长链非编码RNA DLX6-AS1与微小RNA-346在糖尿病足72例血清中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLX6-AS1与微小RNA(miR)-346在糖尿病足病人血清中的表达及其临床意义。方法收集2017年5月至2018年12月南阳市中心医院收治的72例糖尿病足病人为糖尿病足组,选取同期该院收治的60例2型糖尿病无糖尿病足病人为糖尿病组,取同期于该院进行健康体检的健康志愿者55例作为对照组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组受检者血清中DLX6-AS1、miR-346的表达水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、成纤维细胞生长因子2(FGF2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用电化学发光法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)水平;采用Pearson相关性分析检验糖尿病足病人血清DLX6-AS1、miR-346的表达水平与炎性因子的相关性;采用logistic回归分析研究影响糖尿病足发生的相关因素。结果糖尿病组、糖尿病足组病人VCAM-1、FGF2、TNF-α、IL-6水平高于对照组(P<0.05),糖尿病组与糖尿病足组比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组DLX6-AS1的表达量是1.01±0.13,低于糖尿病组、糖尿病足组DLX6-AS1的表达量2.16±0.25、3.20±1.03(P<0.05);对照组miR-346的表达水平是1.00±0.16,高于糖尿病组、糖尿病足组miR-346的表达水平0.73±0.11、0.41±0.08(P<0.05),糖尿病组与糖尿病足组相比差异有统计学意义(P<0.05);随着糖尿病足病人Wagner分级增加DLX6-AS1的表达水平显著升高(P<0.05),miR-346的表达水平显著降低(P<0.05);DLX6-AS1的表达与FGF2、TNF-α、IL-6呈正相关(P<0.05),而miR-346与之呈负相关(P<0.05);DLX6-AS1与miR-346表达量是影响糖尿病足发生的危险因素(P<0.05)。结论糖尿病足病人血清中DLX6-AS1表达量升高,而miR-346表达量降低,二者可能参与糖尿病足发生及发展过程,并可能作为临床诊断的分子标志物。

微小RNA-346与IDH基因野生型胶质瘤TRIM38基因表达和患者预后的关系

目的探讨微小RNA(miR)-346与异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因野生型胶质瘤中三基序蛋白质38(TRIM38)基因表达水平和患者总体生存期(OS)的关系。方法利用中国胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库的多组学分子数据,比较miR-346在胶质瘤中的表达改变以及与TRIM38基因表达和患者OS的关系;采用细胞转染和双荧光素酶实验检测miR-346与TRIM38基因在胶质瘤细胞中的相互关系。结果共纳入CGGA中各级别胶质瘤样本198例及对照脑组织样本5例进行比较,发现miR-346表达水平随肿瘤级别的增加而降低(P<0.05),且IDH基因野生型肿瘤表达水平低于IDH基因突变型肿瘤(P<0.05)。Pearson相关性分析发现IH基因野生型胶质瘤中,miR-346与TRIM38基因表达之间呈显著负向相关性(P<0.05)。生存分析显示miR-346低表达组患者的OS与miR-346高表达组患者相比显著缩短(P=0.05),其预后指示能力独立于患者年龄及治疗方案等因素(~均P<0.05),但不独立于肿瘤级别(P>0.05)。细胞实验发现转染miR-346类似物可降低U251细胞中TRIM38基因的表达水平(P<0.05)。双荧光素酶实验证实miR-346与TRIM38存在特异性结合。结论miR346在IDH野生型胶质瘤样本中表达下降,且与患者的不良预后相关,这可能与其靶向调控促癌基因TRIM38表达有关。

miR-346在乳腺癌中的表达及对细胞生长、侵袭和凋亡的影响

目的观察微小RNA(miRNA)-346对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响并探讨其相关调控机制。方法采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及其相应癌旁正常组织中miRNA-346的表达。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞系(MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-435,MDA-MB-468,T47D)与正常乳腺细胞(MCF-10A)中miRNA-346的表达。以miRNA-346表达最高的乳腺癌细胞系MDA-MB-468为对象,分别转染miRNA-346抑制剂和miR-NC,命名为miR-346抑制剂组和对照组。real-time PCR检测转染效果利用CCK-8试剂及Transwell小室分别检测转染后乳腺癌细胞增殖和侵袭转移能力。利用流式细胞仪检测miR-346表达对细胞凋亡的影响。生物信息学软件预测miR-346的靶基因。real-time PCR和Western blot检测乳腺癌细胞中靶基因的表达。结果乳腺癌组织中miR-346 mRNA的相对水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。乳腺癌细胞系中miR-346 mRNA的相对水平均显著高于正常乳腺细胞,且以MDA-MB-468升高最明显(P<0.01)。miRNA-346抑制剂组miR-346的表达显著低于对照组(P<0.01)。与对照组比较,miR-346抑制剂组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),迁移能力和侵袭能力明显降低(P<0.01)。生物信息学软件显示miR-346的靶基因是BRMS1。在乳腺癌组织中BRMS1 mRNA和蛋白相对表达量显著低于癌旁正常组织。与对照组比较,miR-346抑制剂组中BRMS1 mRNA表达显著增加,且miR-346与BRMS1 mRNA的表达水平呈负相关(r=-0.82,P<0.01)。结论miR-346在乳腺癌细胞中呈现高表达,体外实验发现miR-346低表达能够抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,其机制可能与上调BRMS1有关。

西红花苷上调miR-346对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

目的探究西红花苷上调微小RNA-346(miR-346)对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用。方法通过开胸结扎左前降支冠状动脉后再灌注构建心肌缺血再灌注大鼠模型,50只雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只,分别为假手术组、模型组、西红花苷组、miR-346阴性对照(miR-NC)组、miR-346抑制剂组。假手术组大鼠开胸,但不结扎冠状动脉。miR-NC组、miR-346抑制剂组大鼠在结扎左前降支冠状动脉前48 h通过尾静脉注射miR-NC或miR-346抑制剂。8 mg西红花苷用100 ml生理盐水溶解稀释。西红花苷组、miR-NC组、miR-346抑制剂组大鼠按照80 mg/kg灌胃,假手术组、模型组大鼠灌胃5 ml/kg生理盐水。每天1次,连续给药15 d。酶联免疫吸附试验检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-346表达水平,HE染色法检测心肌组织的病理变化,TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡率,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠血清中CK-MB、LDH水平,病理评分,心肌细胞凋亡率及裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达水平均升高(均P<0.05),心肌组织中miR-346表达水平和Bcl-2水平均降低(均P<0.05);与模型组相比,西红花苷组大鼠血清中CK-MB、LDH水平,病理评分,心肌细胞凋亡率及cleaved Caspase-3和Bax表达水平均降低(均P<0.05),心肌组织中miR-346表达水平和Bcl-2水平均升高(均P<0.05);与miR-NC组相比,miR-346抑制剂组大鼠血清中CK-MB、LDH水平,病理评分,心肌细胞凋亡率及cleaved Caspase-3和Bax表达水平均降低(均P<0.05),心肌组织中miR-346表达水平和Bcl-2水平均升高(均P<0.05)。结论西红花苷可通过上调miR-346减轻心肌缺血再灌注大鼠心肌组织损伤和心肌细胞凋亡。