结肠癌组织微小RNA-452和微小RNA-762表达及与患者预后的关系

目的探究结肠癌组织微小RNA(miR)-452、miR-762表达及与患者预后的关系。方法选取2019年4月至2020年4月承德医学院附属医院收治的90例结肠癌患者作为研究对象,术中取肿瘤组织及癌旁组织,并根据3年随访预后情况分为预后良好组与预后不良组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测组织中miR-452、miR-762的表达。Pearson相关分析法分析miR-452与miR-762表达的相关性。多因素Logistic回归法分析结肠癌患者预后的影响因素。受试者工作特征曲线分析结肠癌患者肿瘤组织中miR-452、miR-762表达水平对预后的预测价值。结果结肠癌患者肿瘤组织中miR-452、miR-762表达水平均高于癌旁组织[(2.23±0.24)比(1.00±0.00)、(1.86±0.20)比(1.01±0.13)],差异均有统计学意义(t=48.620、33.805,均P<0.001)。miR-452、miR-762表达水平与患者肿瘤分化程度、TNM分期有关(均P<0.05)。随访3年预后不良的发生率为27.8%(25/90)。预后不良组患者肿瘤组织中miR-452、miR-762表达水平均高于预后良好组[(2.56±0.30)比(2.10±0.22)、(2.15±0.30)比(1.75±0.16)](t=7.997、8.181,均P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,结肠癌患者肿瘤组织中miR-452与miR-762表达水平呈正相关(r=0.560,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-452、miR-762均是结肠癌患者发生不良预后的危险因素(均P<0.05)。miR-452、miR-762联合预测结肠癌患者预后的受试者工作特征曲线下面积优于miR-452单独预测(Z=2.745,P=0.006)。结论结肠癌患者肿瘤组织中miR-452、miR-762表达上调,其与结肠癌患者预后有关,可能是结肠癌预后评估的生物标志物。

微小RNA-452-5p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

目的探讨微小RNA-452-5p(miR-452-5p)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-452-5p在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-361、HCC70和正常乳腺细胞株MCF-10A中的表达水平,选取表达水平最低的细胞株进行后续实验。脂质体转染法将miR-452-5p mimic及阴性对照转染至人乳腺癌MDA-MB-231细胞,并设空白对照组。QPCR检测转染效果,EdU增殖实验和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3和procaspase-9的表达水平,生物信息学软件TargetScan预测miR-452-5p与血管内皮生长因子A(VEGF-A)的靶向结合位点,Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。结果miR-452-5p在乳腺癌细胞株MDA-MB-231(0.26±0.02)、MCF-7(0.35±0.04)、MDA-MB-361(0.49±0.05)和HCC70(0.67±0.07)中的表达量均明显低于正常乳腺细胞株MCF-10A(1.00±0.11),差异有统计学意义(P<0.05),选取表达量最低的MDA-MB-231细胞进行后续实验。QPCR检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组MDA-MB-231细胞中miR-452-5p的表达量上调(0.95±0.09 vs.4.28±0.44,P<0.05),而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。EdU检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞增殖率降低(P<0.05),而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。克隆形成实验显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞克隆形成数目均减少[(77.65±7.84)个vs.(53.22±6.16)个,P<0.05)],空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞凋亡率升高[(2.21±0.46)%vs.(20.61±3.09)%,P<0.05)],而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组procaspase-3(1.20±0.13 vs.0.49±0.05)和procaspase-9(1.49±0.20 vs.0.38±0.04)蛋白表达下调(P<0.05),空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞中VEGF-A蛋白表达下降(P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示,VEGF-A-Wt组与阴性对照比较,miR-452-5p相对荧光素酶活性降低(P<0.05),而VEGF-A-Mut组和阴性对照miR-452-5p相对荧光素酶活性无显著改变(P>0.05)。结论miR-452-5p在乳腺癌细胞株中呈低表达,miR-452-5p通过调控VEGF-A的表达影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡。

微小RNA-452通过Wnt/β-连环蛋白对胃癌细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-452对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及分子机制.方法收集我院经手术切除的胃癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-452 mRNA表达水平;培养胃癌细胞SGC-7901,通过转染miR-452模型物miR-452(miR-452组),采用Transwell分析细胞的EMT;采用生物信息学软件和双荧光素酶报告基因分析miR-452的靶基因变化;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析EMT相关的标志物水平以及miR-452介导的信号通路.结果与癌旁组织(1.10±0.20)比较,胃癌组织中miR-452 mRNA表达水平(3.07±0.31)显著增加,差异有统计学意义(t=3.912,P<0.05).与对照组细胞(75.19±9.11)比较,miR-452组细胞迁移能力(171.34±14.56)显著增加,差异均有统计学意义(t=3.109,P<0.05).miR-452组细胞侵袭数量生物信息学和双荧光素酶报告基因显示糖原合成酶激酶3β(GSK3β)是miR-452的靶基因.与对照组细胞[(1.12±0.18)、(1.10±0.22)]比较,miR-452组细胞GSK3β表达水平(0.22±0.10)和磷酸化β-连环蛋白(p-β-catenin)蛋白水平(0.25±0.10)显著下调,差异有统计学意义(t=4.011、3.994,P<0.05).与对照组细胞[(0.51±0.10)、(0.22±0.09)、(0.19±0.10)]比较,miR-452组细胞EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)水平(0.10±0.05)显著下调,N-cadherin和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平[(0.59±0.12)、(0.55±0.11)]显著增加,差异有统计学意义(t=2.812、2.981、2.911,P<0.05).结论miR-452可靶向下调GSK3β水平,激活Wnt/β-catenin信号通路,促进胃癌细胞EMT发生.

miR-452、LncRNA KCNQ1OT1在肝癌组织中的表达情况及与预后间关系分析

目的探讨微小RNA(miR)-452、长链非编码RNA KCNQ1OT1(LncRNA KCNQ1OT1)在肝癌患者瘤组织中的表达情况及预后的关系。方法选取2017年9月至2021年6月邯郸市第一医院收治的肝癌患者92例作为研究对象。对比患者肝癌组织及癌旁组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平,随访至2022年2月,统计患者预后生存情况,Cox比例风险回归模型分析预后的影响因素,绘制不同miR-452、LncRNA KCNQ1OT1表达患者Kaplan-Meier生存曲线。结果肝癌组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);患者1年、3年生存率分别为64.37%(56/87)、42.53%(37/87);校正原发疾病、临床分期、肿瘤最大径、肿瘤数量、分化程度、Child Pugh分级、合并肝硬化、血管侵犯后,miR-452及LncRNA KCNQ1OT1表达仍是肝癌患者预后的独立影响因素(P<0.05);拟合模型:h(t,X)=h0(t)exp(1.188X1+1.326X2),X1为miR-452,X2为LncRNA KCNQ1OT1,构建个体PI方程:PI=1.188X1+1.326X2;不同miR-452、LncRNA KCNQ1OT1表达患者生存曲线率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌患者组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平均呈异常高表达,且高表达情况与3年内高病死风险有关。

食管癌组织miR-452-5p、SOX7表达及与病理参数和预后关系

目的 研究食管癌组织中微小RNA-452-5p(miR-452-5p)及SRY盒相关基因7 (SOX7)表达及与临床病理参数及预后的关系。方法 选取2018年1月—2019年1月四川省乐山市人民医院肿瘤血液科诊治的食管癌患者103例为研究对象。应用实时荧光定量PCR检测癌灶及癌旁组织中miR-452-5p及SOX7 mRNA的表达。Pearson相关分析miR-452-5p与SOX7 mRNA表达的相关性。分析癌组织中miR-452-5p及SOX7 mRNA的表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier分析miR-452-5p及SOX7 mRNA表达对食管癌患者生存预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响食管癌预后的危险因素。结果 癌组织中miR-452-5p表达高于癌旁组织(t=52.041,P<0.001),SOX7 mRNA表达低于癌旁组织(t=27.111,P<0.001)。Pearson相关分析显示,miR-452-5p与SOX7 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.504,P<0.001)。肿瘤Ⅲ期、低分化、伴淋巴结转移癌组织中miR-452-5p表达明显高于Ⅰ~Ⅱ期、高中分化、无淋巴结转移者(t=33.232、18.003、35.236,P均<0.001),而SOX7 mRNA表达低于肿瘤Ⅰ~Ⅱ期、高中分化及无淋巴结转移患者(t=21.805、15.368、33.543,P均<0.001)。miR-452-5p高表达组患者中位生存时间低于低表达组患者(26.15 vs.31.22个月,χ^(2)=3.967,P=0.046),3年总体生存率低于低表达组患者(24.53%vs. 60.00%,χ^(2)=5.093,P=0.024);SOX7 mRNA低表达组患者中位生存时间低于高表达组患者(27.47 vs. 32.40个月,χ^(2)=3.941,P=0.047),3年总体生存率低于高表达组患者(23.53%vs. 59.62%,χ^(2)=5.285,P=0.022)。肿瘤分期Ⅲ期、分化程度低、伴淋巴结转移、miR-452-5p高表达是影响食管癌预后的独立危险因素[HR(95%CI)=1.520(1.176~1.966)、1.405(1.139~1.733)、1.929(1.229~3.028)、1.974(1.250~3.116)],SOX7 mRNA高表达为其独立保护因素[HR(95%CI)=0.575(0.397~0.832)]。结论 食管癌组织中miR-452-5p表达升高,SOX7 mRNA表达降低,两者与肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移有关,是新的食管癌预后相关肿瘤标志物。

miR-602、miR-452表达与肝癌术后复发转移及预后的关系研究

目的探究微小RNA-602(mi R-602)、微小RNA-452(mi R-452)表达与肝癌术后复发转移及预后的关系。方法选取2014年12月~2018年12月在我院确诊并行手术切除的原发性肝癌患者72例,术中收集癌组织及癌旁正常组织,采用RT-PCR法检测其mi R-602、mi R-452相对表达量,比较未发生和发生复发转移患者mi R-602、mi R-452相对表达量,Spearman检验分析mi R-602、mi R-452与肝癌术后复发转移的相关性,ROC曲线分析mi R-602、mi R-452预测肝癌术后复发转移的价值,COX回归模型及Kaplan-Meier法分析mi R-602、mi R-452表达与肝癌术后预后的关系。结果mi R-602、mi R-452在肝癌组织中的相对表达量较癌旁正常组织显著增加[(3.76±1.20)vs(0.76±0.16),t=21.027,P<0.001(;3.15±0.98)vs(0.45±0.07),t=23.318,P<0.001];发生复发转移患者mi R-602、mi R-452相对表达量较未发生复发转移患者显著增加[(4.12±1.47)vs(1.02±0.78),t=-10.978,P<0.001(;3.77±1.15)vs(0.76±0.64),t=-13.422,P<0.001];miR-602、miR-452均与肝癌术后复发转移呈正相关(r=0.501、0.548,P<0.001);mi R-602、mi R-452联合预测肝癌术后复发转移的AUC为0.900,敏感性为92.35%,特异性为88.10%;临床分期及mi R-602、mi R-452表达上调是肝癌术后预后的危险因素(P<0.05);mi R-602相对表达量>3.51患者肝癌术后2年病死率显著高于mi R-602相对表达量≤3.51患者[31.23%vs 7.02%,Log-rank(χ^(2))=2.436,P=0.038];miR-452相对表达量>2.01患者肝癌术后2年病死率显著高于mi R-452相对表达量≤2.01患者[29.65%vs 10.15%,Log-rank(χ^(2))=3.321,P=0.017]。结论mi R-602、mi R-452在肝癌组织中呈高表达,与肝癌术后复发转移及预后关系密切,有望成为肝癌术后复发转移、不良预后评估的候选临床标志物。

miR-452-5p对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响及作用靶点预测

目的观察miR-452-5p对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并预测其作用靶点。方法将肝癌SMMC7721细胞分为miR模拟组、对照1组、miR抑制组、对照2组;miR模拟组转染miR-452-5p mimic,对照1组转染miR-452-5p mimicNC,miR抑制组转染miR-452-5p inhibitor,对照2组转染miR-452-5p inhibitorNC;转染24 h后,采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测肝癌细胞迁移能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。miRNA靶基因预测软件得出EPB41L33'UTR含有miR-452-5p的结合位点,利用双荧光素酶报告实验验证miR-452-5p与EPB41L33'UTR的结合;采用Westernblotting法检测miR模拟组、对照1组、miR抑制组、对照2组细胞中的EPB41L3蛋白。结果miR模拟组细胞迁移率及Transwell实验迁移细胞数、侵袭细胞数高于对照1组(P均<0.05)。miR抑制组细胞迁移率及Transwell实验迁移细胞数、侵袭细胞数低于对照2组(P均<0.05)。双荧光素酶报告实验结果提示miR-452-5p可以直接结合EPB41L33'UTR,即EPB41L3是miR-452-5p的直接靶基因。miR模拟组细胞中EPB41L3蛋白表达低于对照1组,miR抑制组细胞中EPB41L3蛋白表达高于对照2组(P均<0.01)。结论miR-452-5p高表达可提高肝癌细胞的迁移侵袭能力,作用机制可能与靶向调控EPB41L3有关。