥促癌作用。TPT1-AS1的发现为结直肠癌的诊治和预后评估及下一步的转化研究提供了新的思路。

2型糖尿病并重症肾衰竭连续肾脏替代治疗临床效果及对血清瘦素和微小RNA-30a水平的影响

目的观察2型糖尿病并重症肾衰竭连续肾脏替代治疗临床效果及对血清瘦素和微小RNA-30a(miR-30a)水平的影响。方法选取2型糖尿病并重症肾衰竭64例,根据透析方法不同将其分为观察组和对照组两组各32例。观察组给予连续肾脏替代治疗,对照组给予普通血液透析治疗。观察比较两组治疗后临床效果,治疗前后血糖指标、血清瘦素、肾功能指标、血清miR-30a水平,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,观察组总有效率为90. 63%,对照组总有效率为75. 00%,观察组明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。治疗前,两组血糖指标、血清瘦素、肾功能指标、血清miR-30a水平比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。治疗后,观察组空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平及血清瘦素水平均明显低于治疗前,对照组血清瘦素水平明显低于治疗前,观察组FPG、Hb A1c水平及血清瘦素水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。治疗后,两组血清尿素(BUN)、肌酐(Scr)及miR-30a水平均较治疗前明显下降,观察组血清BUN、Scr及miR-30a水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。两组治疗期间均未出现低血压、心律失常、出血、感染及透析器凝血等不良反应。结论 2型糖尿病并重症肾衰竭患者连续肾脏替代治疗效果良好,并可控制血糖指标和血清瘦素水平,同时可改善肾功能指标、降低血清miR-30a水平。

2型糖尿病并重症肾衰竭连续肾脏替代治疗临床效果及对血清瘦素和微小RNA-30a水平的影响分析

目的探讨在对2型糖尿病并重症肾衰竭进行治疗时使用连续肾脏替代治疗的疗效。方法选择2017年4月—2019年4月内的46例2型糖尿病并重症肾衰竭患者,随机分为对照组和试验组,23例一组,用连续肾脏替代治疗的为试验组,用常规血液透析的为对照组,分析两组的治疗效果,治疗前后血清瘦素和miRNA-30a的水平,以及肾功能水平和血糖水平的变化。结果试验组肾功能水平和血糖水平的变化、治疗效果均明显比对照组要更好(P<0.05),血清瘦素和miRNA-30a的水平也比对照组要好(P<0.05)。结论在对2型糖尿病并重症肾衰竭进行治疗时使用连续肾脏替代治疗效果较好,可以改善患者的血糖水平和肾脏功能,血清瘦素得到降低和miRNA-30a得到升高,可临床采用。

miR-30c-2过表达联合阿霉素对甲状腺乳头状癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的 探究微小RNA-30c-2(microRNA-30c-2,miR-30c-2)联合阿霉素对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和迁移能力的影响。方法 体外培养TPC-1细胞,将细胞分为空白对照组(未做任何处理的细胞,即Control组)、过表达对照组(瞬时转染NC mimic质粒,即NC mimic组)、过表达组(瞬时转染miR-30c-2过表达质粒,即miR-30c-2组),采用qRT-PCR技术检测细胞中miR-30c-2的表达水平;将TPC-1细胞分为4组,分别为空白对照组(未做任何处理的细胞,Control组)、阿霉素处理组(使用阿霉素混合液培养TPC-1细胞24 h、48 h)、过表达组(瞬时转染miR-30c-2过表达质粒,即miR-30c-2 mimic组)、共处理组(阿霉素混合液与转染miR-30c-2过表达质粒共同培养TPC-1细胞24 h、48 h),CCK-8试验及细胞划痕实验分别检测4组细胞的增殖和迁移能力。结果 经qRT-PCR检测,与NC mimic组相比,过表达组的miR-30c-2表达水平明显升高(P<0.001);CCK-8实验表明,阿霉素+miR-30c-2 mimic共处理组分别与阿霉素处理组和过表达组相比,可以明显抑制细胞增殖(P<0.05);细胞划痕实验表明,阿霉素+miR-30c-2 mimic共处理组对比阿霉素组和过表达组发现TPC-1细胞迁移能力进一步受到抑制(P<0.05)。结论 miR-30c-2过表达可以联合阿霉素共同抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖和迁移能力。

炎症微环境下miR-30a调控Runx相关转录因子2对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探究炎症微环境下微小RNA-30a(miR-30a)调控Runt相关转录因子2(Runx2)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法:体外培养人牙周膜干细胞(hPDLSCs),随机分为对照组、模型组、miR-30a mimics(模拟物)组、miR-30a mimics阴性对照组、miR-30a inhibitor(抑制剂)组、miR-30a inhibitor阴性对照组,除对照组外,其余各组以脂多糖诱导细胞炎症微环境,构建体外炎症模型,然后分组处理并诱导其成骨分化,采用碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色检测各组细胞成骨分化情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-30a、成骨相关基因Runx2 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹实验检测各组细胞Runx2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)蛋白表达情况。结果:与对照组相比,模型组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均升高(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。与模型组相比,miR-30a mimics组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均升高(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均降低(均P<0.05);miR-30a inhibitor组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均降低(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均升高(均P<0.05);miR-30a mimics阴性对照组、miR-30a inhibitor阴性对照组细胞各指标无明显变化(均P>0.05)。结论:炎症微环境下hPDLSCs中miR-30a高表达,可下调Runx2表达,促进炎症进展,进而抑制hPDLSCs成骨分化。

miR-34c-3p与M2型肿瘤相关巨噬细胞在三阴性乳腺癌中的表达及意义

目的:检测miR-34c-3p与M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达,并探讨其在乳腺癌发病中的意义。方法:选择2017年2月至2018年1月于西京医院就诊的68例TNBC患者作为实验组(A组),以同期就诊的70例乳腺纤维腺瘤患者作为对照组(B组)。采用Real-time RT-PCR检测组织标本中miR-34c-3p的表达;流式细胞检测M2型TAM的表达; ELISA法检测血清中IL-10的表达。并进一步分析miR-34c-3p的表达与乳腺癌M2型TAM及血清IL-10水平的相关性。结果:A、B组miR-34c-3p的相对表达量分别为0. 84±0. 08、1. 29±0. 71,A组明显低于B组,差异有统计学意义(P <0. 05)。与B组比较,A组M2型TAM(CD68+CD163+)细胞比例显著升高(P <0. 05)。A组血清IL-10的表达[(19. 69±4. 93) pg/ml]较B组[(17. 26±3. 51) pg/ml]显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05)。TNBC组织中miR-34c-3p的表达与M2型TAM比例及血清IL-10表达均呈显著负相关(r=-0. 508,r=-0. 656,P <0. 05)。结论:TNBC组织中miR-34c-3p的表达下调,M2型TAM比例及血清IL-10表达均显著升高,促进TNBC进展。

miR-30a-5p通过靶向RUNX2减轻LPS诱导的急性肺损伤实验研究

为探讨上调miR-30a-5p对LPS诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及其与人类runt相关转录因子2(human runt related transcription factor 2,RUNX2)的关系,首先选取肺泡上皮细胞株MRC-5,转染miR-30a-5p mimics、miR-NC,分别记为miR-30a-5p组、miR-NC组,以无任何处理的细胞为Blank组,然后用1 mg/mL LPS处理,分为LPS+miR-30a-5p组、LPS+miR-NC组及LPS组。用LPS腹腔注射C57BL/6小鼠构建ALI模型,分为对照组、ALI组、ALI+miR-NC组及ALI+miR-30a-5p组。H-E染色观察肺组织病理改变并进行肺损伤评分,计算肺湿重/干重(wet weight/dry weight,W/D)比值。ELISA检测血清IL-1β、IL-6及TNF-α水平。qRT-PCR检测细胞、组织miR-30a-5p表达水平。Western blotting检测组织、细胞RUNX2表达水平。双荧光素酶报告基因试验分析miR-30a-5p与RUNX2的靶向关系。结果显示,与Blank组比较,LPS组细胞miR-30a-5p水平降低,RUNX2水平升高(P<0.01)。与miR-NC组、LPS+miR-NC组比较,miR-30a-5p组、LPS+miR-30a-5p组细胞miR-30a-5p水平升高,RUNX2水平降低(P<0.01)。与对照组比较,ALI组肺组织miR-30a-5p水平降低,RUNX2水平升高,肺损伤评分升高,W/D比值升高,TNF-α、IL-1β及IL-6水平升高(P<0.01)。与ALI+miR-NC组比较,ALI+miR-30a-5p组肺组织miR-30a-5p水平升高,RUNX2水平降低,肺损伤评分降低,W/D比值降低,TNF-α、IL-1β及IL-6水平降低(P<0.01)。miR-30a-5p与RUNX2 miR 3'-UTR存在一定的结合位点,miR-30a-5p+RUNX2-WT组细胞荧光素酶活性低于miR-NC+RUNX2-WT组(P<0.01)。该研究提示,miR-30a-5p在ALI小鼠肺组织中低表达,过表达miR-30a-5p通过调控RUNX2改善小鼠肺损伤。

微小RNA-30a通过靶向调节锌指结构E-box同源结合框2抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭

目的 观察微小RNA （miR）-30a对乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其与锌指结构E-box同源结合框2（ZEB2）的关系.方法 采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）技术检测乳腺癌组织及癌旁组织中miR-30a的表达.用miR-30a的模拟物片段（has-miR-30a mimics）瞬时转染乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231.通过细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测miR-30a对细胞增殖能力的影响.通过小室（Transwell）检测miR-30a对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.通过TargetScan软件预测miR-30a的潜在靶基因为ZEB2,并利用荧光素酶报告基因实验和Western blot法证实miR-30a直接靶向靶基因ZEB2.结果 乳腺癌组织与癌旁组织的miR-30a相对表达水平的比值为0.47 ±0.01（P＜0.05）.在MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中过表达miR-30a,培养48 h后的吸光度值分别为2.03±0.19、2.56±0.21,低于对照组3.22±0.07、3.49±0.19,细胞侵袭抑制率分别为（36.04±0.03）％、（53.61±0.03）％,ZEB2的蛋白表达水平分别下调了40％和60％（P＜0.05）.荧光素酶报告基因实验证实ZEB2是miR-30a的直接靶基因.结论 miR-30a在乳腺癌组织和细胞中的表达明显下调,miR-30a可以通过靶向ZEB2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭.

2型糖尿病合并冠心病患者微小RNA-30a和几丁质酶-3样蛋白-1水平变化及其与冠状动脉病变的相关性

糖尿病是冠心病(CAD)的等危症,二者彼此独立又相互联系。2018年美国糖尿病协会发布的指南[1]推荐,对于糖尿病合并无症状CAD患者,在有效控制心血管疾病危险因素的前提下,A级证据并不推荐将冠状动脉(简称冠脉)检查用于糖尿病患者筛查CAD。慢性炎症反应是糖尿病和CAD共同的病理基础。Li等[2]发现炎症因子可刺激血管壁局部活化的特定颗粒细胞大量分泌几丁质酶-3样蛋白-1(YKL-40),通过促进血管内皮细胞的粘附、趋化、迁移等损伤血管内皮功能及细胞外基质重建,从而参与动脉粥样硬化斑块的形成和进展。既往研究结果显示,微小RNA(miRNA,miR)-30a参与炎症反应和内皮细胞凋亡过程[3-4]。由此可见,miR-30a和YKL-40均与慢性炎症反应相关。我们通过探讨血清miR-30a和YKL-40在糖尿病合并CAD患者中的表达情况及其在冠脉病变过程中的作用,旨在为评估糖尿病合并CAD患者冠脉病变严重程度提供辅助参考依据。

miR-34c-5p过表达抑制胃癌细胞侵袭和迁移

目的研究微小RNA(miR)-34c-5p在胃癌组织中的表达及调控胃癌细胞侵袭和迁移机制。方法利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测人胃癌组织及胃癌细胞中miR-34c-5p mRNA表达;在人胃癌细胞中构建miR-34c-5p过表达模型,倒置荧光显微镜观察慢病毒转染情况,RT-qPCR验证转染效率。利用划痕实验、Transwell实验检测过表达miR-34c-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的影响;通过Western blot检测各组胃癌细胞中MAP2K1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达情况。双萤光素酶报告基因检测MAP2K1是否是miR-34c-5p的靶基因。结果miR-34c-5p mRNA在10例人胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.05);miR-34c-5p mRNA在胃癌HGC-27细胞中的表达明显低于正常胃黏膜GES-1细胞(P<0.01);与空白对照组、miR-34c-5p-NC组比较,miR-34c-5p-mimics组miR-34c-5p mRNA表达水平明显升高(P<0.05);划痕实验及Transwell实验结果表明,过表达miR-34c-5p明显抑制了胃癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05,P<0.01);Western blot检测结果表明,过表达miR-34c-5p后胃癌HGC-27细胞中MAP2K1、Vimentin蛋白表达水平明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);此外,与mimic-NC+miR-34c-5p-mimics组相比,转染pmiR-MAP2K1-WT质粒细胞的萤光素酶活性降低(P<0.01),而转染pmiR-MAP2K1-Mut质粒的萤光素酶活性无改变。结论miR-34c-5p在胃癌组织和胃癌细胞中低表达,可能通过靶向调控MAP2K1表达抑制胃癌细胞侵袭和迁移。

长链非编码RNA生长阻滞特异转录物5／微小RNA 200c-3p／血管紧张素转换酶2信号轴参与呼吸窘迫综合征人肺上皮细胞A549的凋亡

目的探究长链非编码RNA生长阻滞特异转录物5／微小RNA200e-3p／血管紧张素转换酶2（1ncRNAGAS5／miR-200c-3p／ACE2）信号轴是否参与呼吸窘迫综合征（ARDS）肺上皮细胞的凋亡。方法构建ARDS大鼠模型，实验分为对照组（Control组）、LPS处理组（ARDS组）、LPS＋pcDNA处理组（ARDS＋pcDNA组）和LPS＋pcDNA-GAS5处理组（ARDS＋pcDNA-GAS5组）。ARDS大鼠构建6h后收集4组大鼠动脉血及肺组织，血气分析仪进行测定氧分压（PaO2）和二氧化碳分压（PaCO2），并观察GAS5的表达变化。随后，用LPS处理人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549，分为未处理、LPS、LPS＋pcDNA、LPS＋pcDNA-GAS5、LPS＋pcDNA-GAS5＋pre-NC和LPS＋pcDNA-GAS5＋miR-200c．3pmimic组。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测lncRNAGAS5、ACE2和miR-200c-3p的表达水平；RNA免疫沉淀和RNA下拉（pull-down）实验用于检测GAS5与miR．200c-3p的结合与调控：Westernblotting法检测ACE2的蛋白表达；流式细胞术用于检测A549细胞的凋亡。组间数据比较采用t检验。结果ARDS大鼠实验表明与ARDS＋pcDNA组相比，ARDS＋pcDNA-GAS5组P0，值显著升高[（81．5±3．3）比（57．5±5．1）mmHg，t=4．850，P〈0．05]，PC02值显著降低[（50．6±1．9）比（64．0±1．9）mmHg，t=5．940，P〈0．05]。细胞实验中，与Control组相比，LPS组A549细胞中IncRNAGAS5的表达显著下降（0．43±0．01比1．01±0．01，t=0．242，P〈0．05）。与LPS＋pcDNA组相比，LPS＋pcDNA-GAS5组ACE2的表达水平显著升高（0．85±0．04比0．34±0．02，t=1．800，P〈0．05）：与LPS＋pcDNA-GAS5＋pre-NC组相比，LPS＋pcDNA-GAS5＋miR-200c-3pmimic组ACE2的表达水平显著降低（0．62±0．01比0．84±0．02，t=9．440，P〈0．05）。与未处理组相比，LPS组A549细胞凋亡百分比明显升高（25．90±0．61比7．90±0．22，t=0．257，P〈0．05）；与LPS＋pcDNA组相比，LPS＋pcDNA-GAS5组凋亡百分比明显降低（10．50±0．37比26．37±0．45，t=1．760，P〈0．05）；与LPS＋pcDNA-GAS5＋pre-NC组相比，LPS＋pcDNA-GAS5＋miR-200c-3pmimic组细胞凋亡百分比显著升高（19．07±0．56比10．87±0．26，t=0．643，P〈0．05）。结论ARDS模型中，lncRNAGAS5下调促进miR-200c-3p表达，使ACE2表达下降，从而使肺上皮细胞凋亡增加，促进ARDS进展。

microRNA-181c-5p抑制Bcl2L11/Bim减轻压力超负荷诱导的小鼠心力衰竭

目的探讨MicroRNA-181c-5p(miR-181c-5p)对压力超负荷诱导(TAC)的心力衰竭的作用机制。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、TAC组和TAC+miR-181c-5p组。采用主动脉弓缩窄诱导小鼠心力衰竭动物模型,造模过程中,对模型组小鼠心肌多点注射给予5×10^(6) U/10μL过表达miR-181c-5p慢病毒载体,实验第4周处死所有小鼠,收集心脏组织标本。采用HE染色观察组病理学改变;Masson染色观察胶原纤维沉积;TUNEL检测观察心肌组织凋亡;实时定量PCR和Western blot技术检测心肌组织miR-181c-5p表达及凋亡蛋白表达。结果 miR-181c-5p在TAC诱导的心力衰竭心肌组织中表达下调。miR-181c-5p过表达减轻心肌炎症细胞浸润和纤维化、降低心肌细胞凋亡和靶向抑制Bcl-2家族的促凋亡基因Bcl2L11/Bim的mRNA和蛋白表达。结论 miR-181c-5p通过抑制Bcl2L11/Bim表达减轻压力超负荷诱导的小鼠心力衰竭。

结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系

目的探讨结肠癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译调节因子1(TPT1)-反义RNA1(AS1)、微小RNA(miR)-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系。方法选取2015年1月至2017年12月深圳大学附属第一医院收治的117例接受根治性或姑息性手术切除结肠癌患者,均行手术切除结肠癌组织及癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平,分析lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平与结肠癌病理特征的关系,采用Pearson相关性检验分析结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平的相关性,Kaplan-Meier曲线绘制不同lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平结肠癌患者3年累积生存率,Cox回归分析结肠癌患者预后影响因素。结果结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达水平明显高于癌旁组织(3.405±0.555 vs 1.766±0.096),miR-30c-5p表达水平(0.306±0.146 vs 0.872±0.267)明显低于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌lncRNA TPT1-AS1表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显高于Ⅰ~Ⅱ期(3.651±0.579 vs 3.257±0.486),浸润深度T_(3)~T_(4)明显高于T_(1)~T_(2)(3.523±0.601 vs 3.301±0.491),有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移(3.614±0.585 vs 3.220±0.456),差异均有统计学意义(P<0.05);miR-30c-5p表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显低于Ⅰ~Ⅱ期(0.251±0.126 vs 0.346±0.145),浸润深度T_(3)~T_(4)明显低于T_(1)~T_(2)(0.270±0.119 vs 0.338±0.162),有淋巴结转移明显低于无淋巴结转移(0.255±0.125 vs 0.351±0.151),差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平呈负相关(r=-0.572,P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,lncRNA TPT1-AS1高表达水平组3年累积生存率明显低于低表达水平组(59.32%vs 87.93%),miR-30c-5p高表达水平组3年累积生存率明显高于低表达水平组(85.00%vs 61.40%)(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=2.387,95%CI:1.004~5.671)、淋巴结转移(HR=2.667,95%CI:1.021~6.969)、lncRNA TPT1-AS1≥3.405(HR=2.023,95%CI:1.076~3.803)为结肠癌患者预后独立风险因素,miR-30c-5p≥0.306(HR=0.175,95%CI:0.012~0.423)为独立保护因素(P<0.05)。结论结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达显著上调,miR-30c-5p表达显著下调,两者与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关,为患者预后独立影响因素,可能成为结肠癌预后评估的标志物。

miR-30a-5p靶向SIRT1调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

为研究miR-30a-5p对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制,运用实时荧光RT-PCR检测人原代OA软骨细胞及正常软骨细胞中miR-30a-5p、沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silent information regulator 1, SIRT1)的表达。研究分为正常对照组(正常软骨细胞)、OA+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、OA+anti-miR-30a-5p组(转染anti-miR-30a-5p)、OA+pcDNA组(转染pcDNA)、OA+pcDNA-SIRT1组(转染pcDNA-SIRT1)、OA+anti-miR-30a-5p+si-NC组(anti-miR-30a-5p和si-NC共转染)、OA+anti-miR-30a-5p+si-SIRT1组(anti-miR-30a-5p和si-SIRT1共转染),用脂质体法进行细胞转染,Western blotting检测各组细胞中SIRT1的表达,MTT试验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测试验检测细胞的荧光活性。结果显示,与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中miR-30a-5p表达显著升高(P<0.05),SIRT1表达显著降低(P<0.05);抑制miR-30a-5p、过表达SIRT1均可促进OA软骨细胞增殖,抑制其凋亡。miR-30a-5p靶向SIRT1。敲减SIRT1表达可逆转抑制miR-30a-5p对OA软骨细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。提示miR-30a-5p可促进OA软骨细胞增殖,抑制其凋亡,其机制可能与靶向SIRT1有关,这可为OA的靶向治疗提供依据。