鼻咽癌组织中微小RNA-328的表达及其对细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨鼻咽癌组织中微小RNA-328(mi R-328)的表达及其对鼻咽癌CNE-2细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测86例鼻咽癌组织和15例慢性鼻咽炎组织及鼻咽癌细胞系CNE-2、HK1和正常鼻咽上皮细胞NP69中的mi R-328水平,分析mi R-328水平与鼻咽癌临床病理特征(年龄、性别、临床分期、淋巴结转移、复发和生存状态)的关系;采用脂质体Lipofectamine 2000法向对数生长期CNE-2细胞转染mi R-328模拟物(mimics)或阴性对照(NC),采用QPCR检测转染48 h后的mi R-328水平以评价转染效率,采用Transwell迁移和侵袭实验检测转染后CNE-2细胞的穿膜细胞数目。结果 QPCR检测结果显示,鼻咽癌细胞CNE-2、HK1中mi R-328水平低于正常鼻咽上皮细胞株NP69(P<0. 05);86例鼻咽癌组织的mi R-328水平亦低于15例慢性鼻咽炎组织,差异有统计学意义(P<0. 05)。mi R-328水平与鼻咽癌患者的复发状态(P=0. 037)、临床分期(P=0. 005)和生存状态(P=0. 012)有关,但与年龄、性别和淋巴结转移无关(P>0. 05)。转染mimics 48 h后的细胞中mi R-328水平大幅升高,与转染NC的细胞比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。Transwell实验结果显示,转染mi R-328 mimics后,迁移和侵袭实验中CNE-2细胞的穿膜数目均降低,与转染NC的细胞比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 mi R-328在鼻咽癌组织和细胞中低表达,且参与鼻咽癌的发生发展,上调其水平可抑制迁移侵袭过程,在鼻咽癌防治中有一定价值。

微小RNA-328对人宫颈癌顺铂耐药HeLa细胞株耐药性的影响

目的探讨微小RNA-328(miRNA-328)对顺铂(Cisplatin,DDP)耐药人宫颈癌HeLa细胞的逆转作用及相关的分子机制。方法体外用低浓度梯度递增方法构建顺铂耐药细胞株(HeLa/DDP);将细胞分为空白对照组(不做处理)、NC组(采用脂质体处理)、inhibitor组(转染NC序列)和mimics组(转染miR-328 mimics)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测DDP处理后各组细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用Transwell小室检测细胞迁移情况;用蛋白质印迹法检测相关蛋白表达量。结果miRNA-328在HeLa/DDP细胞中处于低表达状态。空白对照组、NC组、inhibitor组及mimics组在顺铂作用下的的IC50分别为28.5,29.1,66.2,10.2μg·mL^(-1),耐药指数分别为2.5,2.6和5.8及0.9;迁移细胞比例分别为(32.5±3.6)%,(27.6±2.4)%,(49.6±3.1)%及(13.1±1.1)%;凋亡率分别为(4.87±0.89)%,(6.83±0.57)%,(1.11±0.18)%,(40.27±2.18)%,mimics组与空白对照组、NC组、inhibitor组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miRNA-328过表达能够降低HeLa/DDP对顺铂的耐药性,提高其对顺铂的敏感性。

DNA甲基化调控miRNA-328的表达水平与乳腺癌预后的关系分析

目的探讨DNA甲基化与微小RNA-328(miR-328)表达的关系及miR-328与浸润性乳腺癌临床病理特征和预后的关系。方法回顾性分析1998年1月至2013年12月从TCGA乳腺癌芯片数据提取的1090例浸润性乳腺癌组织和104例癌旁组织的miR-328表达水平,分析从TCGA_BRCA_h Methyl450芯片数据中获取的775例浸润性乳腺癌组织和98例癌旁组织的miR-328启动子区Cp G位点(cg16421621、cg04650403)甲基化率并计算启动子区甲基化与miR-328水平的相关性,从UCSC Genome Browser中的clinical_data_dictionary芯片数据中获取854例有完整临床病理资料及随访数据的乳腺癌标本,分析miR-328表达与临床病理特征及预后的关系,采用Cox回归模型分析影响预后的因素。结果 TCGA数据库1998年1月至2013年12月有miR-328表达量的1194例乳腺癌及癌旁组织中,1090例浸润性乳腺癌组织的miR-328水平为5.224±1.155,低于104例癌旁组织的6.246±0.923,差异有统计学意义(P<0.01);775例浸润性乳腺癌组织的miR-328基因启动子区域cg16421621和cg04650403的甲基化率分别为(0.415±0.201)%和(0.193±0.068)%,高于98例癌旁组织的(0.407±0.222)%和(0.094±0.079)%,差异有统计学意义(P<0.01);浸润性乳腺癌标本中miR-328的表达量与其启动子区域CG位点(cg16421621、cg04650403)甲基化率呈负相关(r=-0.127,P=0.005)。854例有完整信息的浸润性乳腺癌患者中,miR-328表达水平与淋巴结转移和肿瘤大小有关(P<0.05);miR-328低表达组(<5.462)的中位总生存时间(OS)为7.25年,低于高表达组(≥5.462)的8.75年,差异有统计学意义(P<0.01)。Cox多因素回归分析显示,年龄、淋巴结转移与miR-328表达水平为影响OS的独立因素(P<0.05),miR-328高表达组的危险程度低于低表达组(P<0.01)。结论浸润性乳腺癌中miR-328表达受其基因启动子区甲基化调控;miRNA-328与浸润性乳腺癌的临床病理特征有关,并能作为影响浸润性乳腺癌预后的危险因素。

miRNA-244与miRNA-328在胆管癌患者血清中的表达及意义

目的:研究胆管癌患者血清中微小RNA(miRNA)-244和miRNA-328的表达水平和临床意义。方法:选取肝门部胆管癌患者52例,其中胆管癌未转移患者20例,胆管癌伴转移患者32例,同期收治肝良性瘤患者43例作为对照组。采用实时定量PCR的方法,检测血清中的miRNA-244和miRNA-328的表达水平,通过ROC曲线分析miRNA-244和miRNA-328在胆管癌转移中的诊断意义。结果:胆管癌未转移组患者血清miRNA-244高于对照组(P<0.05),胆管癌转移组患者血清miRNA-244高于对照组(P<0.05);胆管癌转移组患者血清miRNA-328低于对照组(P<0.05);在区分胆管癌是否转移方面,miRNA-244表达水平佳界值为4.26,此时其灵敏度和特异度分别为73.0%和60.1%,AUC值为0.7225(P=0.0161)。结论:miRNA-244在胆管癌患者中的表达水平异常升高,而miRNA-328在胆管癌患者血清中表达较低,miRNA-244对诊断和评价胆管癌是否转移有一定临床意义。