结直肠癌组织中微小RNA-449b的水平及临床意义

目的探讨微小RNA-449b(miR-449b)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法收集本院2012年1月至2014年12月收治的92例手术切除的结直肠癌组织和88例癌旁正常肠黏膜组织存档蜡块,采用实时定量PCR(QPCR)法检测以上组织中miR-449b的表达情况,并分析其与临床病理特征(性别、年龄、部位、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、分化程度及血清CEA、CA50和CA199水平)的关系,根据随访资料分析miR-449b表达与预后的关系。结果 QPCR检测发现92例结直肠癌组织中miR-449b水平分别为0.367±0.183,低于癌旁组织的1.029±0.228(P<0.05);miR-449b表达与结直肠癌患者的性别、年龄、部位、分化程度及血清CEA、CA50和CA199水平均无关(P>0.05),而与浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期均有关(P<0.05)。miR-449b低表达者的中位总生存期为37.0(95%CI:33.168～40.382)个月,低于miR-449b高表达者的47.0(95%CI:42.561～51.419)个月(P<0.001)。结论 miR-449b在结直肠癌组织中表达降低,与结直肠癌的发生发展有关,且miR-449b低水平的预后较差,在该类型恶性肿瘤的诊断和预后预测上有一定价值。

血清miR-130a、miR-449a对冠心病患者接受经皮冠状动脉介入术后发生支架内再狭窄的预测价值

目的探讨微小RNA-130a(miR-130a)和微小RNA-449a(miR-449a)对冠心病患者接受经皮冠状动脉介入术(PCI)后发生支架内再狭窄(ISR)的预测价值。方法选取2019年10月至2022年10月在该院确诊为冠心病并接受PCI的90例患者作为研究对象,PCI后对其进行6个月的随访,根据患者是否发生ISR分为ISR组和非ISR组,收集整理临床资料。采用荧光定量聚合酶链反应检测两组血清miR-130a、miR-449a水平;采用多因素Logistic回归分析影响冠心病患者接受PCI后发生ISR的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-130a、miR-449a水平预测冠心病患者接受PCI后发生ISR的效能。结果随访6个月后,发生ISR 17例,未发生ISR 73例。ISR组血清miR-130a水平明显高于非ISR组,miR-449a水平明显低于非ISR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ISR组和非ISR组的年龄、性别、体质量指数、吸烟史、高血压病史及甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、糖化血红蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);ISR组总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及总胆红素水平明显高于非ISR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同病变部位、病变类型、支架大小的ISR患者血清miR-130a和miR-449a水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),不同狭窄支数、病变长度的ISR患者血清miR-130a和miR-449a水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-130a、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆红素水平升高均是冠心病患者接受PCI后发生ISR的独立危险因素(P<0.05),miR-449a水平升高是PCI后发生ISR的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-130a、miR-449a单项及二者联合检测预测冠心病患者PCI后发生ISR的曲线下面积(AUC)分别为0.805、0.889、0.967,二者联合检测预测ISR的AUC明显大于miR-130a、miR-449a单独检测(Z=2.239,P=0.025;Z=2.266,P=0.024)。结论miR-130a、miR-449a水平与冠心病患者接受PCI后发生ISR关系密切,且miR-130a、miR-449a联合检测对冠心病患者接受PCI后发生ISR具有较高的临床预测价值。

超声-微泡介导的microRNA-449a通过调节Notch1对肺癌细胞的生长抑制作用

目的:基因加载的微泡(MBs)与超声结合可以提高递送效率,是一种较好的基因传递方法。本实验旨在研究超声-微泡介导的microRNA(miR)-449a通过靶向Notch1对肺癌细胞的影响。方法:检测miR-449a在肺癌组织,癌旁组织,肺癌细胞系和肺上皮细胞中的表达,并分析其与肺癌患者临床特征的关系。进行功能研究以探测miR-449a和超声-微泡介导的miR-449a在肺癌中的作用。应用RT-qPCR、Western blot分析来验证miR-449a,Notch1,增殖和凋亡相关蛋白的水平。结果:在肺癌中观察到miR-449a表达下降。miR-449a的过表达抑制了肺癌细胞增殖,促进了G2/M期阻滞和细胞凋亡。超声-微泡介导的miR-449a增强了miR-449a对细胞生长和抗凋亡的抑制作用。miR-449a通过靶向Notch1抑制肺癌细胞活性。结论:miR-449a过表达抑制肺癌细胞生长,超声-微泡介导的miR-449a增强了miR-449a对肺癌的抑制作用。该研究可能为肺癌治疗提供新的方向。

miR-449a对食管鳞癌细胞Eca-109增殖、迁移、侵袭的影响及机制

目的探讨miR-449a对食管鳞癌细胞Eca-109增殖、迁移、侵袭的影响及其可能的机制。方法将食管鳞癌细胞Eca-109分为miR-449a组和NC组,分别转染miR-449a-mimics和NC-mimics;采用实时荧光定量PCR法检测两组miR-449a相对表达量,miR-449a组miR-449a相对表达量明显高于NC组,证实上调miR-449a表达的Eca-109细胞模型建立成功。采用CCK-8法、平板克隆形成试验检测两组细胞增殖能力(分别以培养12、24、48 h吸光度值和克隆数表示),细胞划痕试验检测细胞迁移能力(以细胞之间的距离表示),Transwell小室试验检测细胞侵袭能力(以侵袭到下室的细胞数量表示),流式细胞仪检测细胞周期比例。采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法分别检测两组miR-449a直接靶基因E2F3 mRNA及蛋白相对表达量。结果 miR-449a组细胞培养12、24、48 h时的吸光度值及克隆数、细胞之间的距离、侵袭到下室的细胞数量均低于NC组(P<0.05或<0.01)。miR-449a组G1期细胞比例高于NC组,S期细胞比例低于NC组(P均<0.05);两组G2/M期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-449a组E2F3 mRNA及蛋白相对表达量均低于NC组(P均<0.01)。结论 miR-449a可抑制食管鳞癌细胞Eca-109的增殖、迁移和侵袭;抑制靶基因E2F3表达可能是其作用机制。

miR-124a和miR-449a对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨微小RNA-124a(miR-124a)和微小RNA-449a(miR-449a)对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值。方法选取行手术切除肿瘤的NSCLC患者90例(NSCLC组),出院随访36个月,根据术后复发情况分为复发组(56例)和未复发组(34例)。另选取肺部良性结节患者60例(良性结节组)、健康体检者80名(正常对照组)。收集所有对象的基本资料,同时检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、miR-124a和miR-449a水平。采用Spearman相关分析评估各项指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标诊断NSCLC的效能。结果NSCLC组血清NSE水平高于正常对照组和良性结节组(P<0.05),血清miR-124a和miR-449a水平低于正常对照组和良性结节组(P<0.05)。正常对照组与良性结节组之间血清NSE、miR-124a和miR-449a水平差异均无统计学意义(P>0.05)。与未复发组比较,复发组血清NSE水平升高(P<0.05),血清miR-124a和miR-449a水平降低(P<0.05);2个组之间年龄、性别、体质量指数(BMI)、吸烟情况、肿瘤直径、病理类型和TNM分期之间差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,NSE、miR-124a和miR-449a单项诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)分别为0.660、0.703、0.759。NSE+miR-124a+miR-449a联合检测诊断NSCLC的AUC(0.895)和敏感性(96.25%)均最高,miR-124a+miR-449a联合检测诊断NSCLC的特异性最高(90.31%)。结论miR-124a和miR-449a或可作为NSCLC的辅助诊断指标。

非小细胞肺癌组织中miR-449a/b/c的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小RNA(miRNA)-449a/b/c的表达水平、临床意义及与预后的关系。方法收集2013年1月至2015年12月收治的82例手术切除的NSCLC组织及69例癌旁组织标本,采用荧光实时定量PCR(QPCR)法检测以上组织中miR-449a/b/c的表达并比较3者在NSCLC组织及癌旁组织中的分布差异,Pearson相关分析NSCLC组织中miR-449a、miR-449b和miR-449c表达的相关性,分析NSCLC组织中miR-449a/b/c表达与临床病理特征(性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学类型和淋巴结转移)的关系,同时根据随访数据比较不同miR-449a/b/c表达患者的预后情况。结果 QPCR结果显示,NSCLC组织中miR-449a、miR-449b和miR-449c的平均表达量依次为0.210±0.028、0.359±0.031和0.133±0.020,均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);NSCLC组织中miR-449a、miR-449b和miR-449c的表达均呈正相关,相关系数r_(miR-449a/b)、r_(miR-449a/c)和r_(miR-449b/c)分别为0.246、0.390和0.331(P<0.05);NSCLC组织中miR-449a/b/c表达均与TNM分期有关,miR-449a和miR-449c表达与肿瘤大小有关。全组中位总生存期(OS)为12.4个月,其中miR-449a低表达组和高表达组的中位OS分别为11.2个月和13.5个月(P>0.05),miR-449b低表达组和高表达组的中位OS分别为9.6个月和14.2个月(P<0.05),miR-449c低表达组和高表达组的中位OS分别为11.7个月和13.7个月(P>0.05)。结论miR-449a/b/c在NSCLC组织中表达降低,且均与TNM分期有关,miR-449b表达与预后有关,可能与NSCLC发生、发展有关,对NSCLC诊断及病情评估有一定价值。

血清miR-449a、PPAR-γ水平与ACI静脉溶栓患者预后的相关性分析

目的探究血清miR-449a、PPAR-γ水平与急性脑梗死(ACI)静脉溶栓患者预后的相关性。方法选取2016年1月至2019年6月于朝阳市第二医院神经内科收治的ACI患者149例为研究对象,根据发病3个月时mRS评分将患者分为预后不良组41例和预后良好组108例。收集两组患者血清学指标,荧光定量PCR技术检测血清miR-499a相对表达量,利用酶联免疫吸附法检测血清PPAR-γ水平。利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清PPAR-γ、miR-499a对ACI静脉溶栓患者预后不良的预测价值,多因素Logistic回归分析影响ACI患者静脉溶栓后预后不良的危险因素。结果预后良好组和预后不良组从发病至静脉溶栓时间、溶栓前NIHSS评分差异有统计学意义(P<0.05);与溶栓前相比,溶栓后血清miR-449a水平升高,PPAR-γ水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组患者血清miR-449a水平降低,PPAR-γ水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC结果显示,血清miR-449a、PPAR-γ诊断ACI患者静脉溶栓预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.829、0.773,二者联合诊断ACI患者预后不良的AUC为0.886,灵敏度为78.05%,特异度为91.67%。多因素Logistic回归分析,结果显示发病至静脉溶栓时间≧3 h、溶栓前NIHSS评分>10分、miR-449a水平≤0.930、PPAR-γ水平>38.177 pg·mL;是影响ACI静脉溶栓患者预后不良的独立危险因素。结论ACI静脉溶栓后预后不良组患者血清miR-449a水平较低、PPAR-γ水平较高,是影响ACI静脉溶栓患者预后不良的独立危险因素。

miR-449a对上皮后囊混浊晶状体上皮细胞增殖、迁移及间质转化的影响及机制

目的探讨miR-449a对后囊混浊晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转化的影响及机制。方法常规培养后囊混浊组织晶状体上皮细胞(PCO-LECs)及正常附着组织晶状体上皮细胞(normal-LECs),分别用qRTPCR法、酶联免疫吸附法检测细胞内miR-449a及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、纤黏蛋白(fibronectin)表达。向PCOLECs中转染miR-449a特异性的mimics(mimics组)及scrambled序列(miR-NC组),分别用qRT-PCR、酶联免疫吸附法检测细胞内miR-449a及相关蛋白质表达,用MTT法检测细胞增殖活力,用Transwell法检测细胞迁移能力,用双荧光素酶实验验证miR-449a与c-Met、c-Myc的靶向关系。结果与normal-LECs比较,PCO-LECs中miR-449a、E-cadherin低表达,fibronectin高表达(P均<0. 05)。与miR-NC组比较,mimics组miR-449a高表达(P <0. 05),细胞增殖活力、迁移能力低(P均<0. 05),E-cadherin高表达(P均<0. 05),fibronectin低表达(P均<0. 05)。双荧光素酶实验结果表明miR-449a具有潜在靶向抑制c-Met、c-Myc 3'UTR端的能力。结论 miR-449a可抑制后囊混浊晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转化,其作用机制可能与靶向抑制c-Myc、c-Met表达有关。

来氟米特通过调节miR-449a在肺纤维化中的机制研究

目的探究来氟米特(leflunomide,LEF)通过调节微小RNA(microRNA,miR)-449a在肺纤维化中的机制研究。方法将人肺成纤维细胞MRC-5分为6组,即对照组、LEF组、LEF+mimic组、mimic组、LEF+inhibitor组和inhibitor组。通过质粒转染miR-449a mimic或inhibitor来过表达或沉默miR-449a,在5 mg/L LEF的条件下培养48 h。分别通过CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞活力、细胞增殖能力和凋亡率。使用免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)胶质蛋白I(collagen I,col I)。分别使用qPCR和Western blot检测miRNA和蛋白的水平。结果 mimic组miR-449a水平显著高于对照组(P<0.05)。LEF组和inhibitor组的miR-449a水平显著低于对照组(P<0.05)。LEF+mimic组的miR-449a的表达水平显著高于LEF组,LEF+inhibitor组的miR-449a水平显著低于LEF组(P<0.05)。LEF组和inhibitor组的细胞活力和细胞增殖能力显著高于对照组(P<0.05)。mimic组的细胞活力和细胞增殖能力显著低于对照组(P<0.05)。LEF+mimic组的细胞活力和细胞增殖能力显著低于LEF组而LEF+inhibitor组的细胞活力显著高于LEF组(P<0.05)。LEF组和inhibitor组的细胞凋亡率低于对照组(P<0.05),mimic组的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。LEF+mimic组的细胞凋亡率显著高于LEF组而LEF+inhibitor组的凋亡率显著低于LEF组(P<0.05)。LEF组和inhibitor组的α-SMA和Col I蛋白的荧光强度显著高于对照组(P<0.05),mimic组的相对荧光强度低于对照组(P<0.05)。LEF+mimic组的α-SMA和Col I蛋白相对荧光强度显著低于LEF组,LEF+inhibitor组的α-SMA和Col I蛋白相对荧光强度显著高于LEF组(P<0.05)。LEF组和inhibitor组的p-JNK/JNK水平高于对照组(P<0.05),mimic组的p-JNK/JNK水平显著低于对照组(P<0.05),LEF+mimic组中p-JNK/JNK水平显著低于LEF组而LEF+inhibitor组的p-JNK/JNK水平显著高于LEF组(P<0.05)。结论 LEF可能通过抑制肺成纤维细胞中miR-449a的表达激活JNK途径,从而诱导成纤维细胞的活化和增殖,抑制其凋亡,从而引起肺纤维化。

微小RNA-449在肿瘤中的作用及其调控机制

超过50％的微小RNA （miRNA）定位于肿瘤相关的基因组扩增区域或脆性位点,可具有癌基因或抑癌基因的功能.近年来研究显示,在人类胃癌、肺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中miR-449表达降低,被认为是一个抑癌miRNA.miR-449表达异常可能与肿瘤的发生和发展过程密切相关,研究其功能及调控机制,可为肿瘤诊断、治疗和预后判断提供重要线索.

艾司氯胺酮对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制实验研究

目的:探讨艾司氯胺酮对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:收集26例肝癌患者的癌组织和癌旁组织。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌组织和细胞微小RNA(miR)-449b-5p和转化生长因子-β诱导因子同源盒2(TGIF2)mRNA表达。选取上述基因变化最显著的细胞进行后续实验。将肝癌SK-Hep-1细胞分为对照组(正常培养)、艾司氯胺酮-L组(1 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H组(2 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组(转染inhibitor NC+2 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H+miR-449b-5p inhibitor组(转染miR-449b-5p inhibitor+2 mmol/L艾司氯胺酮处理)。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞中肿瘤增殖细胞核抗原(Ki-67)、半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、TGIF2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR-449b-5p和TGIF2的靶向关系。结果:肝癌组织和细胞TGIF2 mRNA表达水平升高,miR-449b-5p表达水平降低(均P<0.05)。与对照组比较,艾司氯胺酮-L组、艾司氯胺酮-H组以及艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组SK-Hep-1细胞中miR-449b-5p表达水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,TGIF2 mRNA表达水平、OD_(450)值(24、48 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki-67、MMP-9、VEGF-A、TGIF2蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组比较,艾司氯胺酮-H+miR-449b-5p inhibitor组SK-Hep-1细胞miR-449b-5p表达水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,TGIF2 mRNA表达水平、OD_(450)值(24、48 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki-67、MMP-9、VEGF-A、TGIF2蛋白表达水平升高(均P<0.05)。miR-449b-5p mimic+TGIF2-WT组荧光素酶活性低于miR-NC+TGIF2-WT组(P<0.05)。结论:艾司氯胺酮通过上调miR-449b-5p/TGIF2轴抑制肝癌细胞的恶性生物学行为。

微小RNA-449在甲状腺乳头状癌组织的表达及对肿瘤增殖和凋亡的影响

目的检测甲状腺乳头状癌（PTC）组织中微小RNA（miRNA，miR）-449的表达水平，观察miR-449对PTC细胞株TPC1生物学行为的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测PTC及癌旁组织中miR-449的表达。细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测miR-449对TPC1细胞增殖影响。流式细胞术检测miR-449对TPC1细胞凋亡的影响。结果miR-449在PTC组织中的相对表达水平（0.665 5±0.049 8）显著低于癌旁组织（1.405 0±0.079 4），随着TNM分期的增加，miR-449表达水平明显降低（P=0.036）。CCK-8实验显示与空白对照（NC）及miR-scramble组比较，miR-449组细胞增殖能力明显受到抑制（P=0.000）。流式细胞术结果显示miR-449组细胞凋亡[（15.13±0.52）%]明显增加（P=0.009）。结论miR-449对PTC细胞生物学行为有重要影响，其在PTC发生发展过程中起抑癌基因的作用。

微小RNA-449a靶向B细胞淋巴瘤／白血病-2抑制神经母细胞瘤细胞增殖

目的检测微小RNA（miRNA，miR）449a对神经母细胞瘤细胞株SK—N—SH增殖的影响并探讨其作用机制。方法人工设计合成miR449a模拟物，构建上调miR449a表达的细胞株SK-N-SH；实时定量反转录聚合酶链反应（1iT-qPCR）检测转染后miR-449a的表达水平；转染48h后采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞24、48、72h的增殖，膜联蛋白V（Annexin-V）／碘化丙锭（PI）法检测细胞凋亡；利用生物信息学方法预测miR-449a的候选靶基因。结果转染miR-449amimic的细胞中miR449a的表达水平升高3．5倍；过表达miR-49a后细胞生长速度较对照组细胞明显减慢；过表达miR449a后细胞凋亡明显增加，细胞总凋亡比例为（21．94±3．37）％，而对照组细胞的总凋亡比例为（11．01±3．51）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）；通过靶基因预测软件分析，抗凋亡基因B细胞淋巴瘤／自血病-2（bcl-2）是miR-449a的靶基因，过表达miR-449amimic后，内源性bcl-2蛋白的表达水平显著下降。结论miR449a可能通过调控bcl-2的转录水平抑制神经母细胞瘤细胞增殖，促进凋亡。

银丹心脑通软胶囊联合双联抗血小板方案治疗急性脑梗死的临床研究

目的探讨银丹心脑通软胶囊联合双联抗血小板药在急性脑梗死介入术后的临床效果。方法选取2020年1月—2022年1月北京大学首钢医院收治的100例急性脑梗死患者,按随机数字表法分为对照组(50例)和治疗组(50例)。对照组口服阿司匹林肠溶片,100mg/次,1次/d,同时口服硫酸氢氯吡格雷片,75mg/次,1次/d。治疗组患者在对照组基础上口服银丹心脑通软胶囊,3粒/次,3次/d。两组患者均治疗2周。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)和Barthel指数评分及过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)、miR-449a和miR-19b-3p水平。结果治疗后,治疗组患者总有效率较对照组明显升高(96.00%vs84.00%,P<0.05)。治疗后,两组患者NIHSS评分明显低于治疗前,而Barthel指数评分明显高于治疗前(P<0.05),且治疗组评分明显好于对照组(P<0.05)。治疗后,两组LPO和MDA水平及miR-19b-3p表达水平明显低于治疗前(P<0.05),而miR-449a表达水平明显高于治疗前(P<0.05),且治疗组患者这些指标水平明显好于对照组(P<0.05)。结论银丹心脑通软胶囊联合双联抗血小板方案在急性脑梗死介入术后中具有较高疗效和安全性,有助于调节miR-449a、miR-19b-3p表达,减轻患者氧化应激水平,减轻神经功能缺损及提高日常生活能力。