微小RNA-454、微小RNA-132、液泡膜-ATP酶表达与结肠癌临床病理特征关联性分析

目的 探讨组织微小RNA(miR)-454、miR-132、液泡膜-ATP酶(V-ATPase)表达与结肠癌病人临床病理特征关联性。方法 选取2011年9月至2014年11月新乡医学院第一附属医院行手术切除的96例结肠癌组织标本、96例癌旁正常结肠组织标本、82例良性结肠病变标本为研究对象。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定标本中miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达,分析miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达与结肠癌病人一般资料、临床病理参数的关系,随访5年,统计miR-454、miR-132、V-ATPase高表达、低表达病人3年、5年生存率。结果 结肠癌组织标本中miR-454表达69.86±7.29与V-ATPase mRNA表达5.42±0.41高于良性结肠病变组织10.74±2.03、2.79±0.38、癌旁正常结肠组织标本1.28±0.74、1.96±0.32,miR-132水平表达1.46±0.25低于良性结肠病变组织3.68±0.73、癌旁正常结肠组织标本4.59±1.24(P<0.05);中低分化、Ducks分期C~D期、有淋巴结转移结肠癌病人miR-454与V-ATPase mRNA表达高于高分化、Ducks分期为A~B期、无淋巴结转移病人,miR-132表达低于高分化、Ducks分期为A~B期、无淋巴结转移病人(P<0.05);miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关,miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关(P<0.05);miR-454、V-ATPase mRNA高表达病人3年(9.23%、33.85%)、5年生存率(44.00%、28.00%)低于低表达(70.97%、61.29%)、(69.57%、55.10%)病人,miR-132高表达病人3年、5年生存率(70.59%、58.82%)高于低表达病人(48.39%、33.87%)(P<0.05)。结论 miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关,miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关,可为结肠癌恶性化生物学行为特征、病理级别、预后判断提供客观依据。

微小RNA-454通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/蛋白激酶B轴对食管癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-454对食管癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法将转染anti-miR-454、anti-miR-NC的ECA109细胞(中国科学院上海细胞库)设为anti-miR-454组、anti-miR-NC组。噻唑蓝(MTT)法检测顺铂对ECA109细胞增殖抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50);蛋白质印迹法(Western blot)实验检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70S6K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。多样本计量资料比较采用单因素方差分析,两两样本比较采用SNK-q检验。结果anti-miR-454组IC50值低于anti-miR-NC组[(0.41±0.05)μg/ml比(0.82±0.08)μg/ml,P<0.01];MTT实验显示,细胞中miR-454下调后,不同顺铂浓度对ECA109细胞增殖抑制率显著升高;Western blot实验显示,细胞中miR-454下调后,PI3K、mTOR、p70S6K蛋白相对表达量,p-Akt/Akt显著降低。结论下调miR-454表达可增强食管癌ECA109细胞顺铂敏感性,推测与其靶向上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达、抑制Akt信号通路有关。

miR-454-3p对大鼠背根神经节细胞轴突生长能力的影响及其机制

目的探讨miR-454-3p对大鼠背根神经节细胞轴突生长能力的影响及其机制。方法分离培养大鼠背根神经节细胞,随机分为miR-454-3p过表达组和阴性对照组,采用Lipofectmin2000分别转染miR-454-3p模拟物及其阴性对照序列,转染72 h采用免疫荧光技术测量背根神经节细胞轴突长度。应用Target Scan数据库预测miR-454-3p的靶基因可能为生长相关蛋白43(GAP-43),采用Western bloting法检测两组GAP-43蛋白相对表达量。结果 miR-454-3p过表达组与阴性对照组背根神经节细胞轴突长度分别为(52.73±13.26)、(172.41±28.17)μm,GAP-43蛋白相对表达量分别为0.73±0.09、1.00±0.12;两组比较P均<0.05。结论 miR-454-3p表达升高可抑制大鼠背根神经节细胞轴突生长,其机制可与降低GAP-43表达有关。

非小细胞肺癌组织中miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平及临床意义

目的分析非小细胞肺癌组织中微小RNA-454-3p(miR-454-3p)、胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白1(CPEB1)信使RNA(mRNA)表达水平与临床病理特征及预后的相关性。方法选取2014年4月—2016年3月在中国科学院合肥肿瘤医院确诊为非小细胞肺癌患者96例,术中取其癌组织设为肺癌组,癌旁正常组织为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测2组miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平;以二者表达水平均值为界,再分为miR-454-3p低表达亚组、高表达亚组和CPEB1 mRNA低表达亚组、高表达亚组,分析癌组织中miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平与患者临床病理特征及预后的关系;Logistic回归分析影响非小细胞肺癌患者预后的因素。结果肺癌组miR-454-3p表达水平高于对照组,CPEB1 mRNA表达水平低于对照组(t/P=14.130/0.000、12.541/0.000)。患者癌组织miR-454-3p、CPEB1 mRNA表达水平与性别、年龄、吸烟史、分化程度无关(P>0.05),与肿瘤直径、病理类型、淋巴结远处转移、TNM分期有关(miR-454-3p:χ^(2)/P=7.102/0.008、13.577/0.000、9.687/0.002、14.291/0.000;CPEB1 mRNA:χ^(2)/P=10.816/0.001、18.288/0.000、14.122/0.000、16.239/0.000);癌组织miR-454-3p与CPEB1 mRNA表达水平呈负相关(r/P=-0.524/0.000)。miR-454-3p高表达患者5年生存率低于miR-454-3p低表达患者(χ^(2)/P=7.012/0.008),CPEB1 mRNA高表达患者5年生存率高于CPEB1 mRNA低表达患者(χ^(2)/P=4.112/0.043);miR-454-3p高表达、淋巴结远处转移是影响非小细胞肺癌患者死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=2.255(1.725~2.948)、1.987(1.428~2.765)],CPEB1 mRNA高表达是影响患者死亡的保护因素[OR(95%CI)=0.677(0.518~0.886)]。结论非小细胞肺癌组织中miR-454-3p呈高表达,CPEB1 mRNA呈低表达,且二者均与患者肿瘤直径、病理类型、淋巴结远处转移、TNM分期及预后有关。