长链非编码RNA膀胱癌相关转录物1对微小RNA-503-5p的靶向关系及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录物1(BLACAT1)对微小RNA(miR)-503-5p的靶向关系及结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠癌细胞株SW620,LOVO,HT29和人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460中BLACAT1和miR-503-5p的表达。在HT29细胞中转染si-BLACAT1、pcDNA-BLACAT1或miR-503-5p,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(Cleaved PARP)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)的表达,starbase预测和双荧光素酶报告分析BLACAT1与miR-503-5p之间的靶向关系。si-BLACAT1和anti-miR-503-5p共转染,观察干扰miR-503-5p对沉默BLACAT1诱导的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。结果与NCM460细胞比较,SW620、LOVO和HT29中BLACAT1表达量明显增加[(4.93±0.58)、(5.66±0.53)、(6.17±0.66)比(1.03±0.22)],miR-503-5p表达量减少[(0.72±0.11)、(0.67±0.09)、(0.51±0.08)比(1.04±0.14)](P<0.05)。沉默BLACAT1或转染miR-503-5p明显减少HT29细胞的细胞存活率、Ki-67、CyclinD1蛋白表达量,提高细胞凋亡率、Cleaved PARP和Cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.05),过表达BLACAT1则反之。BLACAT1靶向miR-503-5p调控其表达。干扰miR-503-5p部分逆转沉默BLACAT1抑制结直肠癌细胞增殖、Ki-67、CyclinD1蛋白表达和诱导结直肠癌细胞凋亡、Cleaved PARP、Cleaved caspase-3蛋白表达的作用。结论lncRNA BLACAT1在表达上调,沉默BLACAT1可通过靶向调控miR-503-5p的表达,来抑制结直肠癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

微小RNA-503在结肠癌病人血清中的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA-503(miRNA-503)在结肠癌病人血清中的表达及其临床意义。方法纳入2012年3月至2013年5月四川大学华西医院的72例结肠癌病人和50例健康体检者分别作为观察组和对照组,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)检测血清中miRNA-503水平,分析其表达变化与临床病理特征的关系,受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价其诊断价值。根据血清中miRNA-503水平,将观察组病人分为高表达组和低表达组,Kaplan-Meire法比较两组病人的生存率。结果观察组血清中miRNA-503水平(0.49±0.02)显著低于对照组(0.77±0.03)(P<0.05)。结肠癌病人血清中miRNA-503水平与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、浸润深度、远处转移无关(P>0.05),而与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。ROC曲线下面积为0.859(P<0.05,95%CI:0.790~0.928),以miRNA-503表达量为0.685作为截断值时,对结肠癌的诊断灵敏度为0.875,特异度为0.740。低表达组病人的生存率显著低于高表达组(P<0.05)。结论miRNA-503在结肠癌病人血清中低表达,与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移及预后不良有关,具有较好的诊断价值,可能成为潜在的诊断、治疗与预后靶点。

老年急性心肌梗死患者PCI前血清miR-503、Apelin-13水平与术后左心室重构的关系

目的分析老年急性心肌梗死(AMI)患者术前血清微小RNA-503(miR-503)、孤独G蛋白偶联受体配体-13(Apelin-13)水平与经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后左心室重构(LVR)的关系。方法选取行PCI治疗的老年AMI患者143例作为观察组,体检健康者140例作为对照组。分别采用实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附法检测观察组PCI术前和对照组体检时血清miR-503、Apelin-13水平;术后1年检测老年AMI患者超声心动图指标[左心室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)、左室射血分数(LVEF)],根据是否发生LVR将患者分为LVR组61例、非LVR组82例;Pearson法分析LVR患者术前血清miR-503、Apelin-13、术后1年超声心动图指标的相关性,采用多因素Logistic回归分析影响老年AMI患者PCI术后1年发生LVR的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析术前血清miR-503、Apelin-13对老年AMI患者PCI术后1年发生LVR的预测价值。结果与对照组比较,观察组术前血清miR-503水平升高,Apelin-13水平降低(P均<0.05);与非LVR组比较,LVR组术前血清miR-503水平、术后1年LVEDD、IVST、LVPWT升高,术前Apelin-13水平、术后1年LVEF降低(P均<0.05)。LVR患者术前血清miR-503与Apelin-13呈负相关(r=-0.544,P<0.05);术前血清miR-503与术后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈正相关(r分别为0.491、0.628、0.477,P均<0.05),与LVEF呈负相关(r=-0.562,P<0.05);术前血清Apelin-13与术后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈负相关(r分别为-0.514、-0.583、-0.609,P均<0.05),与LVEF呈正相关(r=0.465,P<0.05)。血清miR-503水平及LVEDD、IVST、LVPWT均是影响老年AMI患者PCI术后1年发生LVR的危险因素,血清Apelin-13水平及LVEF则为其保护因素(P均<0.05);术前血清miR-503、Apelin-13及二者联合预测老年AMI患者PCI术后1年发生LVR的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.803、0.839、0.927,二者联合AUC高于血清miR-503、Apelin-13单独预测(P均<0.05)。结论老年AMI患者PCI术前血清miR-503呈高水平、Apelin-13呈低水平,二者可能成为预测老年AMI患者PCI术后1年发生LVR的生物指标。

miR-503-5p通过干扰Rb/E2F信号通路抑制膀胱癌T24和EJ细胞的增殖

目的研究微小RNA-503-5p(miR-503-5p)对膀胱癌T24细胞和EJ细胞生长的影响和机制。方法 T24细胞和EJ细胞转染miR-503-5p模拟物或阴性对照微小RNA(miR-NC)并验证转染效率,生物信息学软件预测miR-503-5p的靶基因。通过荧光实时定量PCR检测miR-503-5p靶基因E2F转录因子3(E2F3)及下游基因mRNA的表达水平,Western blot法检测视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)/E2F信号通路蛋白E2F3、细胞周期蛋白E(cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、Rb和磷酸化的Rb(p-Rb)蛋白水平,流式细胞术检测膀胱癌细胞周期的变化,MTT法和平板克隆形成实验检测膀胱癌细胞的增殖能力。结果转染miR-503-5p模拟物后,膀胱癌细胞中miR-503-5p的水平显著增加。过表达miR-503-5p可明显降低膀胱癌细胞中E2F3mRNA及Rb/E2F信号通路基因的表达水平,将膀胱癌细胞周期阻滞于G0/G1期,膀胱癌细胞的增殖能力明显降低。结论过表达miR-503-5p通过干扰Rb/E2F信号通路的转导,抑制膀胱癌细胞的增殖。

老年急性心肌梗死患者血清mir-503、Apelin-13水平与左心室重构的相关性分析

观察微小RNA-503(miR-503)、G蛋白偶联受体APJ的内源性配体(Apelin-13)在老年急性心肌梗死(AMI)患者血清中的表达水平,并探讨老年AMI患者血清miR-503、Apelin-13表达水平与左心室重构(LVR)的相关性。方法:选取2017年6月至2019年7月本院收治的老年AMI患者143例作为观察组,根据随访6个月中是否发生左心室重构(LVR)分为LVR组61例与未LVR组82例,同期选取于本院体检健康人群140例作为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定血清中miR-503表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清Apelin-13表达水平;采用彩色超声心动仪测定患者LVR超声各指标包括左室舒张末期内径(LVEDd)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左室射血分数(LVEF)。结果:观察组血清中miR-503表达水平高于对照组,Apelin-13表达水平低于对照组(P<0.05);LVR组血清中miR-503表达水平高于未LVR组,Apelin-13表达水平低于未LVR组(P<0.05);LVR组LVEDd、IVST、LVPWT均高于未LVR组,LVR组LVEF低于未LVR组(P<0.05);Pearson结果显示,血清miR-503与Apelin-13表达呈负相关(r=-0.615,P=0.000);血清miR-503表达水平与LVEDd、IVST、LVPWT呈正相关,与LVEF呈负相关(P<0.05);血清Apelin-13表达水平与LVEDd、IVST、LVPWT呈负相关,与LVEF呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,miR-503预测老年AMI患者LVR截断值为1.647,敏感度为80.3%,特异性为76.8%;Apelin-13预测老年AMI患者LVR的截断值为0.689 ng/mL,敏感度为90.2%,特异性为72.0%;两者联合检测老年AMI患者LVR的敏感度为83.6%,特异性为79.3%。结论:老年AMI患者血清中miR-503呈高表达、Apelin-13呈低表达,两者存在负相关并与LVR超声各指标存在一定相关性,可作为预测老年AMI患者LVR的检测指标。

miR-503、PKD1在非小细胞肺癌患者外周血中的表达及临床意义

目的检测微小RNA-503(miR-503)、蛋白激酶D1(PKD1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达情况,探讨二者对NSCLC诊断的临床意义。方法选取2016年1月~2018年1月在本院肿瘤科住院治疗的61例NSCLC患者为研究对象(试验组),另选取同期体检人群61例作为对照组。采集受试者血清,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测受试者血清中miR-503、PKD1 mRNA表达水平。分析NSCLC患者血清中miR-503、PKD1表达水平与临床指标的关系。Pearson法分析miR-503、PKD1 mRNA表达水平的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析血清中miR-503、PKD1 mRNA表达水平对NSCLC的诊断价值。结果与对照组相比,试验组患者血清中miR-503表达水平明显降低,PKD1表达水平明显升高(P<0.05)。试验组患者血清中miR-503、PKD1表达水平与患者年龄、性别、分化程度无明显相关性(P>0.05);与组织学类型、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05)。试验组患者血清中miR-503与PKD1 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.597,P<0.05)。ROC曲线分析发现,miR-503、PKD1 mRNA诊断NSCLC均具有良好的敏感度及特异性,且两者联合诊断价值更高。结论 miR-503在NSCLC患者血清中低表达,PKD1高表达,二者呈负相关,均可能与NSCLC的发生发展有关,对临床诊断具有一定参考意义。

血清中miR-503水平在糖尿病肾脏疾病患者中的表达及与预后的相关性

目的探究糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)患者血清中miR-503的表达水平及与DKD患者预后情况的相关性。方法选取黄河三门峡医院肾内科2017年6月至2020年6月收治的150例DKD患者为DKD组,另选取116例2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)无肾损伤患者为DM组,同期选择100名健康体检者为对照组。对所有DKD患者随访观察6个月,根据DKD患者是否发生终末期肾病将患者分为预后良好组和预后不良组。采用实时荧光定量PCR(real-time quantita⁃tive PCR,qRT-PCR)法检测所有受试者血清miR-503的表达水平,并比较不同肾损伤严重程度DKD患者血清miR-503表达情况及预后良好组和预后不良组患者血清miR-503的表达差异。单因素分析DKD患者预后不良的影响因素。多因素Logistic回归分析DKD患者不良预后的危险因素。受试者ROC曲线分析血清miR-503对预测DKD患者预后不良的价值。结果与对照组相比,DKD组和DM组血清miR-503表达水平均上调,且DKD组较DM组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-503在DKD患者不同肾小球分级、间质性纤维化和小管萎缩评分(interstitial fibrosis and tu⁃bular atrophy score,IFTA)、间质炎症、临床分期中的表达水平差异均具有统计学意义(P<0.05),且miR-503水平随着肾损伤严重程度增加而升高(P<0.05)。预后不良组患者血清miR-503的表达水平较预后良好组升高(P<0.05)。单因素分析结果显示,DKD患者预后情况与年龄、性别、糖尿病病程、体重指数,空腹血糖及糖化血红蛋白水平无显著相关性,而与24 h尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)及估算肾小球滤过率(the estimated glomerular filtration rate,eGFR)具有显著相关性(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,Scr、eGFR及血清miR-503水平是DKD患者不良预后的独立危险因素。ROC曲线分析结果显示,血清miR-503作为预测DKD患者预后不良的ROC曲线下面积为0.830,截断值为4.834,敏感度为84.20%,特异性为78.60%。结论DKD患者血清miR-503水平显著上调,血清miR-503对预测DKD患者预后具有一定的诊断价值,及时检测并采取措施可以改善患者预后情况。