早期食管癌患者外周血微小RNA-15b和微小RNA-34c的表达水平及其临床意义

目的探讨早期食管癌患者外周血中微小RNA(miRNA)-15b和miRNA-34c表达水平及其临床意义。方法纳入113例早期食管癌患者(食管癌组)及113例健康者(对照组)。检测两组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平。分析miRAN-15b和miRAN-34c与早期食管癌发生及临床病理特征关系,并评估两者对早期食管癌诊断价值。结果食管癌组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平均低于对照组(均P<0.05)。低分化早期食管癌患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于高、中分化患者(均P<0.05),TNM分期Ⅱ期患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于TNM分期Ⅰ期患者(均P<0.05)。miRNA-15b相对表达水平≤0.78、miRNA-34c相对表达水平≤0.69是早期食管癌发生的危险因素(均P<0.05)。外周血血清miRNA-15b相对表达水平与miRNA-34c相对表达水平联合预测早期食管癌的曲线下面积为0.949(P<0.001),敏感度为93.00%,特异度为81.80%,均高于单一指标。结论早期食管癌患者血清中miRNA-15b与miRNA-34c均低表达,这可能与食管癌发生与发展有关。两者联合诊断早期食管癌价值较高。

2型糖尿病足溃疡患者外周血微小RNA-34c表达水平增高

目的探讨2型糖尿病患者外周血微小RNA-34c(miR-34c)表达与糖尿病足溃疡(DFU)以及糖尿病足骨髓炎(DFO)发病的相关关系。方法共入选60例新诊断2型糖尿病无足溃疡患者(T2DM组)、112名2型糖尿病合并足溃疡患者(DFU组)和60名糖耐量正常的对照人群(NC组)。根据有无合并骨髓炎,将112例DFU患者再分为2组:骨髓炎组(DFO组)64例,非骨髓炎组(NDFO组)48例。应用实时定量PCR(qRT-PCR)方法测定受试者外周血miR-34c水平,并对DFU以及DFO的临床特点以及危险因素进行分析。结果T2DM组外周血miR-34c表达水平较NC组显著增高[2.99(1.45~6.22)对1.01(0.89~1.52),P<0.05],DFU组外周血miR-34c表达水平较T2DM组显著增高[9.65(6.15~18.63)对2.99(1.45~6.22),P<0.01]。此外,与NDFO组相比较,DFO组外周血miR-34c表达水平也显著增高[13.46(8.89~19.11)对6.02(5.93~14.72),P<0.01]。DFU患者外周血miR-34c表达水平与足溃疡的截肢率呈正相关(P=0.030),与8周后足溃疡愈合率呈负相关(P=0.025)。多因素logistic回归分析显示高表达的miR-34c均为DFU以及DFO的独立危险因素(OR值分别为3.52,4.13;均P<0.01)。结论2型糖尿病足溃疡患者外周血miR-34c表达水平增高,可能与DFU以及DFO的发生发展以及预后相关。

妊娠期糖尿病合并妊娠期高血压疾病孕妇血清外泌体微小RNA-27微小RNA-34c表达与胰岛素抵抗的相关性

目的 探究妊娠期糖尿病(GDM)合并妊娠期高血压疾病(HDCP)孕妇血清外泌体微小RNA-27(miR-27)、微小RNA-34c(miR-34c)表达水平,并分析miR-27、miR-34c与GDM合并HDCP孕妇胰岛素抵抗的相关性。方法 选取2018年3月—2020年1月在台州市路桥区第二人民医院医疗服务共同体和温州医科大学附属第二医院产科收治的114例GDM患者为研究对象,根据GDM是否并发HDCP分为GDM合并HDCP组(47例)和未并发HDCP组(67例)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测所有研究对象血清外泌体miR-27、miR-34c表达水平。检测两组患者血清空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。Pearson法分析血清外泌体miR-27、miR-34c水平与FPG、FINS等指标的相关性。采用多元线性逐步回归模型分析影响GDM合并HDCP患者HOMA-IR的相关因素。结果 GDM合并HDCP组患者血清外泌体miR-27表达水平、miR-34c表达水平、血清FPG、FINS水平及HOMA-IR水平[(1.83±0.43)、(2.02±0.48)、(6.11±1.25)mmol/L、(13.67±1.49)mmol/L及(3.95±0.66)]均高于未并发HDCP组[(1.03±0.31)、(1.04±0.33)、(5.23±1.16)mmol/L、(12.30±1.32)mmol/L及(3.21±0.54)],差异均有统计学意义(t=10.914、12.926、3.861、5.171及6.567,均P<0.05)。Pearson分析结果显示,血清外泌体miR-27、miR-34c水平与FPG、FINS及HOMA-IR均呈正相关关系(均P<0.05)。多元线性逐步回归结果显示,血清外泌体miR-27、miR-34c变量与HOMA-IR相关(均P<0.05)。结论 GDM合并HDCP孕妇血清外泌体miR-27、miR-34c呈高表达,其高表达与胰岛素抵抗程度相关。

微小RNA-34c在子宫内膜癌中的功能研究

目的研究微小RNA-34 c在子宫内膜癌中的功能。方法以反转录聚合酶连锁反应法(RT-PCR)检测miR-34c在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达。将人子宫内膜癌细胞RL95-2分为实验组(miR-34c)及空白组(空白质粒),以噻唑蓝法(MTT)检测细胞活力,用平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,以流式细胞术检测细胞周期变化,用免疫印迹技术分析细胞中周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、CDK6蛋白表达及视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)磷酸化水平。结果 miR-34c在子宫内膜癌组织中的表达为0.45±0.05,在正常子宫内膜组织的表达为1.03±0.10,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);细胞周期阻滞在G1期,空白组比例为(57.75±5.45)%,实验组为(78.73±8.62)%明显增加(P<0.01),且细胞中CDK4及CDK6表达量明显降低(P<0.01),Rb磷酸化水平也明显降低(P<0.01)。结论 miR-34c在子宫内膜癌组织中低表达,当提高其表达后能显著抑制子宫内膜癌细胞RL95-2的增殖。

microRNA-34c调控c-Met抑制肝细胞癌的发生发展

目的探讨microRNA-34c及其靶基因c-Met在原发性肝癌发生发展中的作用。方法荧光定量PCR及Western blot分别检测人的肝癌组织及癌旁组织中microRNA-34c与c-Met蛋白的表达、细胞系Hep G2.2.15转染microRNA-34c后c-Met mRNA及蛋白的表达、细胞系Hep G2.2.15转染microRNA-34c或c-Met干扰RNA后P53蛋白的表达。建立裸鼠成瘤模型并进行瘤内注射治疗,测量计算肿瘤体积。结果 microRNA-34c在人的肝癌组织中表达比癌旁组织明显降低(P<0.01),c-Met在肝癌组织中表达较癌旁组织升高。Hep G2.2.15细胞系中转染microRNA-34c后c-Met表达降低(P<0.01)。Hep G2.2.15细胞系中转染microRNA-34c及c-Met干扰RNA后P53表达升高(P<0.05)。成瘤裸鼠经microRNA-34c质粒瘤内注射后肿瘤体积较对照组明显减小(P<0.05)。结论 microRNA-34c可能通过调节其靶基因c-Met的表达抑制原发性肝癌的发生和发展。

前列腺癌组织中miRNA-34c、E2F3的表达变化及意义

目的探讨前列腺癌组织中微小RNA-34c(miR-34c)与E2F转录因子3(E2F3)的表达变化及其临床意义。方法用RT-PCR法检测56例前列腺癌组织及40例良性前列腺增生组织中miR-34c、E2F3 mRNA表达,分析miR-34c、E2F3 mRNA表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系,分析miR-34c与E2F3 mRNA表达的相关性。结果前列腺癌组织中miR-34c的相对表达量低于前列腺增生组织(t=2. 495,P=0. 011),E2F3相对表达量高于前列腺增生组织(t=-3. 780,P=0. 000)。miR-34c、E2F3 mRNA表达与Gleason评分、TNM分期有关(P均<0. 05),而与年龄、初始前列腺特异抗原水平及有无转移灶无关(P均> 0. 05)。前列腺癌组织中miR-34c与E2F3 mRNA表达呈负相关(r=-0. 694,P=0. 000)。结论前列腺癌组织中miR-34c呈低表达、E2F3呈高表达;二者可能协同参与前列腺癌的发生发展。

前列腺癌组织中miRNA-34c、c-Met mRNA的表达观察

目的 观察前列腺癌组织中微小RNA-34c(miR-34c)、肝细胞生长因子受体(c-Met)mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法 63例前列腺癌患者,均行肿瘤切除术,术中保留癌组织;45例前列腺增生患者,留取前列腺增生组织。采用实时荧光定量PCR法检测前列腺癌组织、前列腺增生组织中miR-34c、c-MetmRNA,分析前列腺癌组织miR-34c、c-Met mRNA表达的相关性,分析miR-34c、c-Met mRNA表达与前列腺癌临床病理参数及预后的关系。结果 前列腺癌组织、前列腺增生组织中miR-34c相对表达量分别为0.521±0.426、1.247±0.681,c-Met mRNA的相对表达量分别为2.527±0.348、1.056±0.217,两者比较,P均<0.05。前列腺癌组织中miR-34c、c-Met mRNA表达呈负相关(r=-0.630,P<0.05)。miR-34c表达与前列腺癌患者Gleason评分和TNM分期有关(P均<0.05),c-MetmRNA表达与前列腺癌患者Gleason评分、TNM分期及有无远处转移有关(P均<0.05)。前列腺癌患者中miR-34c高表达者3、5年总体生存率(OS)分别为84.85%(28/33)、60.61%(22/33),miR-34c低表达者分别为70.00%(21/30)、40.00%(13/30),两者比较,P均<0.05;前列腺癌患者中c-Met mRNA高表达者3、5年OS分别为68.51%(24/35)、37.14%(13/35),c-MetmRNA低表达者分别为89.29%(25/28)、78.57%(22/28),两者比较,P均<0.05。结论 前列腺癌组织miR-34c低表达、c-MetmRNA高表达,两者可能参与前列腺癌的发生发展。

MicroRNA-34b/c rs4938723 T>C多态性与中国汉族人群肾细胞癌易感性的相关性

目的：研究中国汉族人群microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）多态性与肾细胞癌易感性之间的关系。方法采用病例对照研究模式，通过TaqMan探针PCR法检测年龄和性别匹配的710例中国汉族人群肾细胞癌患者和760例正常人群的microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）基因型，探讨该位点基因多态性与肾细胞癌易感性之间的关系。结果与 TT／TC基因型携带者相比，CC型（OR＝1．53，95％ CI＝1．06～2．21，CC基因型比TT基因型；OR＝1．48，95％ CI＝1．05～2．10，CC基因型比T T／TC基因型）携带者发生肾细胞癌的危险性明显升高。分层分析显示携带CC基因型的老年患者（OR＝1．80，95％CI＝1．08～3．01）、男性患者（OR＝1．64，95％ CI＝1．08～2．51）、吸烟患者（OR＝2．07，95％ CI＝1．16～3．69）及饮酒患者（OR＝1．94，95％ CI＝1．01～3．73）发生肾细胞癌的危险性明显升高。结论 microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）基因多态性与我国汉族人群肾细胞癌易感性有关，CC型携带者发生肾细胞癌的危险性要明显高于T T／TC型携带者。

LncRNA MALAT1通过miR-34c/SATB2轴对脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的:探讨长非编码RNA肺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)通过微小RNA(miR)-34c/特异AT序列结合蛋白2(SATB2)轴对脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)成骨分化的影响,并阐明其作用机制。方法:人ADSCs转染Lenti-NC、Lenti-MALAT1、sh-NC、sh-MALAT1、miR-NC和miR-34c,RT-PCR法检测ADSCs中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表达水平;miRcode和TargetScan 7.1网站预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-34c与LncRNA MALAT1、miR-34c与SATB2之间的靶向结合作用;Western blotting法检测ADSCs中成骨标志物Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙蛋白(OCN)表达水平;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S(ARS)染色检测ADSCs中ALP和ARS水平及钙盐沉积。结果:与第0天比较,ADSCs成骨诱导第3、7、14和21天后,细胞中LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显升高(P<0.05),miR-34c表达水平明显降低(P<0.05)。与Lenti-NC组和sh-NC组比较,Lenti-MALAT1组ADSCs中LncRNA MALAT1表达水平,Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平,ALP和ARS水平明显升高(P<0.01),sh-MALAT1组上述指标明显降低(P<0.01)。与miR-NC+Lenti-NC组比较,miR-34c+Lenti-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显降低(P<0.01),ALP和ARS水平明显降低(P<0.01),miR-34c+Lenti-MALAT1组ADSCs中上述各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Lenti-NC+miR-NC组比较,Lenti-SATB2+miR-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平及ALP和ARS水平明显升高(P<0.01),Lenti-SATB2+miR-34c组上述各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA MALAT1通过miRNA-34c/SATB2轴促进ADSCs的成骨分化。

痴呆患者血清miR-9、miR-34c表达变化及意义

目的观察痴呆患者血清微小RNA-9(miR-9)、miR-34c表达变化,并探讨其临床意义。方法选择痴呆患者135例,根据临床痴呆分级量表评分分为轻度痴呆组59例、中度痴呆组45例、重度痴呆组31例,同期选择健康体检非痴呆患者60例作为对照组。采集痴呆患者入院次日及对照组体检时清晨空腹肘静脉血并分离血清,用罗氏P800全自动生化分析仪检测血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),用双抗体夹心法检测血清脂联素(ADP),用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸(Hcy),用简易精神状态检查量表(MMSE)评分评价认知功能,用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测血清miR-9、miR-34表达。用Pearson积矩相关法分析各指标的相关性,用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-9、miR-34c对痴呆的诊断价值。结果各组HDL-C、LDL-C、ADP、Hcy、MMSE评分比较差异有统计学意义(P均<0.05)。与对照组比较,轻、中、重度痴呆组血清miR-9表达低(P均<0.05),血清miR-34c表达高(P均<0.05);痴呆病情越重,血清miR-9表达越低,血清miR-34c表达越高。痴呆患者血清miR-9与HDL-C、ADP、MMSE评分呈正相关(P均<0.05),与LDL-C、Hcy呈负相关(P均<0.05);血清miR-34c与HDL-C、ADP、MMSE评分呈负相关(P均<0.05),与LDL-C、Hcy呈正相关(P均<0.05)。血清miR-9、miR-34c诊断痴呆的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.811、0.838,截断值分别为0.82、1.01;二者联合检测诊断痴呆的AUC为0.923。结论痴呆患者血清miR-9低表达、miR-34c高表达,二者表达变化可反映患者病情严重程度,二者联合检测可辅助诊断痴呆。