非小细胞肺癌组织中微小RNA-34b的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-34b(miR-34b)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法收集本院2015年1月至2017年12月NSCLC患者的手术切除癌组织和癌旁组织120对,采用实时定量PCR(QPCR)检测组织中miR-34b的相对表达量并比较癌组织和配对癌旁组织中miR-34b的表达差异,以120例NSCLC组织中miR-34b表达水平的均数分为低表达组(<均数)和高表达组(≥均数),分析不同miR-34b表达水平与临床病理特征(性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、TNM分期、病理类型和复发情况)的关系。结果 QPCR检测结果显示癌组织的miR-34b水平为0.530±0.071,低于癌旁组织的1.036±0.198,差异有统计学意义(P<0.05);以120例NSCLC组织中miR-34b的均数为界值(0.530)分为低表达组64例和高表达组56例,分析结果显示miR-34b表达与性别、年龄、吸烟史和病理类型均无关(P>0.05),而与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、TNM分期和复发情况有关(P<0.05)。NSCLC肿瘤体积较大(≥3 cm)、淋巴结转移阳性、低分化、TNM分期较晚(Ⅲ期)及复发的高表达率分别为36.0%(18/50)、25.6%(10/39)、34.5%(19/55)、31.7%(13/41)和34.0%(16/47),均低于体积较小(<3 cm)、淋巴结转移阴性、高中分化、分期较早(Ⅰ～Ⅱ期)和未复发的54.3%(38/70)、56.8%(46/81)、56.9%(37/65)、54.4%(43/79)和54.8%(40/73),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NSCLC组织中miR-34b低表达,与肿瘤的发展和复发情况有关,miR-34b可能作为NSCLC潜在的分子筛查及预后预测标志物。

微小RNA-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用及验证两者相互作用关系

目的分析微小RNA(miR)-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用,并验证两者相互作用关系。方法 107例膀胱癌患者,全部患者均行手术治疗,取病理组织及瘤旁组织样本,比较miR-34b及c-Myc在膀胱癌和瘤旁组织、肌层浸润和肌层非浸润及的各病理分级的表达水平,采用荧光素酶法及生物信息学软件分析miR-34b与c-Myc的相互作用关系。结果 miR-34b在膀胱癌中的相对表达水平为(0.0213±0.0061),与瘤旁组织的(0.0563±0.0089)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在膀胱癌中的相对表达水平为(0.484±0.063),与瘤旁组织的(0.216±0.045)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.0234±0.0026),与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.0496±0.0075)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.5180±0.0826),与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.3140±0.0753)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.0364±0.0047)、(0.0219±0.0034)和(0.0102±0.0028),其表达水平随病理分级升高呈现降低趋势,组间对比差异有统计学意义(F=386.732, P<0.05);c-Myc在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.083±0.013)、(0.236±0.032)和(0.571±0.058),其表达水平随病理分级升高呈现上升趋势,组间对比差异有统计学意义(F=106.964, P<0.05)。经生物信息学软件检验发现, c-Myc是miR-34b的直接靶基因,采用荧光素酶法进一步检测后证实,共转染miR-34b的荧光强度(1.035±0.024)au明显低于共转染的c-Myc强度(3.572±0.068)au (P<0.05)。结论 c-Myc是miR-34b的直接靶基因,二者存在密切的相关性,可通过下调c-Myc水平提升miR-34b表达,抑制膀胱细胞癌增殖。

微小RNA-34b在胶质瘤组织的表达及其对人胶质瘤细胞株A172增殖、凋亡和侵袭力的影响

目的观察微小RNA（miRRNA，miR）-34b在胶质瘤组织中表达及对人胶质瘤细胞株A172增殖、凋亡和侵袭力的影响。方法选取择期行手术治疗的胶质瘤患者73例，同期留取行颅脑创伤颅内减压术患者正常脑组织标本30例作为对照组，培养人胶质瘤细胞株A172，根据转染物不同分为：miR-46b转染组、阴性对照组和空白对照组。利用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术检测胶质瘤和对照组组织及不同转染组细胞中miR-34b表达，噻唑蓝（MTF）法检测各转染组细胞增殖能力，利用流式细胞技术检测各转染组细胞凋亡率，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果胶质瘤组织中miR-34b相对表达量为1．26±0．11，显著低于对照组的1．73±0．14，差异有统计学意义（t=19．527，P〈0．01）；胶质瘤组织中miR-34b相对表达量与世界卫生组织（WHO）分级和Kamofsky功能状态评分明显相关（P〈0．05）；miR-46b转染组细胞中miR-34b相对表达量为0．91±0．11，高于阴性对照组和空白对照组，分别为0．62±0．09和0．64±0．10，差异均有统计学意义（F=147．399，P〈0．01）；与阴性对照组和空白对照组比较，miR-46b转染组细胞增殖能力被显著抑制（P〈0．05）；miR-46b转染组细胞凋亡率为（22．4±5．1）％，高于阴性对照组和空白对照组，分别为（10．6±3．2）％和（10．1±3．6）％，差异均有统计学意义（F=131．894，P〈0．01）；miR-34b转染组细胞迁移细胞数和侵袭细胞数均少于阴性对照组和空白对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-34b在胶质瘤组织中呈低表达，上调miR-34b表达可加速胶质瘤细胞凋亡发生，抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力。

外周血中miR-34b表达水平对Ⅲb~Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果及预后的评估价值分析

目的:探究外周血中微小RNA-34b(miR-34b)表达水平对Ⅲb~Ⅳ非小细胞肺癌(NSCLC)患者靶向治疗效果及预后的评估价值。方法:选取2020年1月至2022年1月于我院接受靶向治疗的104例NSCLC患者作为研究对象,根据靶向治疗效果分为有效组(n=40)及无效组(n=64)。所有患者治疗后均接受1年随访,根据预后情况分为生存组(n=32)及死亡组(n=72)。实时定量PCR检测外周血中miR-34b,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析外周血miR-34b表达水平对Ⅲb~Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果及预后的评估价值,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同外周血miR-34b表达水平与Ⅲb~Ⅳ期NSCLC患者预后的关系。结果:有效组外周血miR-34b表达水平高于无效组(P<0.05);ROC曲线显示,外周血miR-34b表达水平评估Ⅲb~Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果的AUC为0.856(P<0.05);存活组外周血miR-34b表达水平高于死亡组(P<0.05);ROC曲线显示,外周血miR-34b表达水平评估Ⅲb~Ⅳ期NSCLC患者预后的AUC为0.916(P<0.05);Log-rank检验显示,miR-34b>2.16组和miR-34b≤2.16组患者生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外周血miR-34b表达水平与Ⅲb~Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果及预后有关,检测外周血miR-34b表达水平有助于评估靶向治疗效果及预后。

MicroRNA-34b/c rs4938723 T>C多态性与中国汉族人群肾细胞癌易感性的相关性

目的：研究中国汉族人群microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）多态性与肾细胞癌易感性之间的关系。方法采用病例对照研究模式，通过TaqMan探针PCR法检测年龄和性别匹配的710例中国汉族人群肾细胞癌患者和760例正常人群的microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）基因型，探讨该位点基因多态性与肾细胞癌易感性之间的关系。结果与 TT／TC基因型携带者相比，CC型（OR＝1．53，95％ CI＝1．06～2．21，CC基因型比TT基因型；OR＝1．48，95％ CI＝1．05～2．10，CC基因型比T T／TC基因型）携带者发生肾细胞癌的危险性明显升高。分层分析显示携带CC基因型的老年患者（OR＝1．80，95％CI＝1．08～3．01）、男性患者（OR＝1．64，95％ CI＝1．08～2．51）、吸烟患者（OR＝2．07，95％ CI＝1．16～3．69）及饮酒患者（OR＝1．94，95％ CI＝1．01～3．73）发生肾细胞癌的危险性明显升高。结论 microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）基因多态性与我国汉族人群肾细胞癌易感性有关，CC型携带者发生肾细胞癌的危险性要明显高于T T／TC型携带者。

前列腺癌组织中miR-34b、Cyclin D1 mRNA表达变化及其意义

目的 观察前列腺癌(PCa)组织中微小RNA-34b(miR-34b)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达变化,并探讨其意义。方法 PCa组织57例份,良性前列腺增生(BPH)组织43例份,采用实时定量PCR法检测组织中miR-34b、Cyclin D1 mRNA,分析两指标间及与PCa临床病理特征的关系,比较不同水平miR-34b、Cyclin D1患者3年总体生存时间(OS)。结果 PCa和BPH组织中miR-34bmRNA相对表达量分别为0.57±0.35、1.24±0.48,Cyclin D1 mRNA相对表达量分别为2.72±0.47、0.94±0.21,两者比较,P均<0.05。miR-34b、Cyclin D1表达均与Pca患者Gleason评分、TNM分期有关(P均<0.05)。PCa组织中miR-34b与CyclinD1表达呈负相关(r=-0.517,P=0.013)。PCa组织中miR-34b mRNA相对表达量以中位数(P50)0.562为临界值分为miR-34b高表达组(24例)、miR-34b低表达组(33例),3年OS分别为83.3%、72.7%,两组比较,P<0.05;Cyclin D1 mRNA相对表达量以中位数(P50)2.705为临界值分为Cyclin D1高表达组(31例)和Cyclin D1低表达组(26例),3年OS分别为70.9%、84.6%,两组比较,P<0.05。结论 PCa组织中miR-34b表达降低、CyclinD1表达增高,二者异常表达与PCa的发生发展有关,有希望成为PCa诊断、治疗及预后评估的指标。

miR-34b促进关节软骨细胞基质退变的分子机制研究

目的探讨微小RNA-34b(mi R-34b)促进关节软骨细胞基质退变的分子机制。方法提取10例骨关节炎(OA)患者和7例创伤性截肢者的膝关节软骨组织,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-q PCR)法检测组织标本中mi R-34b表达水平。利用Ta rg e ts c a n基因信息软件预测得到mi R-34b靶基因为Sma d 3,构建Sma d 3野生型及突变型3′非编码区(3′-UTR)-荧光素酶报告载体,利用荧光素酶报告基因实验检测mi R-34b对Smad3基因野生型及突变型3′-UTR荧光素酶活性的影响。体外培养SW1353细胞,分为A、B、C和D组,分别加入等量脂质体、无义序列、mi R-34b模拟物(mi R-34b mimic)和mi R-34b抑制物(mi R-34b inhibitor)。RT-q PCR法检测mi R-34b、Smad3、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达水平。结果 OA软骨组织中mi R-34b表达水平较正常膝关节软骨组织明显上调(P<0.05)。SW1353细胞转染后,与A组比较,C组mi R-34b表达水平明显升高(P<0.05),D组明显降低(P<0.05);A组与B组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Targets Can软件预测mi R-34b的潜在靶基因为Smad3,荧光素酶报告基因实验证实mi R-34b直接靶向抑制靶基因Smad3;转染mi R-34b mimic和mi R-34inhib itor后,与A组比较,C组Sma d 3 m RNA表达水平明显降低(P<0.05),D组明显升高(P<0.05);A组与B组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染后,与A组比较,C组Ⅱ型胶原m RNA表达水平明显降低(P<0.05),D组明显升高(P<0.05);C组MMP-13m RNA明显升高(P<0.05),D组明显降低(P<0.05)。结论 mi R-34b可能通过抑制其靶基因Sma d 3的表达进而诱导人关节软骨细胞基质退变,从而促进OA的发生、发展。

前列腺癌患者血浆miR-135、miR-103、miR-34b表达水平及其与临床病理特征和预后的关系

目的探究血浆微小RNA-135(miR-135)、miR-103、miR-34b在前列腺癌中的表达水平,分析三者与临床病理特征、临床预后的关系。方法前瞻性选取2018年5月至2021年6月临沂市肿瘤医院收治的前列腺癌患者87例(前列腺癌组)、良性前列腺增生患者83例(良性前列腺增生组)、体检健康者85名(健康对照组)为研究对象。采用实时荧光定量PCR测定3组研究对象的血浆miR-135、miR-103、miR-34b水平;比较前列腺癌患者治疗前后血浆miR-135、miR-103、miR-34b水平,分析血浆miR-135、miR-103、miR-34b表达与临床病理特征及预后的关系。结果前列腺癌组血浆miR-135水平明显高于良性前列腺增生组及健康对照组,miR-103、miR-34b水平明显低于良性前列腺增生组及健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,前列腺癌患者血浆miR-135水平相比治疗前明显降低,miR-103、miR-34b水平相比治疗前明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌患者血浆miR-135、miR-103、miR-34b表达与病理分级Gleason评分、TNM分期有关(P<0.05)。随访12~48个月,平均(27.63±4.89)个月;发生骨转移13例(14.94%,死亡3例),复发10例(11.49%,死亡4例);miR-135在有骨转移患者中表达高于无骨转移患者,在复发患者中表达高于无复发患者;miR-103、miR-34b在有骨转移患者中表达低于无骨转移患者,在复发患者中表达低于无复发患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-34b、miR-103降低是前列腺癌患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-135降低是前列腺癌患者预后不良的保护性因素(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,3项联合预测前列腺癌预后的曲线下面积(AUC)为0.984,高于miR-135、miR-103、miR-34b单项检测(0.828、0.899、0.850)(Z=3.515、2.202、2.776,P=0.000、0.028、0.005)。结论前列腺癌患者血浆miR-135呈相对高表达,miR-103、miR-34b水平呈相对低表达;miR-135、miR-103、miR-34b与前列腺癌患者病理分级、TNM分期有关,可能参与肿瘤的病理生理过程;且3项联合检测对前列腺癌患者的预后具有较高预测价值。

急性脑梗死患者血清miR-34b表达及检测临床意义

目的:探讨急性脑梗死患者血清中miR-34b的表达特征,分析其与预后的关系。方法:收集急性脑梗死患者共87例为观察组,87例体检证实为健康的成人血清标本作为对照组,应用实时荧光定量PCR法检测血清中miR-34b的表达。结果:观察组中miR-34b的表达水平明显低于对照组[(1.06±0.25)与(1.32±0.34),P<0.01],CXCL12的表达水平明显高于对照组[(19.47±3.26)与(7.37±1.06),P<0.01]。血清中miR-34b表达下调对急性脑梗死诊断具有预测价值,CXCL12曲线下面积AUC为0.9880,95%置信区间(CI):0.9772~0.9988。血清中CXCL12表达上调对急性脑梗死诊断具有预测价值,CXCL12的预测价值要优于miR-34b。miR-34b在不同梗死灶最大径和有无高血压、高血脂患者的比较中差异有统计学意义(均P<0.05),而在不同性别、年龄、有无吸烟和饮酒史的比较中差异无统计学意义(均P>0.05)。相关回归分析显示miR-34b与格拉斯哥预后(GOS)评分具有正相关性(P<0.01),CXCL12与GOS评分具有负相关性(P<0.01)。miR-34b和CXCL12具有负相关性(P<0.01)。结论:急性脑梗死患者血清中miR-34b的表达下调,对病变形成和进展有一定促进作用,早期检测miR-34b对判断预后有一定价值。

miR-34b基因启动子区甲基化与甲状腺乳头状癌的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中微小RNA-34b(miR-34b)基因的表达及其启动子区的甲基化情况,并分析甲基化与其临床病理特征的关系。方法收集2008年9月至2010年10月期间南京医科大学附属淮安第一医院行手术切除的25例PTC患者的癌组织和癌旁组织。采用实时定量PCR法检测其miR-34b mRNA的表达,采用甲基化特异性(MSP)PCR法检测miR-34b基因启动子区的甲基化情况。结果 PTC癌组织中miR-34bmRNA的相对表达量为0.85±0.05,较癌旁组织的1.62±0.09低(P=0.030)。25例PTC癌组织中,有18例(72%)患者的miR-34b基因启动子区发生甲基化,癌旁组织组有10例(40%),癌组织的甲基化比例较高(P=0.021)。甲基化与PTC患者的年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期和包膜浸润均无关(P>0.05),而与淋巴结转移有关,发生淋巴结转移者的甲基化比例高于未发生淋巴结转移者(P<0.05)。结论 PTC癌组织中miR-34b基因启动子区的异常甲基化可能是该基因失活的原因之一,并且可能与PTC的发生、发展以及转移均有关,其机理值得进一步研究。

夏枯草对宫颈癌细胞增殖、侵袭及上皮间质转化的影响

目的研究夏枯草通过调控微小RNA-34b对宫颈癌细胞增殖、侵袭以及上皮间质转化(EMT)的影响。方法取宫颈癌HeLa细胞,将其随机分为对照组(等量生理盐水处理)和实验组(40μg·mL^(-1)夏枯草处理)。干预48 h后,用噻唑蓝(MTT)法检测各组宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制率;用Transwell实验检测各组宫颈癌HeLa细胞的侵袭能力;用蛋白质印迹(Western blot)法检测各组宫颈癌HeLa细胞EMT相关蛋白[E-钙黏附蛋白(E-cadherin),N-钙黏附蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)以及转录因子Twist]的表达水平;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测各组宫颈癌HeLa细胞中miR-34b的表达水平。结果对照组和实验组72 h细胞增殖抑制率为0和(37.74±3.57)%;细胞侵袭数目分别为(127.17±10.97)和(83.35±7.13)个;E-cadherin的表达水平分别为1.01±0.05,1.57±0.06;N-cadherin的表达水平分别为1.00±0.04,0.56±0.06;Vimentin的表达水平分别为0.99±0.04,0.46±0.04;Twist的表达水平分别为1.00±0.06,0.54±0.04;miR-34b的表达水平分别为0.54±0.03,0.75±0.09,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论夏枯草可显著抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭以及EMT,其作用机制可能与上调宫颈癌HeLa细胞内miR-34b的表达相关。