微小RNA-323通过前列腺凋亡反应蛋白-4/cleaved caspase-3通路缓解心肌缺血再灌注损伤

目的探讨微小RNA-323(miR-323)对缺血再灌注诱导心肌细胞损伤的影响。方法建立H9C2缺氧/复氧(HO)损伤细胞模型与小鼠缺血/再灌注(I/R)模型,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)比色法检测心肌细胞活力,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测心肌细胞损伤;采用小动物超声检测模型小鼠心功能情况,四唑红-伊文思蓝(TTC-EB)双染色法测量心肌梗死面积。HO处理前后采用Western-blot法检测前列腺凋亡反应蛋白-4(PAR4)、cleaved caspase-3的蛋白水平。结果在细胞模型中,与对照组比较,缺氧/复氧-miR-323(HO-miR-323)组细胞活力改善(t=8.50,P<0.01),LDH释放降低(t=13.65,P<0.01);与miR-323-抑制剂(miR-323-inhibitor)组比较,HO-miR-323-抑制剂(HO-miR-323-inhibitor)组中细胞活力下降(t=8.46,P<0.01),LDH释放增加(t=22.75,P<0.01)。在动物模型中,与对照组相比,miR-323-激动剂(miR-323-agomiR)组心脏功能改善[左室射血分数(LVEF):(39.9±4.4)%比(32.0±3.2)%,t=3.54,P<0.01;左心室缩短分数(LVFS):(19.2±2.0)%比(15.4±2.1)%,t=3.17,P=0.01],miR-323-拮抗剂(miR-323-antagomiR)组心功能降低[LVEF:(29.2±3.7)%比(34.0±4.1)%,t=2.20,P=0.04;LVFS:(11.9±1.7)%比(14.9±1.9)%,t=2.74,P=0.01]。与对照组相比,miR-323-agomiR组心肌梗死面积[(47.2±9.1)%比(57.7±5.9)%,t=2.38,P=0.04]和危险区相对面积[(30.2±4.2)%比(44.9±6.4)%,t=4.70,P<0.01]减少,miR-323-antagomiR组梗死面积[(65.1±7.8)%比(53.2±6.7)%,t=2.83,P=0.02]与危险区相对面积[(53.5±4.5)%比(44.3±7.5)%,t=2.59,P=0.03]增加。转染miR-323可抑制H9C2细胞PAR4的表达,同时减少cleaved caspase-3蛋白表达。结论miR-323通过靶向PAR4调节cleaved caspase-3,从而改善缺血再灌注造成的心肌细胞损伤和改善心功能障碍。

miR-323通过FGF9调控缺氧诱导的心肌H9C2细胞凋亡

目的:探讨微小RNA-323(miR-323)对缺氧诱导大鼠心肌H9C2细胞凋亡的影响及其机制。方法:建立缺氧损伤的H9C2细胞模型,在H9C2细胞转染anti-miR-323、pcDNA-FGF9和si-FGF9,并缺氧处理48 h。采用qPCR检测miR-323的表达,Western blot检测成纤维细胞生长因子9(FGF9)、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p-JNK的蛋白水平,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。生物学信息预测miR-323的靶基因并用双萤光素酶报告基因进一步验证。结果:缺氧明显降低H9C2细胞12 h、24 h和48 h的细胞活力(P<0.05),显著提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),效应均呈时间依赖性。缺氧处理的H9C2细胞中miR-323和p-JNK水平上调,FGF9蛋白表达下调(P<0.05)。下调miR-323表达或过表达FGF9显著提高缺氧处理的H9C2细胞活力,降低细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白的水平(P<0.05)。FGF9是miR-323的靶基因。下调FGF9表达逆转下调miR-323表达对缺氧诱导H9C2细胞损伤的抑制作用。miR-323调控FGF9影响p-JNK水平。结论:miR-323通过靶向FGF9调节JNK信号通路,从而影响缺氧处理心肌H9C2细胞的活力和凋亡。