沉默微小RNA-378靶向调节骨形态发生蛋白2/母亲DPP同源物4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响实验研究

目的:探究沉默微小RNA-378(miR-378)靶向调节骨形态发生蛋白(BMP)2/母亲DPP同源物(Smad)4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响。方法:对38只大鼠建立胫骨骨折模型,另取18只正常大鼠作为假手术组。选取胫骨骨折模型造模成功大鼠中的8只作为造模组,假手术组中的8只作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测造模组胫骨骨折部位骨组织及对照组相同部位正常骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。将30只胫骨骨折模型大鼠随机分为模型组、空载质粒组和miR-378沉默组,每组10只。空载质粒组、miR-378沉默组分别经尾静脉注射1μg空载质粒或miR-378小干扰RNA(siRNA)质粒;模型组和剩余10只假手术组大鼠经尾静脉注射0.9%氯化钠溶液1μg;每2天注射1次,连续干预30 d。利用X线观察各组大鼠胫骨骨折愈合情况并进行骨折愈合评分(Lane-Sandhu评分)。采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子和骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(ALP)水平。采用HE染色观察各组骨组织形态学变化。采用RT-qPCR检测各组骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。采用蛋白印迹检测各组骨组织BMP2、Smad4蛋白表达。结果:造模组骨组织miR-378表达水平高于对照组,BMP2、Smad4 mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。假手术组大鼠骨组织结构清晰;模型组和空载质粒组骨折线清晰,无骨痂出现,骨组织结构严重破坏,仅有少量成骨细胞生成;miR-378沉默组骨折线模糊,出现骨痂,骨组织破坏程度得到缓解并有大量成骨细胞生成。与假手术组比较,模型组血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、OC、ALP及骨组织miR-378表达水平升高,BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与模型组和空载质粒组比较,miR-378沉默组Lane-Sandhu评分、OC、ALP水平,以及BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平升高,血清TNF-α、IL-1β及骨组织miR-378表达水平降低(均P<0.05)。结论:沉默miR-378可能通过靶向激活BMP2/Smad4信号通路减轻胫骨骨折大鼠炎症反应,促进成骨细胞生成,加快大鼠骨折部位的愈合。

乳腺癌组织中微小RNA-378的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-378(miR-378)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集2012年1月至2014年12月女性乳腺癌患者手术切除的105对癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测上述组织中miR-378的表达并比较miR-378在癌组织和癌旁组织中的分布差异,进一步分析miR-378表达与乳腺癌临床病理特征的关系,根据随访资料分析不同miR-378水平患者的预后情况。结果 miR-378在乳腺癌组织中的表达水平为2. 745±0. 347,高于癌旁组织的1. 085±0. 126(P<0. 01)。miR-378水平与年龄、淋巴结转移、绝经、组织学分级、ER和PR表达均无关,而与肿瘤大小、TNM分期、HER-2表达、Ki-67表达和Nottingham预后指数有关(P<0. 05)。单因素分析发现,乳腺癌患者的总生存期(OS)与年龄、肿瘤大小、绝经、ER和PR表达均无关,而与淋巴结转移、TNM分期、组织学分级、HER-2表达、Ki-67表达、Nottingham预后指数和miR-378水平有关(P<0. 05); miR-378低表达者的中位OS为>60. 0个月,高于高表达者的41. 0个月,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 miR-378在乳腺癌中高表达且与肿瘤的发生、发展和预后有一定关系,在乳腺癌筛查及预后预测上有一定的潜在价值。

微小RNA-204在非小细胞肺癌中的表达及对H252癌细胞增殖及凋亡的影响

目的分析微小RNA-204在非小细胞肺癌中的表达及对H252癌细胞增殖及凋亡的影响。方法收集72例非小细胞患者癌组织与癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-204相对表达水平;采用miR-204模拟物与抑制物转染人非小细胞肺癌H252细胞株,检测H252细胞增殖及凋亡情况。结果肺癌组织miR-204的mRNA相对表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、肿瘤直径≥3cm、淋巴结发生转移肺癌患者miR-204相对表达明显低于Ⅰ-Ⅱ期、肿瘤直径<3cm、淋巴结未发生转移者(P<0.05,P<0.01);培养48h、72h、96h,模拟物组H252细胞增殖水平明显低于阴性对照组、抑制物组(P<0.05,P<0.01);模拟物组H252细胞凋亡率明显高于阴性对照组、抑制物组(P<0.05,P<0.01)。结论微小RNA-204在非小细胞肺癌中呈明显低表达状态,且与TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移等恶性病理行为明显相关。miR-204能抑制H252癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

微小RNA-138-5p通过调控Kelch重复蛋白影响缺氧/复氧心肌细胞增殖与凋亡

目的探讨微小RNA(miRNA/miR)-138-5p、Kelch重复蛋白(KLHDC10)在缺氧/复氧(H/R)心肌细胞H9C2中增殖、凋亡的功能及二者的作用关系。方法2018年5月至2019年12月,建立H/RH9C2细胞模型;正常培养的H9C2细胞记为对照组。用miRNA阴性对照(miR-con)、miR-138-5p模拟物(miR-138-5p mimics)、过表达空载体(pcDNA-con)和KLHDC10过表达载体(pcDNA-KLHDC10)不同处理方法处理H/RH9C2细胞。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Westernblotting)检测细胞中miR-138-5p、KLHDC10、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测细胞的存活和凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性。结果H/R组于对照组,H/RH9C2细胞中miR-138-5p的表达水平明显降低[(0.34±0.03)比(1.00±0.11)],KLHDC10的表达水平明显升高,细胞存活率显著降低[(62.03±6.20)%比(100.04±10.05)%],凋亡率显著升高[(28.16±2.82)%比(7.22±0.72)%],同时下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3的蛋白水平(P<0.05)。过表达miR-138-5p、抑制KLHDC10可明显促进H/R H9C2细胞存活,抑制凋亡,上调cyclinD1、下调cleaved-caspase-3的蛋白水平。miR-138-5p明显抑制野生型KLHDC10的H9C2细胞荧光素酶活性,并负向调控H9C2细胞中KLHDC10蛋白水平;过表达KLHDC10可逆转miR-138-5p对H/RH9C2细胞的存活和凋亡的调控作用。结论miR-138-5p可促进H/RH9C2细胞的存活,抑制凋亡,其机制之一为靶向下调KLHDC10。

miR-378a-5p靶向沉默FAIM促进银屑病皮下脂肪细胞促炎因子释放的研究

目的探究miR-378a-5p在银屑病皮下脂肪组织中的表达及其对银屑病影响机制。方法将SPF级4~6周龄雌性C57BL/6小鼠构建银屑病小鼠模型,其中Model组为银屑病小鼠,Control组为C57BL/6小鼠用凡士林乳膏。苏木精-伊红法(HE)染色法观察皮肤组织病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测皮下脂肪组织中miR-378a-5p、Fas细胞凋亡抑制分子(FAIM)的mRNA水平,蛋白质免疫印迹(WB)检测皮下脂肪组织中FAIM的蛋白水平。分离脂肪细胞进行后续实验。经双荧光素酶、qPCR和WB验证miR-378a-5p靶向FAIM。构建miR-378a-5p过表达和干扰质粒、及FAIM干扰质粒,脂肪细胞转染后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养基中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)和白介素6(IL-6)水平。结果模型组小鼠皮肤组织呈现明显银屑病病理形态。在银屑病小鼠模型脂肪组织中,miR-378a-5p的mRNA水平上调,FAIM的mRNA及蛋白水平均下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验、qPCR和WB检测结果表明,FAIM是miR-378a-5p的下游靶点。与NC mimics组相比,miR-378a-5p mimics组脂肪细胞释放的炎症因子TNF、IL-1和IL-6水平显著上调(P<0.05);与NC inhibitors组,miR-378a-5p inhibi⁃tors脂肪细胞释放的炎症因子TNF-α、IL-1和IL-6水平下调(P<0.05)。与Control组相比,FAIM inhibitors组脂肪细胞释放的炎症因子TNF-α、IL-1和IL-6水平上调;而miR-378a-5p inhibitors+FAIM inhibitors可逆转这种现象(P<0.05)。结论miR-378a-5p靶向沉默FAIM促进银屑病皮下脂肪细胞促炎因子TNF-α、IL-1和IL-6的释放。

微小RNA-378调控小鼠急性肝衰竭作用机制的研究

目的探究微小RNA-378(miR-378)调控小鼠急性肝衰竭的作用机制。方法将36只雄性巴比塞小鼠以随机数字表法均分为实验组和对照组。实验组腹腔注射D氨基半乳糖(D-GalN)800 mg/kg联合脂多糖10μg/kg诱导急性肝衰竭,对照组为腹腔内注射等量的生理盐水。两组在诱导后0、1、3、5、7、9 h处死小鼠取静脉血和肝组织,每个时间点有3只实验鼠。检测两组在各时间点血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝组织中的胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、TNF-α及IL-6 mRNA表达量,探针法确定肝组织中miR-378表达量,蛋白质印迹法(Westernblotting)检测Caspase-3蛋白表达量。结果实验组ALT/AST水平逐渐升高且在诱导后7 h达到峰值,对照组ALT/AST未见明显变化。相较对照组,实验组在诱导后1 h和7 h TNF-α/IL-6血清浓度及mRNA水平明显升高;实验组在诱导后5 h[(0.0038±0.0003)比(0.0054±0.0003),P<0.05]和7 h[(0.0014±0.0005)比(0.0054±0.0003),P<0.05]miR-378表达量明显降低,Caspase-3 mRNA[5 h(0.0052±0.0003),7 h(0.0070±0.0006)比(0.0033±0.0001),均P<0.05]和蛋白[5 h(0.867±0.012),7 h(1.062±0.039)比(0.577±0.035),均P<0.05]表达量升高。结论在小鼠D-GalN联合脂多糖诱导的急性肝衰竭模型中,miR-378表达量的下调促进了Caspase-3的活化,增强了肝细胞凋亡活动,进而调控急性肝衰竭的发展。miR-378可作为治疗急性肝衰竭新靶点。

微小RNA-378a对皮肤鳞癌细胞侵袭、迁移和CD226表达的影响

目的探讨微小RNA-378a(miR-378a)对皮肤鳞癌(CSCC)细胞侵袭、迁移和CD226表达的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测CSCC细胞A431和人角质形成细胞HaCaT的miR-378a水平;将体外常规培养的A431细胞进行转染,根据转染物不同分为增强转染组(转染miR-378a mimics)、抑制转染组(转染miR-378a inhibitor)和空白转染组(无转染)。采用QPCR、活细胞计数(CCK)-8、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术、Transwell细胞迁移和侵袭实验以及Western blotting检测miR-378a水平、增殖活力、凋亡率、穿膜细胞数和CD226水平;构建荧光素酶报告质粒psiCHECK-2,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-378a与CD226基因的靶向关系。结果与HaCaT细胞(1.089±0.197)相比,A431细胞的miR-378a水平升高至4.435±0.807(P<0.05)。与空白转染组的1.031±0.173相比,增强转染组的miR-378a水平升高至11.846±2.179,而抑制转染组则降低至0.162±0.040;与空白转染组相比,增强转染组转染48、72 h后的增殖活力升高,而抑制转染组则降低;与空白转染组的(7.464±1.281)%相比,增强转染组的凋亡率降低至(3.799±1.279)%,而抑制转染组则升高至(15.435±2.112)%;细胞侵袭实验中,与空白转染组的(62.704±5.639)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(89.401±6.358)个,而抑制转染组则降低至(17.346±2.954)个;细胞迁移实验中,与空白转染组的(84.227±5.478)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(102.139±7.930)个,而抑制转染组则降低至(54.448±13.068)个;与空白转染组的0.428±0.033相比,增强转染组的CD226水平降低至0.173±0.056,而抑制转染组则升高至0.695±0.020。以上组间差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-378a mimics和携带CD226野生型3’端非翻译区(3’UTR)质粒共转染时,荧光素酶活性显著下降(P<0.05);而当miR-378a mimics与携带CD226突变型3’UTR质粒共转染时,荧光素酶活性无显著变化(P>0.05)。结论CSCC细胞中miR-378a高表达并发挥促癌作用,下调该miRNA水平可抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力并诱导凋亡,可能通过靶向CD226来发挥促癌作用,在CSCC靶向治疗中有一定的应用前景。

微小RNA-760在H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响

目的探讨微小RNA-760(miR-760)在缺血再灌注(H/R)后H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响。方法采用H9c2细胞制备H/R模型,通过转染调控H9c2细胞的miR-760表达,并通过系统随机化法分为对照组、模型组(H/R组)、阴性对照组(H/R+miR NC组)和H/R+miR-760 mimics组,以RT-PCR检测H9c2细胞中miR-760的表达,CCK-8检测miR-760对H9c2细胞活力的影响,流式细胞术检测miR-760对H9c2细胞凋亡的影响,Western blot检测miR-760对心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3表达的影响。结果miR-760在H/R组H9c2细胞中的相对表达量较对照组显著降低(P<0.001),而H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的miR-760表达量较H/R组明显上调(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力显著降低(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的活力显著增加(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的凋亡率显著增加(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的凋亡率显著降低(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的Bcl-2表达量显著下调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著上调(均为P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组的Bcl-2表达量显著上调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著下调(均为P<0.001)。结论miR-760在H/R后H9c2细胞中表达下调,上调miR-760的表达能够抑制H9c2细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax和cleaved caspase-3的表达有关。

血清微小RNA-520g、微小RNA-520h预测硼替佐米初治多发性骨髓瘤早期反应性价值研究

目的探讨血清微小RNA(miR)-520g、miR-520h水平在预测硼替佐米(BTZ)初治多发性骨髓瘤(MM)患者早期治疗反应性的价值。方法选取自2016年1月至2020年7月收治的122例初诊为MM的患者设为MM组,同时,选取50例健康志愿者设为健康组。MM患者均接受BTZ为基础的一线治疗方案,并根据患者早期治疗反应性分为敏感组(n=78)与难治组(n=44)。收集MM患者年龄、性别、治疗方案、治疗周期、血红蛋白、白蛋白、血肌酐、修订的国际分期系统分期及染色体17P缺失情况等临床资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测健康组与MM组患者血清miR-520g、miR-520h水平。采用多因素Logistic回归模型分析MM患者BTZ早期治疗反应性的影响因素。采用和受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-520g、miR-520h对BTZ初治MM患者早期反应性的预测价值。结果MM组血清miR-520g、miR-520h表达水平低于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。敏感组与难治组患者患者年龄、染色体17P缺失发生率、修订的国际分期系统分期及血清miR-520g、miR-520h表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归模型分析结果显示,血清miR-520g>0.765、miR-520h>0.685是影响MM患者BTZ治疗早期反应性的独立保护因素(P<0.05)。血清miR-520g、miR-520h联合预测BTZ初治MM早期反应性的AUC高于两项指标单独预测,差异有统计学意义(Z=3.463、2.778,P<0.05)。结论血清miR-520g、miR-520h表达水平越高,MM患者接受BTZ初治的早期反应性越好。检测血清miR-520g、miR-520h水平可预测BTZ初治MM患者的早期反应性,具有一定临床研究价值。

微小RNA-378转染对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其机制

目的观察微小RNA-378(miRNA-378)转染对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其可能机制。方法 miRNA-378过表达质粒转染的SKOV3细胞作为实验组,空白载体质粒转染的SKOV3细胞作为阴性对照组,SKOV3细胞作为空白对照组。采用Real-time PCR检测各组细胞中miRNA-378、环指蛋白31(RNF31)mRNA,Western blotting检测各组细胞中RNF31蛋白,CCK-8实验检测各组细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。结果实验组SKOV3细胞miRNA-378相对表达量高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞RNF31 mRNA和蛋白相对表达量分别低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞的增殖能力明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞的克隆形成能力低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论 miRNA-378转染可抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖,miRNA-378可能通过抑制RNF31基因表达而发挥抑制卵巢癌细胞增殖的作用。

低剂量CT灌注成像参数及血清miR-144-3p、miR-378水平联合检测对早期肺癌的诊断价值

目的探讨低剂量CT灌注成像参数及血清微小RNA-144-3p(miR-144-3p)、微小RNA-378(miR-378)水平联合检测对早期肺癌的诊断价值。方法回顾性选取2021年8月至2023年8月河南大学第一附属医院收治的早期肺癌患者80例,纳入观察组,另选取同期良性肺病患者80例,纳入对照组。比较两组低剂量CT灌注成像参数[血容积(BV)、血流量(BF)、平均通过时间(MTT)、通透性(PMB)]及血清miR-144-3p、miR-378水平,分析其联合诊断价值及不同水平发生早期肺癌的危险度。结果观察组BV、BF、MTT、PMB值及血清miR-378水平高于对照组,血清miR-144-3p水平低于对照组(P<0.05);BV、BF、MTT、PMB、miR-144-3p、miR-378联合诊断早期肺癌的AUC为0.896,最佳诊断敏感度为90.00%,最佳特异度为87.50%,约登指数为0.775,且高水平患者发生早期肺癌的危险度是低水平的2.333倍、2.810倍、2.478倍、1.857倍、0.509倍、1.759倍(P<0.05)。结论低剂量CT灌注成像参数及血清miR-144-3p、miR-378与早期肺癌发生密切相关,联合检测具有一定诊断效能,且不同水平发生早期肺癌的危险度存在差异,可作为临床诊断早期肺癌的有效方式。

微小RNA-204-5p靶向蛋白质酪氨酸磷酸酶1B基因对缺氧复氧诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响

目的探讨miR-204-5p对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化应激的调控作用机制。方法体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建心肌细胞缺氧/复氧模型。实验分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧+miR-con组、缺氧复氧+miR-204-5p组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA-蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblotting)检测miR-204-5p和PTP1B的表达。双荧光素酶报告基因实验和Westernblotting验证miR-204-5p和PTP1B的靶向调控关系。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测心肌细胞存活率。试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnT)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)水平变化。流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况。结果缺氧复氧处理可显著抑制心肌细胞miR-204-5p表达,促进PTP1B表达。PTP1B是miR-204-5p的靶基因,miR-204-5p可负性调控PTP1B的表达。缺氧复氧处理显著抑制细胞存活,降低SOD水平,提高LDH、ROS和MDA水平,促进细胞凋亡。过表达miR-204-5p可降低LDH、ROS和MDA水平,促进细胞存活,降低细胞凋亡;过表达PTP1B可部分削弱miR-204-5p过表达对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论miR-204-5p通过靶向下调PTP1B抑制心肌细胞氧化应激,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,对心肌细胞发挥保护作用。

血浆miR-378、HSF1与慢性心力衰竭病人左心室重构的相关性分析

目的分析血浆微小RNA-378(miR-378)、热休克转录因子1(HSF1)与慢性心力衰竭(CHF)病人左心室重构的相关性。方法选取2017年5月—2019年5月于唐山市开滦总医院心内科住院治疗的CHF病人137例作为CHF组,依据美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准对CHF病人进行分级,其中Ⅰ级或Ⅱ级45例,Ⅲ级50例,Ⅳ级42例;另选取同期因急性心肌梗死于本院住院治疗的60例病人作为对照组。所有病人均接受超声心动图检测;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测受试者血浆miRNA-378水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血浆HSF1水平;Pearson法分析血浆miR-378、HSF1水平与左心室重构指标左心室重量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积(LVEDV)相关性;多元线性逐步回归模型分析影响CHF病人LVMI水平的相关因素。结果与对照组比较,CHF组心功能Ⅰ级或Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级组病人血浆LVMI、LVEDV水平依次升高(P<0.05),miR-378、HSF1、LVEF水平依次降低(P<0.05)。Pearson法分析显示,CHF组病人血浆miR-378、HSF1与LVMI、LVEDV均呈负相关(P<0.005),与LVEF呈正相关(P<0.05)。多元线性逐步回归分析显示,血浆miR-378、HSF1是LVMI的影响因素(P<0.05)。结论血浆miR-378、HSF1水平降低可能与CHF病人左心室重构的发生发展有关,可为临床诊断CHF病人发生左心室重构及评估病情严重程度提供依据。

慢性心力衰竭患者血浆外泌体LncRNA H19、miR-214表达与炎性因子和左心室重构的关系

目的分析慢性心力衰竭(CHF)患者血浆外泌体长链非编码RNA H19(LncRNA H19)、微小RNA-214(miR-214)表达与血清炎性因子和左心室重构的关系。方法选取2020年7月-2022年9月内蒙古自治区人民医院心血管内科收治CHF患者120例为CHF组,另选取同期医院体检健康志愿者40例为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血浆外泌体LncRNA H19、miR-214表达,酶联免疫吸附法检测炎性因子[白介素(IL)-1β、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,超声心动图检测左心室重构指标[左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室后壁厚度(LVPWT)、舒张末期室间隔厚度(IVST)和左心室心肌质量指数(LVMI)]。通过StarBase数据库预测LncRNA H19与miR-214的关系。采用Pearson/Spearman相关性分析CHF患者血浆外泌体LncRNA H19、miR-214表达与纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级、炎性因子和左心室重构指标的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC)获得血浆外泌体LncRNA H19、miR-214预测CHF患者发生左心室重构的效能。结果与健康对照组比较,CHF组血浆外泌体LncRNA H19表达和血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平及LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI升高,miR-214表达降低(t=15.837、93.717、86.669、103.761、76.500、9.953、29.647、30.652、13.832、11.256,P均<0.001)。NYHA心功能分级Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级CHF患者血浆外泌体LncRNA H19表达和血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平及LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI依次升高,miR-214表达依次降低(F=247.164、182.669、259.385、298.349、235.816、196.860、171.320、182.099、179.760、138.863,P均<0.001)。经StarBase数据库预测,LncRNA H19与miR-214存在互补序列。Pearson/Spearman相关性分析显示,CHF患者血浆外泌体LncRNA H19与IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α、NYHA心功能分级、LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI呈正相关,与miR-214呈负相关(r=0.739、0.774、0.789、0.767、0.899、0.753、0.735、0.743、0.752、-0.885,P均<0.001);miR-214与IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α、NYHA心功能分级、LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI呈负相关(r=-0.785、-0.783、-0.779、-0.773、-0.839、-0.761、-0.767、-0.745、-0.751、-0.885,P均<0.001)。血浆外泌体LncRNA H19、miR-214及二项联合预测左心室重构的曲线下面积(AUC)分别为0.780、0.779、0.877,二项联合的AUC高于单项预测(Z=3.026、3.114,P=0.003、0.002)。结论CHF患者血浆外泌体LncRNA H19高表达,miR-214低表达,与CHF患者炎性反应和左心室重构密切相关,可能成为CHF患者病情严重程度和左心室重构的评估指标。

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨lncRNA H19对慢性心力衰竭大鼠的影响

目的:基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad同源物3(Smad3)信号通路探讨长链非编码RNA H19(lncRNA H19)和微小RNA(miRNA)-200a对慢性心力衰竭大鼠心功能及心肌纤维化的影响。方法:选择清洁级成年健康雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为假手术组和模型组,分别12、48只。采用结扎法构建心力衰竭模型大鼠,造模成功后,按随机数字表法分为心力衰竭组、lncRNA H19阴性对照组(阴性对照组)、lncRNA H19过表达组(过表达组)、lncRNA H19过表达+miRNA-200a过表达组(联合过表达组),每组12只。阴性对照组、过表达组和联合过表达组分别于第1、4、7、10、13、16天在大鼠尾部通过静脉注射lncRNA H19阴性对照质粒5 mL/(kg·d)、lncRNA H19质粒5 mL/(kg·d)、lncRNA H19质粒5 mL/(kg·d)和miR⁃NA-200a质粒2 mL/(kg·d);心力衰竭组、假手术组仅注射等剂量生理盐水,1次/d。末次注射2 d后,采用心脏彩色多普勒超声仪检测大鼠心功能指标[左心室心脏射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)];采用Masson染色法检测大鼠心肌纤维化情况,测定胶原容积分数(CVF);采用实时荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织lncRNA H19、miRNA-200a转录水平;采用Western blot法检测大鼠心肌组织TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,其余4组LVEDD、LVESD和TGF-β1、Smad3蛋白表达水平及miRNA-200a转录水平均明显升高,LVFS、LVEF和lncRNA H19转录水平均明显降低(P<0.05);与心力衰竭组、阴性对照组比较,过表达组和联合过表达组LVEDD、LVESD和TGF-β1、Smad3蛋白表达水平及miRNA-200a转录水平均明显降低,LVFS、LVEF和ln⁃cRNA H19转录水平均明显升高(P<0.05);与过表达组比较,联合过表达组LVEDD、LVESD和TGF-β1、Smad3蛋白表达水平及miRNA-200a转录水平均明显升高,LVFS、LVEF均明显降低(P<0.05),lncRNA H19转录水平差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠心肌组织仅有少量胶原分布,组织细胞排列紧密无明显缝隙;与假手术组比较,心力衰竭组大鼠心肌组织出现大量增生的胶原,细胞排列不均匀,CVF明显升高(P<0.05);与心力衰竭组、阴性对照组比较,过表达组大鼠心肌组织胶原增生明显缓解,细胞整齐分布,CVF明显降低(P<0.05);与过表达组比较,联合过表达组大鼠心肌组织仍有大量胶原分布,细胞间隙扩大,CVF明显升高(P<0.05)。结论:lncRNA H19过表达可减轻心肌纤维化和心脏损伤程度,改善心功能,可能与调控TGF-β1/Smad3信号通路,抑制miRNA-200a表达有关。

特发性癫痫患儿血清miR-378、miR-575表达情况及其与疾病转归的关系

目的分析特发性癫痫患儿的血清miR-378、miR-575表达情况,并探讨二者与疾病转归的关系。方法将124例特发性癫痫患儿作为癫痫组,150例健康儿童作为健康组。连续随访1年,根据治疗后癫痫发作的控制情况将癫痫患儿分为完全控制组(n=79)和非完全控制组(n=45)。检测所有儿童的血清miR-378、miR-575表达量,评估血清miR-378、miR-575表达量对特发性癫痫患儿发作控制效果的预测效能,并分析特发性癫痫患儿发作控制效果的影响因素。结果癫痫组血清miR-378、miR-575表达量低于健康组(P<0.05),非完全控制组血清miR-378、miR-575表达量低于完全控制组(P<0.05)。血清miR-378、miR-575表达量预测特发性癫痫患儿发作控制效果的曲线下面积(AUC)分别为0.747、0.852,二者联合预测的AUC(0.906)大于单一指标的AUC(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,癫痫发作类型为全身性发作、治疗前癫痫发作频率≥3次/个月、治疗前神经系统发育异常、血清miR-378表达量≤0.73、血清miR-575表达量≤1.83是特发性癫痫患儿发作控制不佳的危险因素(P<0.05)。结论血清miR-378、miR-575在特发性癫痫患儿血清中呈低表达,且与癫痫发作控制效果有关,二者有望作为预测特发性癫痫患儿发作控制效果的血清学生物标志物。

miR-378通过抑制小鼠肝炎症反应改善非酒精性脂肪性肝炎的损伤

目的 :探讨miR-378对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生及发展的作用及其机制。方法 :将C57BL/6小鼠随机分为对照(正常饮食)组、NASH模型(高脂饮食)组、miR-378抑制剂(高脂饮食+antagomir-378)组、阴性抑制剂(高脂饮食+antagomir阴性对照)组。观察小鼠肝系数和组织病理改变;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证NASH小鼠及各处理组肝组织的miR-378表达。应用自动化学分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;qRT-PCR检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子β(TGF-β)和胶原蛋白1α2(Col1α2)的mRNA表达;免疫荧光检测TGF-β和Col1α2蛋白表达。结果 :与对照组比较,NASH模型组和阴性抑制剂组的肝系数显著升高;与NASH模型组比较,miR-378抑制剂组肝系数显著下降。NASH模型组肝小叶结构不清,出现明显的肝细胞坏死、脂肪及炎症细胞浸润;miR-378抑制剂组肝小叶结构正常,肝细胞排列整齐,脂肪浸润减轻。NASH模型组和阴性抑制剂组miR-378表达较对照组显著升高;NASH模型组和阴性抑制剂组血清ALT和AST含量较对照组显著升高,而miR-378抑制剂组较NASH模型组含量显著下降;NASH模型组和阴性抑制剂组TNF-α、IL-6表达量较对照组明显升高,而IL-4明显下降,MCP-1差异无统计学意义;而miR-378抑制剂组TNF-α、IL-6表达量较NASH模型组明显下降,IL-4明显上升;NASH模型组和阴性抑制剂组TGF-β和Col1α2表达量较对照组明显升高;而与NASH模型组比较,miR-378抑制剂组TGF-β和Col1α2表达量明显下降。结论 :miR-378可能是NASH的危险因素,抑制miR-378的表达有利于缩短NASH病程,为NASH治疗提供了新的潜在治疗靶点。

慢性牙周炎患者龈沟液中miR-498和miR-378h表达与Th17/Treg细胞平衡的关系

目的:探讨慢性牙周炎患者龈沟液中微小RNA-498(miR-498)、微小RNA-378h(miR-378h)表达与辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)细胞平衡的关系。方法:纳入我院2022年1月~2023年2月期间收治的97例慢性牙周炎患者作为研究对象,根据病情严重程度分为轻度组(31例)、中度组(42例)和重度组(24例),另选取同期在本院体检的97例牙周健康者作为对照组。测定分析慢性牙周炎患者龈沟液中miR-498和miR-378h表达水平与Th17/Treg的相关性,探讨影响慢性牙周炎发生的危险因素并评估miR-498、miR-378h对慢性牙周炎的诊断价值。结果:研究组和对照组吸烟史、牙周指标、Th17、Treg、Th17/Treg比较,均存在显著差异(P<0.05);研究组龈沟液miR-498、miR-378h表达水平均高于对照组,且二者表达水平随慢性牙周炎严重程度的增加均呈现升高的趋势(P<0.05);龈沟液miR-498、miR-378h表达水平与血清Th17/Treg水平均呈正相关(r=0.669、0.803,P均<0.05)。有吸烟史、Th17/Treg、miR-498及miR-378h表达为发生慢性牙周炎的影响因素(P<0.05)。龈沟液miR-498、miR-378h以及血清Th17/Treg单独诊断慢性牙周炎的AUC分别为0.826、0.833、0.854,miR-498、miR-378h二者联合诊断的AUC为0.932,高于miR-498、miR-378h以及Th17/Treg单独诊断(P<0.05)。结论:龈沟液miR-498、miR-378h表达水平与血清Th17/Treg水平均呈正相关,且均与牙周炎的发生发展有关。

三参通脉合剂通过上调microRNA-146a改善大鼠心肌细胞H9C2的氧化损伤

目的 探讨三参通脉(Sanshentongmai, SSTM)合剂调节微小RNA-146a(microRNA-146a)对大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤的影响及作用机制。方法 体外培养大鼠心肌细胞H9C2,过氧化氢(H_(2)O_(2))作为氧化剂制作H9C2氧化应激模型。通过三参通脉干预,观察H_(2)O_(2)诱导的H9C2细胞氧化损伤的变化以及microRNA-146a的表达,探讨三参通脉对H9C2的保护作用及其作用机制。将体外培养的H9C2分为空白组、H_(2)O_(2)氧化损伤模型组(简称模型组)、H_(2)O_(2)模型+三参通脉药物(500μg/mL,处理72 h)组(简称模型加药组)。通过细胞计数试剂盒CCK8检测细胞活力,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清N端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NtproBNP)、一氧化氮(nitric oxide, NO)、超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein, Hs-CRP)和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ)水平,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测系统检测microRNA-146a表达水平。结果 通过CCK8法检测细胞活力,发现在药物质量浓度为500μg/mL时,细胞增殖改善达到顶峰,故选用此浓度为干预浓度。ELISA检测的心衰相关指标:Nt-proBNP、NO、Hs-CRP、angiotensinⅡ水平中,与空白组比较,模型加药物组中Nt-proBNP、angiotensinⅡ表达上调(P<0.05),NO表达下调(P<0.05),Hs-CRP与空白组比较表达差异无统计学意义,说明三参通脉可以有效改善大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤。最后,RT-PCR法检测microRNA-146a在各组的表达可以看出,15μmol/L H_(2)O_(2)处理可以明显降低microRNA-146a表达,而模型加药组中microRNA-146a表达较模型组升高(P<0.05),与空白组对比差异无统计学意义。结论 三参通脉可以明显抵抗H_(2)O_(2)诱导的H9C2细胞氧化损伤,可能是通过上调microRNA-146a从而发挥心肌保护作用。

MicroRNA-34a靶向SIRT1参与阿霉素诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其作用靶基因。方法:建立阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡模型;TUNEL染色观察H9c2细胞凋亡;双萤光素酶报告实验检测miR-34a与潜在靶基因沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR检测miR-34a和SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1和凋亡相关蛋白表达水平。结果:阿霉素处理H9c2细胞之后,细胞发生凋亡,miR-34a的表达显著增强;双萤光素酶报告实验提示miR-34a与SIRT1 3'UTR可相互作用,并证实miR-34a可在转录后水平抑制SIRT1的表达,SIRT1蛋白水平在阿霉素处理的心肌细胞中显著下调;过表达miR-34a及沉默SIRT1均能一致性抑制Bcl-2表达,促进Bax和p66shc的表达,而过表达SIRT1能有效抑制阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡。结论:SIRT1是miR-34a的靶基因,并介导了miR-34a在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用。