人乳头瘤病毒16型E6通过微小RNA-504调控宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的研究

目的探讨人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6通过微小RNA(miR)-504对宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法将体外培养的SiHa细胞分为对照组、空载体组、E6过表达组、E6过表达+miR-NC组和E6过表达+miR-504组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HPV16 E6 mRNA和miR-504的表达;采用免疫印迹法检测HPV16 E6蛋白表达;采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡情况。结果与对照组和空载体组比较,E6过表达组细胞中HPV16 E6蛋白和mRNA表达水平均明显升高,而miR-504表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,E6过表达组细胞增殖活力和侵袭能力明显升高,而细胞凋亡率降低(P<0.05);与E6过表达组和E6过表达+miR-NC组比较,E6过表达+miR-504组细胞中miR-504表达水平和细胞凋亡率明显升高,而细胞增殖活力和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论HPV16 E6可能通过下调miR-504的表达促进宫颈癌SiHa细胞的增殖、侵袭并抑制其细胞凋亡。

微小RNA-504对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的作用

目的:探讨微小RNA-504(microRNA-504,miR-504)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法:以定量PCR检测3种NSCLC细胞株A549,H1299,HCC827及对照人支气管上皮细胞株BEAS-2B中miR-504的表达。选取miR-504变化最明显的细胞株(HCC827)用于后续实验。用Lipofectamine RNAiMAX分别将miR-504类似物(miR-504mimic)、miR-504抑制物(miR-504 inhibitor)及非靶向miRNA对照(miR-control)转染至HCC827细胞中。以CCK-8试剂盒检测上述3组细胞增殖情况。用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测3组细胞凋亡情况。以Western印迹法检测3组细胞P53表达。结果:与对照组BEAS-2B细胞相比,miR-504在3种NSCLC细胞株中表达水平均显著增加,其中以HCC827细胞增加幅度最大。与miR-control组相比,过表达miR-504(miR-504 mimic)后HCC827细胞增殖加快、凋亡减少,而抑制miR-504表达(miR-504 inhibitor)后HCC827增殖减慢、凋亡增加。Western印迹检测结果显示:与miR-control组相比,P53在miR-504 mimic组表达水平降低,而在miR-504 inhibitor组表达水平增加。结论:miR-504具有促进NSCLC细胞增殖、抑制凋亡的作用,其机制可能与下调P53表达有关。

未破裂颅内动脉瘤患者血清微小RNA-504和p53的表达水平及其临床意义

目的探讨微小RNA-504(miR-504)、p53在未破裂颅内动脉瘤(UIA)患者外周血清中的表达情况及临床意义。方法选取2019年7月至2020年5月于三二〇一医院确诊为UIA患者110例为UIA组,同时选取53例来本院体检的健康人群为对照组。收集患者临床资料,分别检测两组血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、肌酐水平;qRT-PCR法检测miR-504表达水平;酶联免疫吸附法检测p53表达水平。Pearson法分析UIA患者血清生化指标与miR-504、p53水平的相关性以及miR-504与p53表达的相关性。使用ROC曲线评估miR-504与p53对UIA的诊断价值。结果与对照组比较,UIA组患者miR-504表达水平明显下调,p53表达水平上调,差异均具有统计学意义(t=17.998、15.995,P<0.05)。血清miR-504水平与CRP、LDL-C、Hcy、NT-proBNP表达均呈正相关(r=0.511、0.295、0.332、0.196,P<0.01),与HDL-C水平呈负相关(r=-0.985,P<0.01);p53与CRP、LDL-C、Hcy、NT-proBNP水平均呈负相关(r=-0.987、-0.583、-0.982、-0.987,P<0.01),与HDL-C水平呈正相关(r=0.992,P<0.01)。UIA患者miR-504和p53的表达水平呈明显负相关(r=-0.345,P<0.05)。ROC结果显示血清miR-504、p53水平诊断UIA的AUC分别为0.984、0.974,对应的敏感度分别为97.27%、92.73%,特异度分别为90.57%、94.34%,两者联合预测UIA的AUC为0.983,敏感度为96.36%,特异度为98.11%。结论miR-504在UIA患者外周血清中明显低表达,p53明显高表达,两者呈明显负相关,并且与CRP、LDL-C、Hcy、NT-proBNP及HDL-C水平具有相关性。两者对UIA都具有诊断价值,可能与UIA的发生和发展密切相关。

干扰lncRNA ROR1-AS1通过调节miR-504抑制人肝癌细胞株增殖、迁移和侵袭的研究

目的分析长链非编码RNA酪氨酸蛋白激酶跨膜受体1反义RNA 1(lncRNA ROR1-AS1)通过靶向微小RNA-504(miR-504)对肝癌细胞MHCC97H增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2019年6月—2021年5月于内蒙古医科大学附属医院肝胆外科收治肝癌患者32例的癌组织及癌旁组织。肝癌细胞MHCC97H分为si-ROR1-AS1组、si-NC组、miR-504 mimics组、miR-NC组、si-ROR1-AS1+anti-miR-504组及si-ROR1-AS1+anti-miR-NC组,并进行相应质粒转染。qRT-PCR法检测组织样本及细胞中ROR1-AS1、miR-504的表达;克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移、侵袭;Western-blot法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及上皮型钙黏附素(E-cadherin)水平;双荧光素酶报告实验检测ROR1-AS1与miR-504的调控关系。结果肝癌患者癌组织中ROR1-AS1水平高于癌旁组织,miR-504水平低于癌旁组织(t=11.544、10.905,P均<0.001)。与si-NC组比较,si-ROR1-AS1组MHCC97H细胞克隆形成数、细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9水平降低(t=8.978、9.647、8.444、13.282、10.026、12.006,P均<0.001),miR-504、p21、E-cadherin水平上升(t=10.527、9.722、12.901,P均<0.001)。与miR-NC组比较,miR-504 mimics组MHCC97H细胞克隆形成数、细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9水平降低(t=8.831、9.680、8.187、12.480、10.026、10.954,P均<0.001),p21、E-cadherin蛋白水平升高(t=9.418、12.614,P均<0.001)。双荧光素酶报告实验显示,ROR1-AS1可靶向调控miR-504。与si-ROR1-AS1+anti-miR-NC组比较,si-ROR1-AS1+anti-miR-504组细胞克隆形成数、细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9水平升高(t=7.064、7.012、6.746、10.222、7.213、7.982,P均<0.001),p21、E-cadherin蛋白水平下降(t=4.841、7.120,P均<0.001)。结论干扰ROR1-AS1表达可抑制肝癌MHCC97H细胞的增殖、迁移及侵袭,其具体机制可能与靶向作用miR-504水平有关。

miR-504N-cadherin mRNA和Gal-9mRNA表达水平与HR-HPV感染转阴关系及联合预测价值

目的探讨微小RNA-504(miR-504)、神经型钙黏附素(N-cadherin)mRNA、半乳糖凝集素9(Gal-9)mRNA与高度鳞状上皮内病变(HSIL)宫颈锥切术后高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染转阴关系及联合预测价值。方法将98例行宫颈锥切术HR-HPV阳性的HSIL患者,根据术后6个月HR-HPV感染是否转阴分为非转阴组27例、转阴组71例。比较两组患者一般资料和miR-504、N-cadherin mRNA、Gal-9 mRNA表达水平,采用多因素Logistic回归分析法分析HR-HPV感染转阴相关影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析miR-504、N-cadherin mRNA、Gal-9 mRNA对HR-HPV感染转阴情况的预测价值。结果两组患者宫颈癌家族史、绝经情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HR-HPV感染非转阴组患者miR-504表达水平低于转阴组,N-cadherin mRNA、Gal-9 mRNA表达水平高于转阴组(P<0.01);将宫颈癌家族史、绝经情况等基线资料控制后,miR-504、N-cadherin mRNA、Gal-9 mRNA表达水平仍与HR-HPV感染转阴情况相关(P<0.01);miR-504、N-cadherin mRNA、Gal-9 mRNA联合预测HR-HPV感染转阴的AUC最大。miR-504高水平表达患者的HR-HPV感染转阴率高于低水平表达患者,N-cadherin mRNA、Gal-9 mRNA高水平表达患者的HR-HPV感染转阴率低于低水平表达患者(P<0.01)。结论miR-504、N-cadherin mRNA、Gal-9 mRNA表达水平与HSIL宫颈锥切术后HR-HPV感染转阴有关,三者联合检测可作为预测HR-HPV感染转阴情况的有效方案。

miR-504和G6PD在宫颈癌中的表达及其与高危型HPV感染的相关性研究

宫颈癌的发生发展是一个多基因调控的复杂过程,微小RNA(microRNA,miRNA/miR)-504和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)在宫颈癌中的表达及其与高危型人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)感染的关系尚未见报道。本研究通过检测miR-504、G6PD在宫颈癌中的表达水平,研究其表达水平与高危型HPV感染的关系。收集2016年5月至2017年8月在石家庄市第四医院行宫颈癌手术切除患者46例为研究对象,取宫颈癌组织及癌旁组织,荧光定量PCR检测宫颈组织中miR-504和G6PD的mRNA表达水平,免疫组化检测G6PD在宫颈组织中的蛋白表达水平,采用HC2技术检测宫颈组织中HPV感染情况。结果显示宫颈癌组织中miR-504表达水平显著低于癌旁组织(P <0.05);宫颈癌组G6PD mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化结果显示宫颈癌组G6PD阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);miR-504表达水平与HPV感染呈负相关(r=-0.773,P<0.05),G6PD表达强度与HPV感染呈正相关(r=0.669,P<0.05);miR-504表达水平与G6PD mRNA表达水平呈负相关(r=-0.740,P<0.05)。本研究提示miR-504在宫颈癌组织中表达下调,与HPV感染呈负相关;G6PD在宫颈癌组织中表达上调,与HPV感染呈正相关;miR-504和G6PD mRNA表达水平呈负相关,推测miR-504可能负调控G6PD参与HPV感染患者宫颈病变发展过程。