微小RNA-488靶向调控HMGN5表达及对肺癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-488(miR-488)对高迁移率族核小体结合域5(HMGN5)的靶向调控作用及非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)和A549细胞的miR-488水平。脂质体法向A549细胞转染miR-488模拟物(过表达组)或阴性对照序列(NC组)并设未转染的细胞为对照组。MTT比色法、Transwell实验和划痕愈合实验体外测定A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力的变化,QPCR和Western blotting检测HMGN5、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-488对HMGN5的靶向调控作用。结果A549细胞的miR-488水平为0.256±0.028,低于BEAS-2B细胞的1.019±0.124(P<0.05);过表达组的miR-488水平为11.229±2.164,高于对照组的1.051±0.162和NC组的1.029±0.116(P<0.05)。与NC组和对照组相比,过表达组A549细胞转染48、72 h的增殖能力下降(P<0.05);过表达组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(25.53±3.75)%和(79.66±9.23)个,低于NC组的(58.56±4.76)%和(172.34±14.67)个及对照组的(54.34±5.65)%和(165.22±11.53)个(P<0.05);miR-488模拟物能降低HMGN5基因3’端非翻译区野生型的荧光素酶活性(P<0.05),但对3’端非翻译区突变型无影响(P>0.05)。与其余两组相比,过表达组的HMGN5、MMP-9和MMP-2水平降低(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-488在NSCLC细胞中低表达,上调该miRNA水平可抑制增殖和迁移侵袭能力并发挥类似抑癌基因的作用,可能与靶向调控HMGN5及抑制MMP-2/MMP-9通路有关,在NSCLC靶向中有一定参考价值。

微小RNA-488靶向6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3基因对前列腺癌细胞增殖与糖酵解的影响

目的 探讨微小RNA（miRNA，miR）-488对前列腺癌细胞株增殖及糖酵解能力的影响及其机制。 方法 实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测miR-488在前列腺癌细胞株的表达。生物信息学、双荧光素酶实验验证miR-488的靶点，转染miR-488模拟物24 h后，以25 μg蛋白行Western blot、Real-time PCR检测6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）的表达。转染miR-488模拟物或同时转染过表达PFKFB3质粒24 h后，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测PC-3、DU145细胞增殖，通过糖摄取及乳酸分泌实验检测糖酵解能力。结果 与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较，miR-488在PC-3、DU145细胞中的表达水平分别为0.26±0.03（P＝0.031）、0.19±0.04（P＝0.021），而在22RV1、LNCaP细胞中的表达差异无统计学意义。上调miR-488表达后，PC-3、DU145细胞的糖摄取率分别为对照组的0.54±0.03（P＝0.042）、0.52±0.01（P＝0.032），乳酸分泌率分别为对照组的0.55±0.02（P＝0.037）、0.61±0.17（P＝0.048），提示糖酵解能力明显下降，细胞增殖能力明显降低。生物信息学及双荧光素酶实验均表明PFKFB3是miR-488的靶点，上调miR-488表达后，PFKFB3 mRNA及蛋白表达均明显降低。同时上调miR-488与PFKFB3表达后，细胞的糖摄取分别为0.79±0.12、0.82±0.11，乳酸分泌分别为对照组的0.77±0.07（P＝0.015）、0.83±0.04（P＝0.026），提示糖酵解能力升高。此外，细胞增殖能力也明显升高。结论 miR-488可通过下调靶蛋白PFKFB3的表达，从而调控前列腺癌细胞的增殖与糖酵解。

妊娠期高血压患者血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平及其对妊娠结局的预测价值

目的 探讨妊娠期高血压(GH)患者血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平及其与疾病严重程度、不良妊娠结局的关系。方法 纳入82例GH患者(GH组)及82例正常妊娠女性,并根据疾病严重程度将GH组患者分为单纯GH组37例、轻度子痫前期组(轻度PE组)28例、重度子痫前期组(重度PE组)17例,又根据妊娠结局将GH组患者分为妊娠结局良好组(良好组)37例和妊娠结局不良组(不良组)45例。比较GH组和对照组患者的临床指标。采用实时荧光定量PCR法检测所有孕妇的血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平,分析血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平与GH疾病严重程度及妊娠结局的关系。采用受试者工作特征曲线分析血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平单独及联合预测GH患者不良妊娠结局的价值。结果 相较于对照组,GH组平均动脉压、舒张压、收缩压、24 h尿蛋白含量,以及血清miR-34a-5p、miR-488-3表达水平升高(P<0.05)。单纯GH组、轻度PE组、重度PE组患者血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平依次升高(P<0.05)。良好组患者血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平低于不良组(P<0.05)。血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平单独及联合预测GH患者不良妊娠结局的曲线下面积分别为0.860、0.808、0.911,联合预测的曲线下面积优于单一指标预测的曲线下面积(P<0.05)。结论 GH患者血清miR-34a-5p、miR-488-3p表达水平升高,二者对GH患者不良妊娠结局均具有较好的预测效能,且联合预测效能更佳。

同型半胱氨酸上调miR-488-3p表达诱导MPC-5小鼠肾小球足细胞凋亡

目的探讨微小RNA-488-3p(miR-488-3p)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法体外培养足细胞分别采用0μmol/L Hcy(对照组)和80μmol/L Hcy(Hcy组)处理48 h,流式细胞术检测足细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和胱天蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测miR-488-3p的表达;用miR-488-3p抑制物(miR-488-3p inhibitor)转染足细胞,检测转染效率和足细胞凋亡水平。结果与对照组相比,Hcy组中足细胞凋亡率、BAX和caspase-3表达水平显著升高,而Bcl2表达则显著降低;且Hcy显著促进足细胞中miR-488-3p的表达。转染miR-488-3p inhibitor后,足细胞凋亡率、BAX及caspase-3蛋白表达明显降低,而Bcl2表达显著升高。结论Hcy通过上调miR-488-3p表达而促进足细胞凋亡。

过表达miR-488-5p通过靶向TEM8降低宫颈癌C33A细胞的增殖和迁移能力

目的:探讨miR-488-5p在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌C33A细胞增殖和迁移能力的影响。方法:收集2017年3月至2017年9月郑州大学附属洛阳中心医院妇科全子宫切除术12例宫颈癌组织及相应的癌旁组织,qRT-PCR检测癌组织中miR-488-5p的表达。利用Lipofectamine 3000转染miR-488-5p和miR-NC至宫颈癌C33A细胞,分为实验组和对照组。流式细胞术检测两组细胞周期分布,CCK-8法检测两组细胞增殖能力,Transwell检测两组细胞迁移能力。生物信息学软件预测miR-488-5p可能的靶基因,荧光素酶活性实验验证miR-488-5p与靶基因的结合作用。qRT-PCR和Western blotting检测两组细胞中肿瘤内皮标志物8(tumor endothelial marker 8, TEM8)及下游EGFR信号通路相关蛋白的表达水平。结果:宫颈癌组织中miR-488-5p相对表达量明显低于癌旁组织(1.33±0.20 vs 3.68±0.45, P<0.01),实验组细胞中miR-488-5p相对表达量明显高于对照组(25.23±3.11 vs 1.02±0.10, P<0.01),实验组C33A细胞在G0/G1期的细胞比例明显高于对照组(P<0.01);当C33A细胞生长至96和120 h,实验组细胞增殖水平明显低于对照组(P<0.05)。同时实验组的细胞迁移细胞数明显低于对照组(P<0.01)。miR-488-5p可直接结合TEM8 mRNA并抑制其表达(P<0.01)。实验组细胞中TEM8 mRNA相对表达量明显低于对照组(0.42±0.06 vs 1.00±0.06, P<0.01)。C33A细胞转染miR-488-5p 48 h后,TEM8、p-EGFR、p-ERK、p-AKT蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。结论:宫颈癌组织中miR-488-5p的表达量下降,过表达miR-488-5p能够抑制宫颈癌细胞周期的进展,降低宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能与靶向干扰TEM8基因的表达有关。

长链非编码RNA PVT1异常表达对肝癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(PVT1)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和迁移侵袭过程的影响及潜在调控机制。方法检测HCC肿瘤组织和细胞中PVT1和微小RNA-488-3p(miR-488-3p)的表达水平。将MHCC97-H细胞分为Control组(空白未处理)、siRNA组(转染阴性对照siRNA-NC)、siRNA-PVT1组(干扰PVT1表达)和siRNA-PVT1+miR-488-3p inhibitor组(干扰PVT1表达同时抑制miR-488-3p表达)。MTT、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测MHCC97-H细胞的增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证PVT1与miR-488-3p之间的靶向关系。结果PVT1在HCC组织和细胞中表达水平增高(P<0.05),miR-488-3p在HCC组织和细胞中表达水平降低(P<0.05)。与siRNA组相比,siRNA-PVT1组MHCC97-H细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数量均降低(P<0.05);与siRNA-PVT1组相比,siRNA-PVT1+miR-488-3p inhibitor组MHCC97-H细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数量均增加(P<0.05)。PVT1能够靶向负调控miR-488-3p。结论PVT1在HCC组织和细胞系中异常高表达,干扰PVT1表达可能通过上调miR-488-3p表达抑制HCC的增殖、迁移和侵袭。

沉默XIST通过上调miR-488-3p抑制宫颈鳞状细胞癌细胞的顺铂耐药性

目的:探索长链非编码RNA XIST对宫颈鳞状细胞癌细胞顺铂耐药性的作用及机制。方法:建立宫颈鳞状细胞癌细胞顺铂耐药系CASKI/cDDP;构建沉默XIST的慢病毒载体(si-XIST)及miR-488-3p沉默载体miR-inhibitor;将si-XIST单独稳定转入CASKI/cDDP细胞或将si-XIST与miR-inhibitor共转入CASKI/cDDP细胞,qRT-PCR检测XIST、miR-488-3p水平变化;MTT法检测细胞存活率变化,蛋白质印迹法检测多药耐药基因1(MDR1)表达变化,RNA拉下实验确定miR-488-3p与XIST的结合关系。结果:与CASKI相比,CASKI/cDDP中XIST表达升高(P <0. 05);si-XIST转染CASKI/cDDP细胞48 h后,XIST的水平显著下调(P <0. 05)、细胞的存活率下降(P <0. 05)、MDR1表达水平下降(P <0. 05)。CASKI/cDDP细胞XIST沉默可增加miR-488-3p水平(P <0. 05);生物信息学预测宫颈癌关键标志物microRNA-488-3p与XIST结合;RNA拉下实验确认XIST直接结合miR-488-3p。CASKI/c DDP细胞共转染si-XIST与miR-488-3p-inhibitor;miR-488-3p-inhibitor部分逆转si-XIST的功能,提高CASKI/c DDP在顺铂处理下的细胞活性(P <0. 05)。结论:沉默XIST通过上调miR-488-3p抑制宫颈鳞状细胞癌细胞的顺铂耐药性。