MATN1-AS1靶向微小RNA-429对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA MATN1反义RNA 1(MATN1-AS1)靶向微小RNA-429(miR-429)在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的生物学作用。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测胃癌组织和癌旁组织的MATN1-AS1水平并经Kaplan-Meier Plotter数据库在线分析MATN1-AS1与胃癌预后的关系;双荧光素酶报告实验鉴定MATN1-AS1对miR-429的靶向作用。将BGC-823细胞分为4组:空白对照组、阴性对照组、MATN1-AS1干扰(si-MATN1-AS1)组(转染si-MATN1-AS1+miR-429无关序列miR-NC)和共转染组(转染si-MATN1-AS1+miR-429抑制物inhibitor),MTT、划痕实验和Transwell小室实验检测BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭能力变化,qPCR和Western blotting检测Snail、Janus激酶1(JAK1)、磷酸化JAK1(p-JAK1)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的水平。结果与癌旁组织相比,胃癌组织的MATN1-AS1水平升高(P<0.05);MATN1-AS1高水平的中位总生存期为38.20个月,短于低水平的89.43个月(P<0.05)。miR-429模拟物降低了野生型MATN1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型MATN1-AS1的荧光素酶活性(P>0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-MATN1-AS1组BGC-823细胞活力降低(P<0.05),而共转染组的细胞活力较si-MATN1-AS1组升高(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-MATN1-AS1组BGC-823细胞的miR-429水平升高且划痕愈合率、穿膜细胞数量及Snail、MMP-9和p-JAK1水平均降低(P<0.05);共转染组的上述指标的变化趋势与si-MATN1-AS1组相反(P<0.05)。结论胃癌中异常高表达的MATN1-AS1具有致癌特性,MATN1-AS1能够通过靶向miR-429来促进胃癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力,为胃癌的治疗提供了一种可能的途径。

lncRNA MSC-AS1通过调节miR-429/RhoA轴对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探索长链非编码RNA(lncRNA)MSC-AS1通过调节微小RNA(miR)-429/Ras同源基因家族成员A(RhoA)轴对人鼻咽癌(NPC)细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法实时荧光定量PCR法(qPCR)检测NPC细胞系(CNE-1、HNE2、HONE-1细胞)以及人鼻咽上皮细胞系NP69细胞中lncRNA MSC-AS1、miR-429、RhoA mRNA的表达水平。以CNE-1细胞为研究对象,将si-MSC-AS1、miR-429 inhibitor、miR-429 mimics及相应阴性对照分别转染或共转染CNE-1细胞,记为对照组(未转染)、si-NC组、si-MSC-AS1组、mimics NC组、miR-429 mimics组、si-MSC-AS1+inhibitor NC组、si-MSC-AS1+miR-429 inhibitor组。MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶实验分别验证miR-429与MSC-AS1、RhoA的靶向关系;免疫印迹法检测RhoA、B淋巴细胞因子相关x蛋白(Bax)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞周期素D1(CyclinD1)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平。结果miR-429分别与MSC-AS1、RhoA存在靶向关系。与NP69细胞相比,CNE-1、HNE2、HONE-1细胞中MSC-AS1、RhoA mRNA的表达水平显著增加,miR-429表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-MSC-AS1组细胞增殖率、迁移和侵袭数、MSC-AS1、N-cadherin、RhoA、CyclinD1比较表达水平显著下降,细胞凋亡率、E-cadherin、Bax显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组、mimics NC组相比,miR-429 mimics组细胞增殖率、迁移和侵袭数、N-cadherin、RhoA、CyclinD1表达水平显著下降,细胞凋亡率、miR-429、E-cadherin、Bax显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);抑制miR-429表达水平可减弱干扰MSC-AS1对细胞恶性生物学行为的影响(P<0.05)。结论干扰MSC-AS1可以抑制NPC细胞增殖、侵袭及迁移,促进其凋亡,可能与miR-429/RhoA轴有关。

miR-429过表达对膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的影响及机制

目的探讨miR-429过表达对膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的影响及机制。方法将常规培养好的膀胱癌细胞T24随机分为对照组、miR-429组,对照组转染miR-NC(无关序列的mimics),miR-429组转染插入miR-429的目标片段。用划痕试验检测两组迁移能力,Transwell侵袭试验检测其侵袭能力。采用实时PCR技术检测T24细胞内E盒结合锌指蛋白(ZEB1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA表达,用免疫印迹法检测T24细胞内ZEB1、MMP-2及E-cadherin蛋白表达。结果与对照组比较,miR-429组细胞迁移距离短,迁移细胞数少(P均<0.05),细胞内ZEB1、MMP-2 mRNA及蛋白表达低,E-cadherin mRNA及蛋白表达高(P均<0.05)。结论 miR-429b过表达可能通过靶向抑制膀胱癌细胞内ZEB1、MMP-2表达,增强E-cadherin的表达阻止膀胱癌细胞迁移、侵袭。

miR-429对低氧诱导的缺血性脑卒中的血管生成作用机制研究

目的探讨mi R-429对低氧诱导的缺血性脑卒中的血管生成作用机制研究。方法线栓法建立永久性局灶脑缺血大鼠模型,随机分为4组进行不同处理:(1)antagomi R-Ctr组:常氧预处理并注射antagomi R-Ctr;(2)antagomi R-429组:常氧预处理并注射antagomi R-429;(3)Co Cl2+antagomi R-Ctr组:Co Cl2预处理并注射antagomi R-Ctr;(4)Co Cl2+antagomi R-429组:Co Cl2预处理并注射antagomi R-429。Co Cl2溶液和antagomi R-Ctr/429的剂量分别是30mg·kg-1和12mg·kg-1。通过实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)和蛋白印迹试验(Western blot)检测各组HIF-1α、VEGF和mi R-429的表达,通过异硫氢酸荧光素葡聚糖(FITC-Dextran)和氯化三苯基四氮唑(TTC)染色分别检测微血管密度和梗死体积。结果在脑缺血后第7d和21d,Co Cl2预处理和antagomi R-429能诱导大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,降低mi R-429的表达,并促进血管生成和缩小梗死体积;脑缺血后第7d,Co Cl2+antagomi R-429组较其余3组HIF-1α和VEGF的表达最高,mi R-429的表达最低,微血管密度最大且梗死体积最小,且在脑缺血后第21d,此趋势更明显。结论 Antagomi R-429促进低氧诱导的脑缺血大鼠的血管生成,mi R-429可作为治疗缺血性脑卒中的新靶点。

MiR-429生物学功能的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类长度在22个核苷酸左右的内源性非编码单链RNA。这类RNA在细胞中发挥着重要的生物学功能,其中miR-429经大量研究证实,可以通过对不同靶基因的表达进行调控从而发挥抑制肿瘤发生和进展的重要作用,同时也能够在细胞分化和神经性疾病中发挥作用。我们对miR-429及其下游靶基因在细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭中发挥的作用进行了概述。

miR-429在食管鳞癌中的表达及对细胞增殖迁移的影响

目的探讨微小RNA-429(miR-429)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对细胞增殖及迁移的影响。方法选取本院45例ESCC患者手术切除的癌组织(ESCC组)及癌旁组织(正常组)标本为研究对象,并采用实时荧光定量(q RT-PCR)检测两组miR-429表达水平。体外培养ESCC癌细胞株系ECa109及人正常食管上皮细胞株Het-1A,将转染试剂、miR-429阴性对照质粒、miR-429mimic质粒分别转染ECa109细胞,命名为空白组、阴性转染组、miR-429过表达组,同时应用生物信息学工具预测miR-429的靶基因为CTl0激酶调节子样蛋白(CRKL),荧光素酶活性检测miR-429与CRKL的靶向调控关系。采用qRT-PCR法检测细胞中miR-429与CRKLmRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测细胞中CRKL蛋白表达。MTT法检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞迁移能力。结果与正常组相比,ESCC组miR-429表达水平显著降低(P<0.05);荧光素酶活性测定显示3'UTR-Wt细胞中miR-429过表达组荧光素酶活性显著低于阴性对照组(P <0.05),3'UTR-Mut细胞中miR-429阴性转染组与过表达组比较差异无统计学意义(P> 0.05);与Het-1A细胞相比,ECa109细胞中miR-429表达水平显著降低(P<0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著升高(P <0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组miR-429表达水平显著升高(P <0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著降低(P <0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组细胞增殖率及迁移数量均显著降低(P <0.05)。结论 ESCC中miR-429呈低表达,其可通过下调CRKL表达进而抑制ESCC细胞增殖及迁移。

miR-429在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨微小RNA-429(miR-429)在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:选取本院收治的78例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,另选取同期因其他疾病需进行鼻内镜手术患者33例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组组织中miR-429的表达。体外培养人鼻咽上皮细胞NP69与鼻咽癌细胞株CNE-2,将miR-429阴性对照质粒、miR-429 mimics质粒分别转染至CNE-2细胞,分别命名为阴性转染组、miR-429过表达组,未经处理的细胞命名为空白组,采用qRT-PCR技术检测各转染组细胞中miR-429表达。MTT法检测各转染组细胞增殖情况;平板克隆细胞形成实验检测细胞菌落形成情况;Transwell检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测E盒结合锌指蛋白(ZEB1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达量。结果:鼻咽癌组织中miR-429表达水平显著低于对照组(P<0.05),且CNE-2细胞中miR-429表达水平显著低于NP69细胞(P<0.05);miR-429过表达组miR-429表达水平显著高于空白组、阴性转染组(P<0.05);miR-429过表达组细胞增殖能力显著低于空白组、阴性转染组(P<0.05);miR-429过表达组细胞菌落形成、迁移细胞及侵袭细胞数量均显著低于空白组、阴性转染组(P<0.05);miR-429过表达组细胞中ZEB1、MMP-2蛋白表达水平显著低于空白组、阴性转染组,而E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P <0.05)。结论:鼻咽癌细胞中miR-429呈低表达,miR-429过表达后可显著抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭。

miR-429对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及MAPK/ERK通路的影响

【目的】探究微小RNA-429(miR-429)对肝癌HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节酶(MAPK/ERK)通路的影响。【方法】体外培养肝癌HepG2细胞,设置空白组(正常培养HepG2细胞)、阴性对照组(转染miR-429 mimics-NC的HepG2细胞)和过表达组(转染miR-429 mimics HepG2细胞),采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测三组HepG2细胞中miR-429表达情况,采用噻唑蓝(MTT)法检测三组肝癌HepG2细胞增殖情况,采用Transwell试验检测三组HepG2细胞迁移、侵袭情况,采用免疫印迹(WB)检测三组HepG2细胞中增殖相关CyclinD1、c-Myc蛋白,迁移、侵袭相关MMP-2、MMP-9蛋白及MAPK/ERK通路相关蛋白表达水平。【结果】与空白组和阴性对照组比较,过表达组miR-429水平显著增加(P<0.05),HepG2细胞增殖率、迁移及侵袭细胞数、肝癌HepG2细胞中c-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、p-ERK蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。【结论】过表达miR-429可能通过抑制MAPK/ERK通路抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。

miR-429在上皮性卵巢癌进展中的作用及机制研究

目的 探讨miR-429在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌细胞增殖和迁移的关系,寻找其下游靶基因,并探讨miR-429靶基因DNAJB6在卵巢癌中的作用。方法 收集2019年9月—2022年2月期间于哈尔滨医科大学附属第二医院经妇科手术切除得到的27例上皮性卵巢癌组织和14例正常卵巢组织,使用实时荧光定量聚合酶链反应检测组织中miR-429及DNAJB6 mRNA的表达。在人卵巢癌细胞株A2780中敲低miR-429,使用CCK-8、平板克隆形成及Transwell细胞迁移实验在体外检测肿瘤细胞增殖及迁移能力的变化。采用生物信息学软件预测miR-429下游靶基因并分析其在卵巢癌中的预后价值,应用qRT-PCR和Western blotting实验进一步证实miR-429与DNAJB6之间的调控关系。结果 与正常卵巢组织[0.886(0.785,2.014)]相比,miR-429在上皮性卵巢癌组织[2.048(0.830,5.281)]中高表达(P=0.018),过表达miR-429可以增强卵巢癌细胞的增殖和迁移能力。与正常卵巢组织(1.290±0.781)相比,DNAJB6在上皮性卵巢癌组织(0.710±0.456)中低表达(P=0.004),与卵巢癌患者的预后关系密切。相对于对照组DNAJB6 mRNA的表达量(1.020±0.251),敲低miR-429可以上调DNAJB6 mRNA的表达量(2.839±0.305,P=0.001);敲低miR-429同样也上调了DNAJB6蛋白的表达(P=0.049)。结论 miR-429在上皮性卵巢癌中发挥促癌作用,可以调控靶基因DNAJB6的表达,提示miR-429/DNAJB6可能是卵巢癌治疗的新靶点。