沉默微小RNA-378靶向调节骨形态发生蛋白2/母亲DPP同源物4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响实验研究

目的:探究沉默微小RNA-378(miR-378)靶向调节骨形态发生蛋白(BMP)2/母亲DPP同源物(Smad)4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响。方法:对38只大鼠建立胫骨骨折模型,另取18只正常大鼠作为假手术组。选取胫骨骨折模型造模成功大鼠中的8只作为造模组,假手术组中的8只作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测造模组胫骨骨折部位骨组织及对照组相同部位正常骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。将30只胫骨骨折模型大鼠随机分为模型组、空载质粒组和miR-378沉默组,每组10只。空载质粒组、miR-378沉默组分别经尾静脉注射1μg空载质粒或miR-378小干扰RNA(siRNA)质粒;模型组和剩余10只假手术组大鼠经尾静脉注射0.9%氯化钠溶液1μg;每2天注射1次,连续干预30 d。利用X线观察各组大鼠胫骨骨折愈合情况并进行骨折愈合评分(Lane-Sandhu评分)。采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子和骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(ALP)水平。采用HE染色观察各组骨组织形态学变化。采用RT-qPCR检测各组骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。采用蛋白印迹检测各组骨组织BMP2、Smad4蛋白表达。结果:造模组骨组织miR-378表达水平高于对照组,BMP2、Smad4 mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。假手术组大鼠骨组织结构清晰;模型组和空载质粒组骨折线清晰,无骨痂出现,骨组织结构严重破坏,仅有少量成骨细胞生成;miR-378沉默组骨折线模糊,出现骨痂,骨组织破坏程度得到缓解并有大量成骨细胞生成。与假手术组比较,模型组血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、OC、ALP及骨组织miR-378表达水平升高,BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与模型组和空载质粒组比较,miR-378沉默组Lane-Sandhu评分、OC、ALP水平,以及BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平升高,血清TNF-α、IL-1β及骨组织miR-378表达水平降低(均P<0.05)。结论:沉默miR-378可能通过靶向激活BMP2/Smad4信号通路减轻胫骨骨折大鼠炎症反应,促进成骨细胞生成,加快大鼠骨折部位的愈合。

乳腺癌组织中微小RNA-378的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-378(miR-378)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集2012年1月至2014年12月女性乳腺癌患者手术切除的105对癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测上述组织中miR-378的表达并比较miR-378在癌组织和癌旁组织中的分布差异,进一步分析miR-378表达与乳腺癌临床病理特征的关系,根据随访资料分析不同miR-378水平患者的预后情况。结果 miR-378在乳腺癌组织中的表达水平为2. 745±0. 347,高于癌旁组织的1. 085±0. 126(P<0. 01)。miR-378水平与年龄、淋巴结转移、绝经、组织学分级、ER和PR表达均无关,而与肿瘤大小、TNM分期、HER-2表达、Ki-67表达和Nottingham预后指数有关(P<0. 05)。单因素分析发现,乳腺癌患者的总生存期(OS)与年龄、肿瘤大小、绝经、ER和PR表达均无关,而与淋巴结转移、TNM分期、组织学分级、HER-2表达、Ki-67表达、Nottingham预后指数和miR-378水平有关(P<0. 05); miR-378低表达者的中位OS为>60. 0个月,高于高表达者的41. 0个月,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 miR-378在乳腺癌中高表达且与肿瘤的发生、发展和预后有一定关系,在乳腺癌筛查及预后预测上有一定的潜在价值。

微小RNA-378调控小鼠急性肝衰竭作用机制的研究

目的探究微小RNA-378(miR-378)调控小鼠急性肝衰竭的作用机制。方法将36只雄性巴比塞小鼠以随机数字表法均分为实验组和对照组。实验组腹腔注射D氨基半乳糖(D-GalN)800 mg/kg联合脂多糖10μg/kg诱导急性肝衰竭,对照组为腹腔内注射等量的生理盐水。两组在诱导后0、1、3、5、7、9 h处死小鼠取静脉血和肝组织,每个时间点有3只实验鼠。检测两组在各时间点血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝组织中的胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、TNF-α及IL-6 mRNA表达量,探针法确定肝组织中miR-378表达量,蛋白质印迹法(Westernblotting)检测Caspase-3蛋白表达量。结果实验组ALT/AST水平逐渐升高且在诱导后7 h达到峰值,对照组ALT/AST未见明显变化。相较对照组,实验组在诱导后1 h和7 h TNF-α/IL-6血清浓度及mRNA水平明显升高;实验组在诱导后5 h[(0.0038±0.0003)比(0.0054±0.0003),P<0.05]和7 h[(0.0014±0.0005)比(0.0054±0.0003),P<0.05]miR-378表达量明显降低,Caspase-3 mRNA[5 h(0.0052±0.0003),7 h(0.0070±0.0006)比(0.0033±0.0001),均P<0.05]和蛋白[5 h(0.867±0.012),7 h(1.062±0.039)比(0.577±0.035),均P<0.05]表达量升高。结论在小鼠D-GalN联合脂多糖诱导的急性肝衰竭模型中,miR-378表达量的下调促进了Caspase-3的活化,增强了肝细胞凋亡活动,进而调控急性肝衰竭的发展。miR-378可作为治疗急性肝衰竭新靶点。

微小RNA-378a对皮肤鳞癌细胞侵袭、迁移和CD226表达的影响

目的探讨微小RNA-378a(miR-378a)对皮肤鳞癌(CSCC)细胞侵袭、迁移和CD226表达的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测CSCC细胞A431和人角质形成细胞HaCaT的miR-378a水平;将体外常规培养的A431细胞进行转染,根据转染物不同分为增强转染组(转染miR-378a mimics)、抑制转染组(转染miR-378a inhibitor)和空白转染组(无转染)。采用QPCR、活细胞计数(CCK)-8、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术、Transwell细胞迁移和侵袭实验以及Western blotting检测miR-378a水平、增殖活力、凋亡率、穿膜细胞数和CD226水平;构建荧光素酶报告质粒psiCHECK-2,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-378a与CD226基因的靶向关系。结果与HaCaT细胞(1.089±0.197)相比,A431细胞的miR-378a水平升高至4.435±0.807(P<0.05)。与空白转染组的1.031±0.173相比,增强转染组的miR-378a水平升高至11.846±2.179,而抑制转染组则降低至0.162±0.040;与空白转染组相比,增强转染组转染48、72 h后的增殖活力升高,而抑制转染组则降低;与空白转染组的(7.464±1.281)%相比,增强转染组的凋亡率降低至(3.799±1.279)%,而抑制转染组则升高至(15.435±2.112)%;细胞侵袭实验中,与空白转染组的(62.704±5.639)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(89.401±6.358)个,而抑制转染组则降低至(17.346±2.954)个;细胞迁移实验中,与空白转染组的(84.227±5.478)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(102.139±7.930)个,而抑制转染组则降低至(54.448±13.068)个;与空白转染组的0.428±0.033相比,增强转染组的CD226水平降低至0.173±0.056,而抑制转染组则升高至0.695±0.020。以上组间差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-378a mimics和携带CD226野生型3’端非翻译区(3’UTR)质粒共转染时,荧光素酶活性显著下降(P<0.05);而当miR-378a mimics与携带CD226突变型3’UTR质粒共转染时,荧光素酶活性无显著变化(P>0.05)。结论CSCC细胞中miR-378a高表达并发挥促癌作用,下调该miRNA水平可抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力并诱导凋亡,可能通过靶向CD226来发挥促癌作用,在CSCC靶向治疗中有一定的应用前景。

微小RNA-378转染对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其机制

目的观察微小RNA-378(miRNA-378)转染对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其可能机制。方法 miRNA-378过表达质粒转染的SKOV3细胞作为实验组,空白载体质粒转染的SKOV3细胞作为阴性对照组,SKOV3细胞作为空白对照组。采用Real-time PCR检测各组细胞中miRNA-378、环指蛋白31(RNF31)mRNA,Western blotting检测各组细胞中RNF31蛋白,CCK-8实验检测各组细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。结果实验组SKOV3细胞miRNA-378相对表达量高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞RNF31 mRNA和蛋白相对表达量分别低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞的增殖能力明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞的克隆形成能力低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论 miRNA-378转染可抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖,miRNA-378可能通过抑制RNF31基因表达而发挥抑制卵巢癌细胞增殖的作用。

宫颈癌组织血管内皮生长因子受体-2、微小RNA-378表达及其预后评估价值

目的探讨宫颈癌组织血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、微小RNA-378(miR-378)表达及其预后评估价值。方法回顾性选择绍兴市中心医院2019年9月至2021年9月诊治的105例宫颈癌患者,分别取宫颈癌组织与癌旁正常组织(距肿瘤组织至少2 cm),采用免疫组织化学法检测组织中VEGFR-2表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测组织中miR-378表达。比较宫颈癌组织与癌旁正常组织VEGFR-2、miR-378表达水平,并分析VEGFR-2、miR-378表达与宫颈癌患者病理参数和预后的关系。以Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用单因素及多因素Cox回归分析影响宫颈癌患者预后的危险因素。结果宫颈癌组织VEGFR-2阳性表达率高于癌旁正常组织[86.67%(91/105)比62.86%(66/105)],miR-378表达水平高于癌旁正常组织(1.46±0.35比0.68±0.12),差异均有统计学意义(χ^(2)=15.77,t=21.60,P<0.05)。不同年龄、病理类型和肿瘤大小患者宫颈癌组织VEGFR-2、miR-378表达比较差异无统计学意义(P>0.05);随着临床分期增加、分化程度降低以及淋巴结转移的发生,VEGFR-2阳性表达率升高和miR-378表达水平升高(P<0.05)。以Kaplan-Meier法绘制生存曲线,结果显示miR-378高表达组总生存时间(OS)低于miR-378低表达组,VEGFR-2阳性表达组OS低于VEGFR-2阴性表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素及多因素Cox回归分析结果均表明临床分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移、VEGFR-2阳性表达和miR-378高表达是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论VEGFR-2在宫颈癌组织中存在阳性表达,miR-378在宫颈癌组织中存在高表达,与临床分期、分化程度、淋巴结转移相关,同时VEGFR-2阳性表达、miR-378高表达会影响宫颈癌患者生存情况,是导致宫颈癌预后不良的危险因素。

血清微小RNA-29c-3p和微小RNA-378a-3p表达与脓毒症心肌损伤患者血清炎性因子、心肌损伤指标和超声心动图指标的相关性及对预后的评估价值

目的探讨血清微小RNA(miR)-29c-3p和miR-378a-3p表达与脓毒症心肌损伤患者血清炎性因子、心肌损伤指标和超声心动图指标的相关性,分析其对预后的评估价值。方法采用前瞻性的研究方法。选择2019年2月至2021年10月邯郸市中心医院脓毒症患者286例,采用聚合酶链反应检测血清miR-29c-3p和miR-378a-3p水平,并检测血清肌钙蛋白I(TnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、B型脑钠肽(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和降钙素原(PCT)水平;采用超声检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、心输出量(CO)和二尖瓣口舒张早期最大流速与心房收缩期最大流速比值(E/A)。将血清TnI≥0.15 μg/L定义为心肌损伤,记录心肌损伤患者住院28 d内生存情况,并评估急性生理学和慢性健康状况Ⅱ评分(APACHE Ⅱ)和序贯器官衰竭评分(SOFA)。采用Pearson法进行相关性分析;采用多因素Logistic回归分析影响脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-29c-3p和miR-378a-3p预测脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的效能。结果 286例脓毒症患者中,发生心肌损伤131例(心肌损伤组),未发生心肌损伤155例(无心肌损伤组)。心肌损伤组miR-29c-3p、Mb、CK-MB、BNP、TnI、TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、LVEDD和LVESD明显高于无心肌损伤组[5.02 ± 1.69比2.01 ± 0.57、(102.35 ± 23.56) μg/L比(32.15 ± 9.12) μg/L、(25.01 ± 6.09) U/L比(13.02 ± 4.16) U/L、(905.23 ± 135.49) ng/L比(92.31 ± 26.35)ng/L、(0.23 ± 0.05)μg/L比(0.12 ± 0.02)μg/L、(13.41 ± 3.71)μg/L比(3.26 ± 0.95)μg/L、(9.02 ± 2.46)ng/L比(4.18 ± 1.03)ng/L、(71.45 ± 15.29)ng/L比(30.02 ± 6.39)ng/L、(1.05 ± 0.21)μg/L比(0.72 ± 0.13)μg/L、(21.35 ± 6.13)mg/L比(16.23 ± 4.57)mg/L、(37.45 ± 3.39)mm比(34.01 ± 2.15)mm和(50.12 ± 3.49)mm比(44.17 ± 3.02)mm],miR-378a-3p、LVEF、SV、CO和E/A明显低于无心肌损伤组[1.67 ± 0.36比3.02 ± 0.79、(46.32 ± 3.26)%比(56.24 ± 4.98)%、(48.21 ± 2.81)ml比(56.02 ± 3.49)ml、(3.11 ± 0.29)L/min比(4.15 ± 0.31)L/min和0.98 ± 0.21比1.19 ± 0.32],差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关分析结果显示,脓毒症心肌损伤患者miR-29c-3p与TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、Mb、CK-MB、BNP、TnI、LVEDD、LVESD呈正相关(P<0.01或<0.05),与LVEF、SV、CO和E/A呈负相关(P<0.01);miR-378a-3p与TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、Mb、CK-MB、BNP、TnI、LVEDD和LVESD呈负相关(P<0.01或<0.05),与LVEF、SV、CO和E/A呈正相关(P<0.01)。131例脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡55例(死亡亚组),存活76例(存活亚组)。死亡亚组机械通气率、连续性肾脏替代治疗率、APACHE Ⅱ、SOFA、miR-29c-3p、Mb、CK-MB、TnI、BNP、TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、LVEDD和LVESD明显高于存活亚组,miR-378a-3p、LVEF、SV、CO和E/A明显低于存活亚组,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,APACHE Ⅱ、TnI、miR-29c-3p是影响脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的独立危险因素(OR = 1.203、2.451和1.394,95%CI 1.085~1.334、1.498~4.008和1.141~1.702,P<0.01),miR-378a-3p是影响脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的独立保护因素(OR = 0.367,95%CI 0.217~0.622,P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,miR-29c-3p和miR-378a-3p预测脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的最佳截断值分别为5.00和1.65,miR-29c-3p联合miR-378a-3p预测脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的曲线下面积明显大于两项指标单独应用(0.890比0.695和0.732),灵敏度为87.0%,特异度为87.3%,准确度为86.8%。结论脓毒症心肌损伤患者血清miR-29c-3p表达水平升高、miR-378a-3p表达水平降低,miR-29c-3p和miR-378a-3p表达与心肌损伤程度、超声心动图指标、炎性因子水平以及预后均有关,miR-29c-3p和miR-378a-3p可作为评估脓毒症心肌损伤患者预后的潜在指标。

miR-378a-5p靶向沉默FAIM促进银屑病皮下脂肪细胞促炎因子释放的研究

目的探究miR-378a-5p在银屑病皮下脂肪组织中的表达及其对银屑病影响机制。方法将SPF级4~6周龄雌性C57BL/6小鼠构建银屑病小鼠模型,其中Model组为银屑病小鼠,Control组为C57BL/6小鼠用凡士林乳膏。苏木精-伊红法(HE)染色法观察皮肤组织病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测皮下脂肪组织中miR-378a-5p、Fas细胞凋亡抑制分子(FAIM)的mRNA水平,蛋白质免疫印迹(WB)检测皮下脂肪组织中FAIM的蛋白水平。分离脂肪细胞进行后续实验。经双荧光素酶、qPCR和WB验证miR-378a-5p靶向FAIM。构建miR-378a-5p过表达和干扰质粒、及FAIM干扰质粒,脂肪细胞转染后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养基中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)和白介素6(IL-6)水平。结果模型组小鼠皮肤组织呈现明显银屑病病理形态。在银屑病小鼠模型脂肪组织中,miR-378a-5p的mRNA水平上调,FAIM的mRNA及蛋白水平均下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验、qPCR和WB检测结果表明,FAIM是miR-378a-5p的下游靶点。与NC mimics组相比,miR-378a-5p mimics组脂肪细胞释放的炎症因子TNF、IL-1和IL-6水平显著上调(P<0.05);与NC inhibitors组,miR-378a-5p inhibi⁃tors脂肪细胞释放的炎症因子TNF-α、IL-1和IL-6水平下调(P<0.05)。与Control组相比,FAIM inhibitors组脂肪细胞释放的炎症因子TNF-α、IL-1和IL-6水平上调;而miR-378a-5p inhibitors+FAIM inhibitors可逆转这种现象(P<0.05)。结论miR-378a-5p靶向沉默FAIM促进银屑病皮下脂肪细胞促炎因子TNF-α、IL-1和IL-6的释放。

低剂量CT灌注成像参数及血清miR-144-3p、miR-378水平联合检测对早期肺癌的诊断价值

目的探讨低剂量CT灌注成像参数及血清微小RNA-144-3p(miR-144-3p)、微小RNA-378(miR-378)水平联合检测对早期肺癌的诊断价值。方法回顾性选取2021年8月至2023年8月河南大学第一附属医院收治的早期肺癌患者80例,纳入观察组,另选取同期良性肺病患者80例,纳入对照组。比较两组低剂量CT灌注成像参数[血容积(BV)、血流量(BF)、平均通过时间(MTT)、通透性(PMB)]及血清miR-144-3p、miR-378水平,分析其联合诊断价值及不同水平发生早期肺癌的危险度。结果观察组BV、BF、MTT、PMB值及血清miR-378水平高于对照组,血清miR-144-3p水平低于对照组(P<0.05);BV、BF、MTT、PMB、miR-144-3p、miR-378联合诊断早期肺癌的AUC为0.896,最佳诊断敏感度为90.00%,最佳特异度为87.50%,约登指数为0.775,且高水平患者发生早期肺癌的危险度是低水平的2.333倍、2.810倍、2.478倍、1.857倍、0.509倍、1.759倍(P<0.05)。结论低剂量CT灌注成像参数及血清miR-144-3p、miR-378与早期肺癌发生密切相关,联合检测具有一定诊断效能,且不同水平发生早期肺癌的危险度存在差异,可作为临床诊断早期肺癌的有效方式。

特发性癫痫患儿血清miR-378、miR-575表达情况及其与疾病转归的关系

目的分析特发性癫痫患儿的血清miR-378、miR-575表达情况,并探讨二者与疾病转归的关系。方法将124例特发性癫痫患儿作为癫痫组,150例健康儿童作为健康组。连续随访1年,根据治疗后癫痫发作的控制情况将癫痫患儿分为完全控制组(n=79)和非完全控制组(n=45)。检测所有儿童的血清miR-378、miR-575表达量,评估血清miR-378、miR-575表达量对特发性癫痫患儿发作控制效果的预测效能,并分析特发性癫痫患儿发作控制效果的影响因素。结果癫痫组血清miR-378、miR-575表达量低于健康组(P<0.05),非完全控制组血清miR-378、miR-575表达量低于完全控制组(P<0.05)。血清miR-378、miR-575表达量预测特发性癫痫患儿发作控制效果的曲线下面积(AUC)分别为0.747、0.852,二者联合预测的AUC(0.906)大于单一指标的AUC(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,癫痫发作类型为全身性发作、治疗前癫痫发作频率≥3次/个月、治疗前神经系统发育异常、血清miR-378表达量≤0.73、血清miR-575表达量≤1.83是特发性癫痫患儿发作控制不佳的危险因素(P<0.05)。结论血清miR-378、miR-575在特发性癫痫患儿血清中呈低表达,且与癫痫发作控制效果有关,二者有望作为预测特发性癫痫患儿发作控制效果的血清学生物标志物。

miR-378通过抑制小鼠肝炎症反应改善非酒精性脂肪性肝炎的损伤

目的 :探讨miR-378对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生及发展的作用及其机制。方法 :将C57BL/6小鼠随机分为对照(正常饮食)组、NASH模型(高脂饮食)组、miR-378抑制剂(高脂饮食+antagomir-378)组、阴性抑制剂(高脂饮食+antagomir阴性对照)组。观察小鼠肝系数和组织病理改变;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证NASH小鼠及各处理组肝组织的miR-378表达。应用自动化学分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;qRT-PCR检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子β(TGF-β)和胶原蛋白1α2(Col1α2)的mRNA表达;免疫荧光检测TGF-β和Col1α2蛋白表达。结果 :与对照组比较,NASH模型组和阴性抑制剂组的肝系数显著升高;与NASH模型组比较,miR-378抑制剂组肝系数显著下降。NASH模型组肝小叶结构不清,出现明显的肝细胞坏死、脂肪及炎症细胞浸润;miR-378抑制剂组肝小叶结构正常,肝细胞排列整齐,脂肪浸润减轻。NASH模型组和阴性抑制剂组miR-378表达较对照组显著升高;NASH模型组和阴性抑制剂组血清ALT和AST含量较对照组显著升高,而miR-378抑制剂组较NASH模型组含量显著下降;NASH模型组和阴性抑制剂组TNF-α、IL-6表达量较对照组明显升高,而IL-4明显下降,MCP-1差异无统计学意义;而miR-378抑制剂组TNF-α、IL-6表达量较NASH模型组明显下降,IL-4明显上升;NASH模型组和阴性抑制剂组TGF-β和Col1α2表达量较对照组明显升高;而与NASH模型组比较,miR-378抑制剂组TGF-β和Col1α2表达量明显下降。结论 :miR-378可能是NASH的危险因素,抑制miR-378的表达有利于缩短NASH病程,为NASH治疗提供了新的潜在治疗靶点。

血浆miR-378、HSF1与慢性心力衰竭病人左心室重构的相关性分析

目的分析血浆微小RNA-378(miR-378)、热休克转录因子1(HSF1)与慢性心力衰竭(CHF)病人左心室重构的相关性。方法选取2017年5月—2019年5月于唐山市开滦总医院心内科住院治疗的CHF病人137例作为CHF组,依据美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准对CHF病人进行分级,其中Ⅰ级或Ⅱ级45例,Ⅲ级50例,Ⅳ级42例;另选取同期因急性心肌梗死于本院住院治疗的60例病人作为对照组。所有病人均接受超声心动图检测;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测受试者血浆miRNA-378水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血浆HSF1水平;Pearson法分析血浆miR-378、HSF1水平与左心室重构指标左心室重量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积(LVEDV)相关性;多元线性逐步回归模型分析影响CHF病人LVMI水平的相关因素。结果与对照组比较,CHF组心功能Ⅰ级或Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级组病人血浆LVMI、LVEDV水平依次升高(P<0.05),miR-378、HSF1、LVEF水平依次降低(P<0.05)。Pearson法分析显示,CHF组病人血浆miR-378、HSF1与LVMI、LVEDV均呈负相关(P<0.005),与LVEF呈正相关(P<0.05)。多元线性逐步回归分析显示,血浆miR-378、HSF1是LVMI的影响因素(P<0.05)。结论血浆miR-378、HSF1水平降低可能与CHF病人左心室重构的发生发展有关,可为临床诊断CHF病人发生左心室重构及评估病情严重程度提供依据。

miR-378初始体rs1076064多态性与中国汉族人群乳腺癌的关联研究

目的探讨miR-378初始体rs1076064多态性与中国汉族女性乳腺癌发病的关联。方法运用二代测序技术分析miR-378初始体rs1076064多态性在乳腺癌(n=133)和健康对照人群(n=216)中的分布频率;运用SPSS25.0统计软件包处理数据。结果在共显性、显性和隐性遗传模型中,rs1076064多态性与乳腺癌发病无相关性(TC与TT相比,OR=1.15,95%CI:0.67-1.95;CC与TT相比,OR=1.35,95%CI:0.73-2.52;TC/CC与TT相比,OR=1.21,95%CI:0.73-2.00;CC与TT/TC相比,OR=1.24,95%CI:0.74-2.05)。亦未发现rs1076064多态性与乳腺癌肿瘤大小和淋巴结转移等临床特征之间存在相关性。结论miR-378初始体rs1076064可能不是中国汉族人群乳腺癌发病的易感位点。

miR-18a、miR-223、miR-378在宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的研究微小RNA-18a(miR-18a)、微小RNA-223(miR-223)、微小RNA-378(miR-378)在宫颈癌组织中的表达及相关性。方法选取2020年1月至2021年1月在德州市妇幼保健院病理科保存的50例女性宫颈癌组织标本、50例癌旁组织标本和50例卵巢囊肿组织标本作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定miR-18a、miR-223、miR-378相对表达量。结果宫颈癌组织miR-18a、miR-223、miR-378表达高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。癌旁组织miR-18a、miR-223、miR-378表达低于卵巢囊肿组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。临床分期程度越重,分化程度越低,其miR-18a、miR-223、miR-378表达越高(P<0.05);有淋巴结转移患者miR-18a、miR-223、miR-378表达高于无淋巴结转移(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析miR-18a、miR-223、miR-378及三项联合诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)分别为0.621、0.761、0.786、0.846。结论 miR-18a、miR-223、miR-378在宫颈癌组织中高表达,高表达miR-18a、miR-223、miR-378对于诊断宫颈癌具有一定临床意义。

压力超负荷致小鼠心肌肥厚中miR-378对热休克转录因子-1的调节作用

目的:探讨miR-378在压力超负荷致小鼠心肌肥厚中对热休克转录因子1(HSF1)的调节作用及机制。方法:采用C57B/L6雄性小鼠经主动脉缩窄构建心肌的压力超负荷(TAC)模型,2周后对小鼠进行心脏超声和血流动力学测定,并观察miR-378和HSF1的表达变化。体外培养心肌细胞,机械牵张刺激24 h后观察miR-378和HSF1的表达变化;对心肌细胞分别转染miR-378模拟物和抑制物,48 h后观察心肌细胞内源性HSF1的表达变化;通过荧光素酶基因报告系统,检测miR-378是否靶向结合其预测靶点HSF1的3′UTR区域。结果:建模TAC小鼠2周后,心脏表现为代偿性心肌肥厚,HSF1表达升高而miR-378表达下降。心肌细胞机械牵张后HSF1表达升高而miR-378表达下降;心肌细胞过表达miR-378后,HSF1表达显著下降,而当抑制内源miR-378时,HSF1表达显著升高;荧光素酶报告系统证实miR-378能够靶向结合HSF1的3′UTR序列。结论:在心肌肥厚代偿期,miR-378可能通过靶向结合HSF1的3′UTR序列调节心肌内源性HSF1的表达。

慢性牙周炎患者龈沟液中miR-498和miR-378h表达与Th17/Treg细胞平衡的关系

目的:探讨慢性牙周炎患者龈沟液中微小RNA-498(miR-498)、微小RNA-378h(miR-378h)表达与辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)细胞平衡的关系。方法:纳入我院2022年1月~2023年2月期间收治的97例慢性牙周炎患者作为研究对象,根据病情严重程度分为轻度组(31例)、中度组(42例)和重度组(24例),另选取同期在本院体检的97例牙周健康者作为对照组。测定分析慢性牙周炎患者龈沟液中miR-498和miR-378h表达水平与Th17/Treg的相关性,探讨影响慢性牙周炎发生的危险因素并评估miR-498、miR-378h对慢性牙周炎的诊断价值。结果:研究组和对照组吸烟史、牙周指标、Th17、Treg、Th17/Treg比较,均存在显著差异(P<0.05);研究组龈沟液miR-498、miR-378h表达水平均高于对照组,且二者表达水平随慢性牙周炎严重程度的增加均呈现升高的趋势(P<0.05);龈沟液miR-498、miR-378h表达水平与血清Th17/Treg水平均呈正相关(r=0.669、0.803,P均<0.05)。有吸烟史、Th17/Treg、miR-498及miR-378h表达为发生慢性牙周炎的影响因素(P<0.05)。龈沟液miR-498、miR-378h以及血清Th17/Treg单独诊断慢性牙周炎的AUC分别为0.826、0.833、0.854,miR-498、miR-378h二者联合诊断的AUC为0.932,高于miR-498、miR-378h以及Th17/Treg单独诊断(P<0.05)。结论:龈沟液miR-498、miR-378h表达水平与血清Th17/Treg水平均呈正相关,且均与牙周炎的发生发展有关。

长链非编码RNA NORA影响脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡损伤的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组:对照组、LPS组(10μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR阴性对照)、LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组(10μg/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外,其余组细胞LPS刺激24 h。用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以流式细胞术检测细胞凋亡率;以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系。结果:与对照组比较,LPS组心肌细胞中NORAD的表达量、TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率升高,miR-378a-3p的表达量降低(P均<0.05);与LPS+阴性序列组比较,LPS+干扰NORAD组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平降低及细胞凋亡率降低(P均<0.05);双荧光素酶报告实验证实NORAD可靶向结合miR-378a-3p;与LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组比较,LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率升高(P均<0.05)。结论:NORAD可通过调控miR-378a-3p减轻LPS诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。

血清miR-378与miR-335在2型糖尿病和糖尿病肾病患者中的表达差异及临床意义

目的探讨血清miR-378与miR-335在2型糖尿病和糖尿病肾病患者中的表达差异及临床意义。方法选取2019年12月至2020年12月在本院收治的100例2型糖尿病(T2DM)患者,根据世界卫生组织T2DM和糖尿病肾病(DKD)的诊断标准将其分为T2DM组(42例)和DKD组(58例),同时选取同期30例健康体检者作为对照组。检测所有研究对象的血清miR-378与miR-335的表达水平。绘制出受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-378与miR-335对T2DM和DKD的预测价值。结果与对照组比较,DKD组的舒张压(DBP)、收缩压(SBP)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿酸(UA)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(UMA)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较高,而估算的肾小球滤过率(eGFR)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较低,T2DM组的FBG、HbA1c、UMA较高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与T2DM组比较,DKD组患者的SBP、Scr、BUN、UMA较高,而HbA1c、FBG、eGFR、ALB较低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DKD组和T2DM组的血清miR-378、miR-335均低于对照组,DKD组的血清miR-378、miR-335均低于T2DM组(均P<0.05)。血清miR-378、miR-335水平与UMA呈负相关(r=-0.754、-0.736,P<0.001),miR-335水平与FBG负相关(r=-0.842,P<0.05)。logistic回归分析结果发现高UMA、低miR-378和miR-335水平是T2DM患者出现DKD的独立危险因素(P<0.05)。血清miR-378预测糖尿病患者出现DKD的ROC曲线下面积(AUC)为0.830(95%CI:0.741~0.969,P<0.05),灵敏度为75%,特异度为96%。miR-335预测糖尿病患者出现DKD的AUC为0.751(95%CI:0.668~0.847,P<0.05),灵敏度为77%,特异度为71%。miR-378、miR-335联合检测在预测糖尿病肾病患者出现DKD的AUC为0.932(95%CI:0.871~0.985,P<0.05),灵敏度为85%,特异度为97%。结论血清miR-378、miR-335有作为无创性诊断DKD新标志物的潜力。