微小RNA-502-5p对结肠癌细胞DLD-1功能的影响

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-502-5p对结肠癌细胞DLD-1功能的影响.方法选取结肠癌细胞DLD-1分别转染miR-502-5p mimic(5μl)、control mimic(5μl)、miR-502-5p inhibitor(10μl)与control inhibitor(10μl).实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-502-5p的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力.结果转染miR-502-5p mimic与NC mimic后,DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为319.31±33.16和1.08±0.22,DLD-1细胞中miR-502-5p提高显著(P<0.05);转染miR-502-5p inhibitor与NC inhibitor后DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为0.28±0.04和0.99±0.11,DLD-1细胞中miR-502-5p显著降低(P<0.05);转染miR-502-5p mimic后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p mimic实验组[(125±9)个]与controlmimic组[(112±14)个]之间差异无统计学意义(P>0.05),而迁移[(621±90)个比(174±32)个]与侵袭[(531±45)个比(132±34)个]能力显著提高(P<0.05);转染miR-502-5p inhibitor后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p inhibitor实验组[(118±22)个]与control inhibitor组[(100±15)个]之间差异无统计学意义(P>0.05),而迁移[(133±50)个比(543±84)个]与侵袭[(119±45)个比(458±57)个]能力显著降低(P<0.05).结论miR-502-5p可促进DLD-1细胞的迁移与侵袭能力,但是不影响增殖功能.

p53/miR-502-5p/TRAF2通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响

目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响。方法:Western blot和RT-q PCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用。结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P<0.05)。IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用。此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平。TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响。结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤。

miR-502增强肺癌对替莫唑胺化疗敏感性的机制研究

目的:探讨miR-502对替莫唑胺化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:用200μmol·L^-1的替莫唑胺处理细胞A549作为替莫唑胺组,不作任何处理的细胞作为对照(Con)组;将miR-NC、miR-502、anti-miR-NC、anti-miR-502质粒分别转染至A549细胞中,分别记为miR-NC组、miR-502组、anti-miR-NC组、anti-miR-502组;miR-502转染至A549细胞后再用200μmol·L^-1的替莫唑胺处理作为替莫唑胺+miR-502组;将miR-502质粒分别与pcDNA 3.1、pcDNA 3.1-ERCC1共转染至A549细胞中再用200μmol·L^-1的替莫唑胺处理,分别记为替莫唑胺+miR-502+pcDNA 3.1组、替莫唑胺+miR-502+pcDNA3.1-ERCC1组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-502表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测p21、细胞周期素D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-502和ERCC1的靶向关系。结果:与人胚肺成纤维细胞MRC5相比,肺癌细胞A549中miR-502表达水平显著降低。过表达miR-502、替莫唑胺处理以及替莫唑胺处理同时过表达miR-502,肺癌细胞A549中p21、Bax表达水平均显著升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平均显著降低,细胞活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高(P<0.05)。结论:过表达miR-502和替莫唑胺均可抑制细胞A549增殖,促进细胞凋亡,过表达miR-502可增强替莫唑胺对细胞A549增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与ERCC1有关,将可为提高肺癌化疗效果提供新途径。