微小RNA-324-5p在恶性肿瘤中的作用及其机制研究进展

微小RNA(miRNA)是一类长度约19~25个核苷酸的非编码单链RNA,可与靶基因3′非翻译区完全或不完全结合,抑制信使RNA翻译或促进其降解,发挥转录后调控作用。目前,已在多种恶性肿瘤中发现miR-324-5p的表达存在异常,并且在不同肿瘤中miR-324-5p通过作用于不同的靶基因调控着癌细胞的增殖、侵袭、转移和凋亡,表现出抑癌或促癌作用。该文对miR-324-5p在恶性肿瘤中的重要生物学功能和相关机制进行了综述,旨在为恶性肿瘤相关标志物和有效治疗靶点的开发提供新思路。

微小RNA-324对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭及ETS1表达的影响

目的探讨微小RNA-324(miR-324)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移和侵袭能力及E26转录因子1(ETS1)表达的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)比较正常支气管上皮细胞16HBE和NSCLC细胞H322中miR-324水平的差异,采用脂质体Lipofectamine 2000法将miR-324抑制物或模拟物分别转染至H322细胞(抑制组和过表达组),以仅转染脂质体的细胞为空转染组;QPCR检测转染48 h后各组的miR-324水平,采用CCK-8法检测各组转染24、48、72 h的增殖情况,采用Transwell法检测各组的迁移和侵袭能力,Western blotting检测各组的ETS1表达情况。结果 QPCR检测结果显示H322细胞的miR-324水平为0.172±0.023,低于正常支气管上皮细胞16HBE的1.106±0.274,差异有统计学意义(P<0.05)。空转染组、抑制组和过表达组的miR-324水平分别为1.069±0.082、0.287±0.034和7.114±0.726,与空转染组相比,过表达组的miR-324水平升高而抑制组的miR-324水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与空转染组相比,过表达组的增殖率降低而抑制组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell检测结果显示迁移实验中空转染组、抑制组和过表达组的穿膜细胞数分别为(472.3±35.6)个、(692.1±50.6)个和(341.7±37.5)个,侵袭实验中空转染组、抑制组和过表达组的穿膜细胞数分别为(392.1±40.5)个、(521.6±57.6)个和(228.3±31.6)个,与空转染组相比,抑制组的穿膜细胞数升高而过表达组的穿膜细胞数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染组、抑制组和过表达组的ETS1蛋白水平为0.56±0.13、0.87±0.23和0.26±0.09,与空转染组相比,抑制组的ETS1水平升高而过表达组的ETS1水平降低(P<0.05)。结论 miR-324在NSCLC细胞中的表达下调并可抑制细胞增殖和侵袭迁移能力,发挥类似抑癌基因的作用,可能通过靶向转录因子ETS1表达来发挥作用。

血清中异常表达的微小RNA-324-5p在动脉粥样硬化诊断和预后评估中的价值分析

目的:通过检测微小RNA-324-5p(miR-324-5p)在动脉粥样硬化(AS)患者血清中的表达水平,分析miR-324-5p在临床中的诊断和预后评估价值。方法:通过实时荧光定量PCR技术检测AS患者与健康对照人群血清中miR-324-5p的表达水平;采用Spearman相关系数分析miR-324-5p的表达与颈动脉内膜-中膜厚度(CIMT)的相关性;通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估miR-324-5p在AS中的诊断价值;通过Kaplan-Meier生存曲线、单因素和多因素Cox回归分析检测miR-324-5p在AS中的预后评估价值。结果:AS患者血清中miR-324-5p的表达水平较健康对照人群显著下降(P<0.001),且miR-324-5p在CIMT值较低的患者中表达,两者为负相关性(r=-0.8043,P<0.001)。ROC曲线下面积为0.874,具有较高的敏感性(80%)和特异性(87.1%),证明miR-324-5p在AS患者中具有较高的诊断准确性。同时发现miR-324-5p可以作为AS的独立预后因子(HR=3.318,95%CI=1.219~9.031,P=0.019),低表达miR-324-5p患者发生心血管事件的概率较高(log-rank P=0.002)。结论:低表达miR-324-5p可以作为AS诊断的一种潜在标志物,并且与AS的不良预后相关。

微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平及预后评估价值分析

目的探讨微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平及预后评估价值。方法选取2020年6月至2021年6月本防治中心收治的80例颈动脉粥样硬化患者(实验组)及健康体检的80例健康者(对照组)为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术对所有受试者血清中微小RNA-324-5p的表达水平进行检测,通过Spearman相关性系数对微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平与颈动脉内膜-中膜厚度(CIMT)相关性进行分析,通过单因素和多因素Cox回归分析微小RNA-324-5p对颈动脉粥样硬化患者的预后评估价值。结果实验组微小RNA-324-5p在颈动脉粥样硬化患者血清中的表达水平明显低于对照组(P<0.05);Spearman相关性系数分析结果显示,微小RNA-324-5p在CIMT值相对较低的颈动脉粥样硬化患者中表达,并且微小RNA-324-5p的表达量与CIMT值呈负相关(P<0.05);单因素和多因素Cox回归分析结果显示,微小RNA-324-5p降低是颈动脉粥样硬化的独立预后因子(P<0.05)。结论颈动脉粥样硬化患者存在微小RNA-324-5p低表达,可作为临床诊断的潜在血清标志物,且微小RNA-324-5p低表达与患者预后不良密切相关。

多囊卵巢综合征患者血清微小RNA-324-3p微小RNA-224与超声参数的相关性

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微小RNA-324-3p(miR-324-3p)、微小RNA-224(miR-224)与超声参数的相关性。方法选取2015年1月—2018年1月在该院就诊的80例PCOS患者为观察组,另外选取同期71例育龄期健康妇女为对照组。记录两组年龄、体质指数(BMI)、腰围、臀围、收缩压及舒张压,采用日立7600全自动生化仪检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及空腹血糖(FPG),采用荧光实时定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测血清中miR-324-3p、miR-224表达,采用GE SONOACE X7超声诊断仪检测记录卵巢体积、卵泡数目及血流指数。比较两组基线资料、超声参数、血清中miR-324-3p、miR-224表达差异;采用Spearman分析PCOS患者血清miR-324-3p、miR-224表达与卵巢体积、卵泡数目、血流指数之间的相关性;采用Logistic回归模型分析影响PCOS产生的因素。结果两组年龄、BMI、腰围、臀围、收缩压、舒张压、TG、TC、HDL-C、LDL-C及FPG相比,差异均无统计学意义(均P>0.05);观察组与对照组相比,卵巢体积、卵泡数目及血流指数均较高(均P<0.05),血清miR-324-3p、miR-224表达均较低(P<0.05);Spearman相关分析显示,PCOS患者血清miR-324-3p、miR-224与卵巢体积、卵泡数目及血流指数均呈负相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果表明,miR-324-3p、miR-224均是PCOS产生的保护因素。结论PCOS患者血清miR-324-3p、miR-224均为低表达,且与患者卵巢体积、卵泡数目、血流指数密切相关,可能为PCOS的临床诊断及治疗提供新思路。

持续性心房颤动患者血清miR-133a-3p和miR-324-3p表达与射频消融术后房颤复发的关系

目的探讨血清miR-133a-3p、miR-324-3p在持续性心房颤动患者血清中的表达以及与射频消融术后房颤复发的关系。方法收集2019年7月~2022年7月于沧州市人民医院住院诊治并接受射频消融术治疗的180例持续性心房颤动患者(持续性心房颤动组)作为研究对象,根据房颤是否复发,分为无复发组(n=116)和复发组(n=64),另选取同期在该院体检的180例健康人作为对照组。比较各组血清miR-133a-3p,miR-324-3p表达水平;多因素Logistic回归分析持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的影响因素;ROC曲线分析血清miR-133a-3p,miR-324-3p水平对持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的预测价值。结果持续性心房颤动组血清miR-133a-3p(0.76±0.25),miR-324-3p(0.68±0.21)水平显著低于对照组(1.03±0.32,1.05±0.30),差异具有统计学意义(t=8.921,13.556,均P<0.05)。复发组血清miR-133a-3p(0.58±0.19),miR-324-3p水平(0.50±0.16)均显著低于无复发组(0.86±0.27,0.78±0.25),差异具有统计学意义(t=7.349,8.087,均P<0.055)。多因素Logistic回归分析,结果显示,血清miR-133a-3p[OR(95%CI):0.673(0.534~0.848)],miR-324-3p[OR(95%CI):0.756(0.629~0.909)]为持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的保护因素(均P<0.05),心率[OR(95%CI):2.143(1.265~3.631)]、LAD[OR(95%CI):1.756(1.159~2.661)]为持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的独立危险因素(均P<0.05)。miR-133a-3p,miR-324-3p二者联合预测持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的AUC为0.901,敏感度和特异度分别为82.81%,86.21%,优于各自单独预测(Z=4.210,2.804,均P<0.05)。结论持续性心房颤动患者血清miR-133a-3p,miR-324-3p表达显著降低,二者联合对预测持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发有较好的参考价值。

lncRNA HCG18调控miR-324-5p/GLI1轴在急性髓系白血病细胞增殖和侵袭中的作用机制

目的长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调对急性髓系白血病(AML)的作用机制尚不清楚。探讨lncRNA HCG18控微小RNA-324-5p(miR-324-5p)/胶质瘤相关基因同源蛋白1(GLI1)轴对AML细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法选择2017年1月-2021年3月在本院血液科住院治疗的AML患者35例作为研究对象(AML组),另选取同期在本院治疗并进行骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤性疾病患者30例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有入选人员骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18与miR-324-5p的表达。体外培养AML细胞HL-60,将细胞分为对照组、si-NC组、lncRNA HCG18 siRNA组、miR-NC组、miR-324-5p mimics组、miR-324-5p mimics+GLI1 NC组、miR-324-5p mimics+GLI1组、lncRNA HCG18 siRNA+NC inhibitor组、lncRNA HCG18 siRNA+miR-324-5p inhibitor组,分别检测检测HL-60细胞中lncRNA HCG18、miR-324-5p表达、HL-60细胞增殖、迁移与侵袭及GLI1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告系统分析miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1的靶向关系。结果与对照组比较,AML组患者骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18表达水平(2.85±0.32)较对照组(1.03±0.11)显著升高(P<0.01),而miR-324-5p表达水平(0.47±0.05)较对照组(1.05±0.09)显著降低(P<0.01);沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-324-5p后HL-60细胞增殖、细胞迁移与侵袭数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1均有靶向关系;抑制miR-324-5p表达可逆转沉默lncRNA HCG18表达对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用;GLI1过表达可逆转过表达miR-324-5p对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论lncRNA HCG18在AML细胞中高表达,抑制lncRNA HCG18表达可通过调控miR-324-5p/GLI1轴抑制AML细胞增殖、迁移与侵袭。

miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制研究

背景miR-324-3P在多种恶性肿瘤中发挥着重要作用,调控Wnt/β-catenin信号通路可能是其参与肿瘤进展的重要途径,miR-324-3P在宫颈癌中的具体作用尚不清楚。目的研究miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制。方法收集入住我院宫颈癌患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织各40例,TargetScan7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-324-3P对WNT3a基因的靶向调控作用。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中miR-324-3P、WNT3a mRNA的表达水平。Pearson法分析宫颈癌组织中miR-324-3P与WNT3a表达的相关性。常规培养宫颈癌细胞(HeLa细胞),将其分为对照组(NC组)、miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组,采用Lipofectamine 2000转染试剂进行各组质粒的转染。四唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的增殖能力,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Western-blot法检测各组细胞中WNT3a和β-catenin的表达。结果宫颈癌组织中miR-324-3P、WNT3a的相对表达量分别为0.79±0.39、1.46±0.53,与正常宫颈组织相比,miR-324-3P表达降低、WNT3a表达升高。Targetscan7.1预测软件、双荧光素酶报告基因试验及qRT-PCR表明miR-324-3P靶向调控WNT3a,且Pearson分析显示二者呈负相关。与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力降低。与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力增加,WNT3a削弱miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力的抑制作用。与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组细胞中WNT3a和β-catenin表达降低。而与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组WNT3a和β-catenin蛋白表达增加。WNT3a削弱miR-324-3P对β-catenin的抑制作用。结论miR-324-3P靶向调控WNT3a表达,抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力。

miR-324在心血管疾病发病机制中的研究进展

心血管疾病多见于中老年人,具有患病率高、病死率高的特点,严重影响患者预后和生活质量。而微小RNA-324(miR-324)作为一类具有高度保守的非编码RNA,可通过“臂转换”发挥生物学功能,参与细胞代谢、细胞增殖、细胞应激、细胞凋亡等信号通路的调节。近年发现,miR-324在心血管疾病中参与了脂质代谢、氧化应激、炎症、纤维化以及心脏发育等机制的调控。

微小RNA-216a、324-5p、29a在急性胰腺炎患者外周血中的表达及其与并发肝损伤的相关性

目的探讨微小RNA(miR)-216a、miR-324-5p、miR-29a在急性胰腺炎(AP)患者外周血中表达的意义及与胰腺炎并发肝损伤的相关性。方法采用病例对照研究设计,选取2017年6月至2019年5月商丘市第一人民医院收治的130例AP患者,分为轻症AP组(MAP组)和中重症AP组(SAP组),肝损伤组54例(MAP 20例、SAP 34例)与非肝损伤组76例(均为MAP);另选取40名健康志愿者为健康组。比较MAP组、SAP组、健康组以及肝损伤组与非肝损伤组外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a表达水平,并分析其与临床指标相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血各miRNA水平对AP并发肝损伤的预测价值。结果MAP组、SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于健康组,miR-324-5p水平低于健康组(均P<0.01);SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于MAP组,miR-324-5p水平低于健康组(均P<0.01)。Balthazar CT评分、急性生理与慢性健康状况评分(APACHEⅡ)评分、C反应蛋白水平、住院时间与外周血miR-216a、miR-29a水平均呈正相关(均P<0.05),与miR-324-5p水平呈负相关(均P<0.05)。肝损伤组外周血miR-216a、miR-29a水平高于非肝损伤组,且在肝损伤组中SAP患者高于MAP患者(均P<0.05);肝损伤组外周血miR-324-5p水平低于非肝损伤组,且肝损伤组中SAP患者低于MAP患者(均P<0.05)。外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a预测AP并发肝损伤的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.694、0.750、0.814。结论miR-216a、miR-29a水平在AP患者外周血中表达增高,miR-324-5p水平降低,与Balthazar CT评分、APACHEⅡ评分、C反应蛋白水平、住院时间关系密切,且对AP并发肝损伤有一定预测价值,其中miR-29a预测价值最高。

死亡相关蛋白激酶1及结节性硬化复合物蛋白2基因在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系

目的通过生物信息学方法研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和结节性硬化复合物蛋白2(TSC2)基因在胰腺癌中的表达情况,并探讨分析其与预后的关系。方法利用来自癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库的胰腺癌患者数据进行Kaplan-Meier分析,进而深层次探讨DAPK1和TSC2基因表达水平与患者总生存期或无进展生存期(PFS)的关系,同时,对影响预后的因素进行Cox多因素分析,以及分析胰腺癌中DAPK1和TSC2基因启动子的甲基化水平。此外,通过双荧光素酶报告基因检测系统,验证靶向DAPK1的微小RNA(miR),并应用定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法验证在胰腺癌细胞中miR-324-5p负调控DAPK1的表达。结果多因素分析显示,肿瘤分级(P=0.005)、R0切除(P<0.001)及TSC2表达情况(P=0.005)是影响胰腺癌患者PFS的独立危险因素;肿瘤部位(P=0.006)、病理类型(P=0.002)及分子靶向治疗(P<0.001)是影响胰腺癌患者总生存期的独立危险因素。DAPK1基因低表达且TSC2基因高表达的胰腺癌患者具有更好的总生存期(P=0.024)。DAPK1和TSC2甲基化水平与相应的mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.69、-0.37,均P<0.05)。体外实验结果证实,过表达的miR-324-5p显著抑制了胰腺癌Pa Ca-2和PANC-1细胞DAPK1 mRNA和蛋白的表达[mRNA:(0.37±0.02)比(1.00±0.02)、(0.53±0.01)比(1.00±0.06);蛋白:(0.54±0.06)比(1.04±0.12)、(0.63±0.11)比(1.01±0.11)](均P<0.05)。结论DAPK1基因联合TSC2基因的表达情况可以预测胰腺癌患者的预后;在胰腺癌组织中,DAPK1和TSC2启动子的低甲基化水平是DAPK1和TSC2高表达的重要因素;miR-324-5p负调控DAPK1的表达,有望成为胰腺癌靶向治疗的新靶点。

新生儿先天性心脏病相关微小核糖核酸表达及与临床特征的研究

目的:研究新生儿先天性心脏病微小RNA-222-3p(miR-222-3p)、微小RNA-1(miR-1)、微小RNA-324-5p(miR-324-5p)表达及与临床特征的相关性。方法:选取2020年3月至2021年3月收治的88例先天性心脏病新生患儿作为疾病组,另选取同期健康体检新生儿50例作为对照组,采用荧光定量PCR法检测所有研究对象miR-222-3p、miR-324-5p、miR-1表达量。结果:与对照组比较,疾病组miR-222-3p、miR-1、miR-324-5p表达均显著升高,有肺动脉狭窄、主动脉狭窄、房间隔缺损患儿miR-222-3p、miR-1、miR-324-5p表达量升高,预后不良组miR-222-3p、miR-1、miR-324-5p表达均显著上升,与miR-1、miR-222-3p、miR-324-5p比较,3项联合对疾病组患儿预测及诊断价值较高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-222-3p、miR-1、miR-324-5P的相关性分析显示,miR-222-3p与miR-1呈正相关(r=0.269,P=0.018);miR-1与miR-324-5p呈正相关(r=0.245,P=0.034);miR-222-3p与miR-324-5P呈正相关(r=0.329,P=0.002)。结论:miR-222-3p、miR-1、miR-324-5p在新生儿先天性心脏病中异常高表达,可用于临床上新生儿先天性心脏病的检测。

阿帕替尼上调miR-324-5p表达抑制结肠癌细胞的研究

目的探讨阿帕替尼对结肠癌细胞生物学行为的影响和机制。方法将结肠癌细胞HCT116分为对照(NC)组,低、中、高剂量组(0.5,1.0和2.0μmol·L^(-1)阿帕替尼),转染1组(2.0μmol·L^(-1)阿帕替尼+anti-miR-NC),转染2组(2.0μmol·L^(-1)阿帕替尼+anti-miR-324-5p)。细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖率;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;荧光定量聚合酶链反应法检测miR-324-5p表达。结果NC组,低、中、高剂量组、转染1组、转染2组HCT116细胞增殖率分别为(100.00±2.79)%,(94.29±1.74)%,(76.48±1.65)%,(51.48±1.75)%,(51.58±0.88)%和(93.64±3.90)%;迁移细胞数分别为(206.27±9.30),(163.23±3.84),(133.83±4.26),(104.32±5.72),(107.93±3.14)和(194.51±3.96)个;侵袭细胞数分别为(153.47±4.37),(121.42±3.60),(91.99±2.46),(63.37±1.53),(65.95±2.12)和(146.87±3.95)个;miR-324-5p表达水平分别为(1.00±0.09),(1.64±0.10),(1.97±0.13),(2.36±0.17),(1.00±0.11)和(0.45±0.03)。与NC组比较,低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移和侵袭数显著降低,miR-324-5p表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与转染1组比较,转染2组细胞增殖率、迁移和侵袭数显著升高差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论阿帕替尼通过上调miR-324-5p的表达来抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。