微小RNA-485-5p通过靶基因DHRS3调控骨髓间充质干细胞增殖和分化

目的研究miR-485-5p和脱氢酶/还原酶3(DHRS3)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和分化中的表达和作用。方法将细胞分为第1转染组、第2转染组、第3转染组和第4转染组,分别用anti-miR-con、anti-miR-485-5p、si-con和si-DHRS3分别转染/共转染BMSCs细胞。转染9 d后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,实时荧光定量-聚合酶链式反应检测各组细胞中miR-485-5p和DHRS3 mRNA的表达,Western blot检测DHRS3、成骨分化蛋白标志物核心结合蛋白因子2(RUNX2)、骨钙蛋白(OCN)和骨形态发生蛋白2(BMP2),增殖蛋白周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),Notch受体1(Notch 1)、Notch配体(Jagged1)和Split多毛增强子1(Hes1)蛋白的表达。结果第1转染组、第2转染组、第3转染组和第4转染组的细胞存活率分别为(100.58±10.09)%,(132.50±11.45)%,(135.62±12.66)%和(110.96±9.58)%;DHR3蛋白相对表达量分别为0.31±0.03,0.59±0.05,0.62±0.06和0.43±0.05;RUNX2蛋白相对表达量分别为0.33±0.04,0.49±0.03,0.52±0.06和0.37±0.07;OCN蛋白相对表达量分别为0.35±0.04,0.56±0.06,0.62±0.04和0.39±0.05;BMP2蛋白相对表达量分别为0.32±0.04,0.65±0.06,0.75±0.07和0.41±0.05;和Notch1蛋白相对表达量分别为0.45±0.04,0.74±0.07,0.77±0.06和0.55±0.05。第2转染组与第1转染组比较、第4转染组与第3转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-485-5p靶向DHRS3通过Notch信号调控BMSCs细胞增殖和成骨分化。

miR-485-5p靶向RAPTOR影响口腔鳞状细胞癌迁移、侵袭和增殖

目的:探讨mTOR调节相关蛋白(regulatory-associated protein of mTOR,RAPTOR)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移、侵袭和增殖能力的影响。方法:利用TCGA生物信息数据库查询在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织与癌旁组织中差异表达的mRNA。Western blot检测RAPTOR在人口腔上皮细胞HOEC和OSCC细胞系中的表达。利用伤口愈合实验、Transwell实验、EdU实验检测各组细胞迁移、侵袭及增殖能力。生物信息学网站预测与RAPTOR靶向结合的微小RNA(microRNA,miR)。功能学实验验证miR-485-5p是否可以靶向RAPTOR影响OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖。结果:RAPTOR在HNSCC组织中较癌旁组织表达增高。伤口愈合、Transwell和EdU实验结果示,RAPTOR有促进OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力。miR-485-5p能与RAPTOR靶向结合,且miR-485-5p上调能逆转RAPTOR促进CAL27细胞迁移、侵袭和增殖能力。结论:miR-485-5p通过靶向RAPTOR抑制OSCC细胞迁移、侵袭和增殖能力。

血清miR-485和miR-30表达对糖尿病肾病患者的诊断价值

目的探讨血清微小RNA-485(miR-485)和miR-30的表达对糖尿病肾病(DN)患者的诊断价值。方法选取2022年1月至2023年1月我院收治的96例DN患者为DN组,同时期本院收治的96例单纯糖尿病患者为糖尿病组,同时期在本院进行体检的96例健康志愿者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定3组人员血清miR-485、miR-30表达水平;采用Logistic模型分析DN发生的影响因素,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-485、miR-30水平对DN的诊断价值。结果对照组、糖尿病组、DN组血清miR-485与miR-30表达水平均依次降低(P<0.05)。DN组患者糖尿病病程、空腹血糖、餐后2 h血糖、血肌酐、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均高于糖尿病组,高密度脂蛋白胆固醇水平低于糖尿病组,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病病程、餐后2 h血糖、血肌酐、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇均是导致DN发生的危险因素(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇、miR-485、miR-30表达水平均是保护因素(P<0.05)。血清miR-485、miR-30联合诊断DN的ROC曲线下面积(AUC)为0.914,高于二者单独诊断的AUC(Z=2.168,P=0.030;Z=2.882,P=0.004)。结论DN患者血清miR-485、miR-30表达均下调,二者均是DN发生的保护因素,可作为诊断DN的临床指标,且二者联合诊断的效果更好。

散发性结直肠癌患者血清LncRNA GACAT3 miR-485-5p表达及其临床意义

目的探讨散发性结直肠癌患者血清长链非编码RNA GACAT3(LncRNA GACAT3)、微小RNA-485-5p(miR-485-5p)的表达及其临床意义。方法对62例散发性结直肠癌患者(研究组)、53名健康志愿者(对照组)采用实时荧光定量聚合酶链反应检测GACAT3、miR-485-5p的表达;采用LncBase网站对GACAT3与miR-485-5p的结合进行预测,并采用Pearson相关分析法分析GACAT3与miR-485-5p的相关性;根据GACAT3与miR-485-5p相对表达量平均值将研究组患者分为GACAT3高表达组(29例)、GACAT3低表达组(33例)和miR-485-5p高表达组(30例)、miR-485-5p低表达组(32例),分析不同临床特征患者GACAT3、miR-485-5p表达情况;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GACAT3、miR-485-5p对散发性结直肠癌的诊断价值;采用Kaplan-Meier曲线分析散发性结直肠癌患者5 a生存情况。结果研究组血清GACAT3相对表达量高于对照组,血清miR-485-5p相对表达量低于对照组(P<0.01)。散发性结直肠癌患者GACAT3与miR-485-5p存在互补结合的核苷酸位点,GACAT3与miR-485-5p呈显著负相关(r=-0.306,P<0.05)。肿瘤不同分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期患者血清GACAT3、miR-485-5p表达情况比较,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。ROC曲线显示,血清GACAT3与miR-485-5p联合诊断散发性结直肠癌的曲线下面积为0.918,95%CI为0.865~0.970,诊断敏感度为0.806,诊断特异度为0.887。GACAT3低表达组平均生存期高于高表达组,miR-485-5p低表达组平均生存期低于高表达组。结论散发性结直肠癌患者血清GACAT3表达上调,miR-485-5p表达下调,二者呈负相关,并可能作为散发性结直肠癌诊断及评估患者预后的重要指标。

miR-485-5p靶向作用于SOX5抑制肝癌细胞Hep3B的活力及侵袭和迁移能力

目的:研究微小RNA-485-5p(miR-485-5p)对肝癌细胞的活力及迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法:以正常肝细胞THLE-3为对照,采用RT-qPCR检测肝癌细胞中性别决定区Y框蛋白5(SOX5)mRNA和miR-485-5p的表达,Western blot检测SOX5、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平,MTT法检测Hep3B细胞的活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,双萤光素酶报告基因系统验证细胞中miR-485-5p与SOX5的调控关系。结果:与对照组相比,在肝癌细胞Hep3B、Huh7和HCCLM3中miR-485-5p的表达水平显著降低(P<0.05),SOX5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);过表达miR-485-5p可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力(P<0.05);miR-485-5p靶向调控SOX5的表达,敲减SOX5的表达也可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力;过表达SOX5可部分逆转过表达miR-485-5p对Hep3B细胞活力及迁移和侵袭能力的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-485-5p通过靶向调控SOX5基因抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力,有望成为肝癌诊断和治疗的潜在分子靶点。

miR-485-5p靶向CKS1B对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的探讨微小RNA(miR)-485-5p对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-485-5p在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和人鼻咽癌细胞系CNE2中的表达情况;将体外培养的CNE2细胞分为Con组(正常培养)、NC组(转染mimics阴性对照)和mimics组(转染miR-485-5p mimics),实时荧光定量PCR测定miR-485-5p表达,噻唑蓝法、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移、凋亡,免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和CDC28蛋白激酶调节亚基(CKS)1B蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-485-5p和CKS1B靶向关系。结果与NP69细胞比较,miR-485-5p在CNE2细胞中的表达水平明显降低(P<0.05)。与Con组、NC组比较,mimics组细胞中miR-485-5p表达水平、细胞凋亡率和E-钙黏蛋白表达水平均明显升高,而增殖活力、侵袭与迁移能力和N-钙黏蛋白、波形蛋白、CKS1B蛋白表达均显著降低(P<0.05)。miR-485-5p可与CKS1B靶向结合。结论miR-485-5p可能通过靶向调控CKS1B表达抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖、迁移、侵袭与上皮间质转化,并促进CNE2细胞凋亡。

血清miR-18a、miR-485-5p对HPV阳性宫颈癌的诊断价值

目的 探讨宫颈癌患者伴人乳头瘤病毒(HPV)与单纯宫颈癌患者血清微小RNA(miR)-18a, miR-485-5p表达差异,分析二指标对HPV阳性宫颈癌的诊断价值。方法 选取2020年1月-2021年1月黄河三门峡医院收治的91例HPV阳性宫颈癌患者为HPV阳性宫颈癌组,62例HPV阳性非宫颈癌妇女为HPV阳性组,57名体检健康妇女为对照组,采用qRT-PCR检测血清miR-18a、miR-485-5p的表达。采用受试者操作特征曲线(ROC)分析血清miR-18a、miR-485-5p对HPV阳性宫颈癌的诊断价值。结果 HPV阳性宫颈癌组血清miR-18a表达高于对照组和HPV阳性组,而miR-485-5p表达低于对照组和HPV阳性组(均P<0.05)。血清miR-18a、miR-485-5p表达与HPV阳性宫颈癌患者FIGO分期、间质浸润深度、是否淋巴结转移有关(均P<0.05)。ROC曲线显示,miR-18a、miR-485-5p、联合诊断HPV阳性宫颈癌的AUC分别为0.752、0.802、0.876,灵敏度分别为67.03%、75.82%、83.52%,特异度分别为77.42%、74.19%、83.87%。联合诊断HPV阳性宫颈癌的AUC大于miR-18a、miR-485-5p单独诊断(均P<0.05)。结论 HPV阳性宫颈癌血清miR-18a高表达,miR-485-5p低表达,可作为HPV阳性宫颈癌辅助诊断指标。