靶向ING1基因的miR-622真核表达载体在胃癌细胞MKN-45中的鉴定及其功能

目的:研究构建靶向ING1基因的miR-622真核表达载体并验证其转染人胃癌细胞株MKN-45细胞后对ING1基因的干扰效果及其功能.方法:将外源性重组真核表达载体pSuper/miR-622转染到人胃癌细胞株MKN-45内,经G418筛选并建立高表达miR-622的稳定转染胃癌细胞株.稳定表达该miR-622的胃癌细胞为:MKN-45-pSuper/miR-622组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组(MKN-45-pSuper组和MKN-45组),采用实时荧光定量PCR验证miR-622在稳定转染细胞的表达,蛋白印迹检测其对ING1基因表达的干扰效果,通过细胞增殖和周期实验验证miR-622在胃癌细胞MKN-45中的功能.结果:与pSuper空载体组相比,转染了pSuper/miR-622高表达质粒的MKN-45细胞中ING1蛋白表达明显减少,降低了4.63倍(1.83±0.86vs8.47±1.43,P<0.05);与转染pSuper空载体的MKN-45细胞对照组相比,转染了pSuper/miR-622高表达质粒的MKN-45细胞地促进了胃癌细胞增殖(P<0.05),而转染了pSuper空载体的MKN-45细胞组与正常组组间无统计学意义(P>0.05).pSuper/miR-622组在胃癌细胞G0/G1期为21.45±0.16而pSuper空载体组48.21±0.34;pSuper/miR-622组在胃癌细胞G2/M期为53.67±0.41而pSuper空载体组20.27±0.18,与pSuper空载体组细胞相比较,miR-622的高表达促进了胃癌细胞周期的演化.结论:miR-622真核表达载体构建和稳定表达胃癌细胞筛选成功,为继续深入的研究miR-622在胃癌中的功能奠定了基础.

宫颈癌患者血清miR-139、miR-622表达水平与病理特征、预后的关系

目的探讨血清微小RNA(miR)-139、miR-622表达水平与宫颈癌患者病理特征及预后的关系。方法选取2016年2月至2018年2月在中国人民解放军海军第九七一医院进行治疗的100例宫颈癌初诊患者作为宫颈癌组,另选取同期在中国人民解放军海军第九七一医院体检的60例健康者作为对照组,收集所有研究对象临床病理特征资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-139、miR-622的表达水平。以宫颈癌组血清miR-139、miR-622表达水平的均值为界限,将宫颈癌组患者分为miR-139高表达组、低表达组和miR-622高表达组、低表达组。对所有宫颈癌患者随访5年,根据随访结果,将患者分为生存组与死亡组,比较两组相关临床资料。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析不同血清miR-139、miR-622表达水平对患者预后的影响。采用多因素Logistic回归分析miR-139、miR-622对宫颈癌患者预后的影响。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-139、miR-622单独及联合检测对宫颈癌患者预后的预测价值。结果宫颈癌组血清miR-139表达水平明显低于对照组,miR-622表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-139高表达组纳入24例患者、低表达组纳入76例患者;miR-622高表达组纳入70例患者、低表达组纳入30例患者。miR-139高表达组、低表达组国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-622高表达组、低表达组FIGO分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌患者5年随访率100%,其中生存患者78例,纳入生存组,死亡患者22例,纳入死亡组。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,血清miR-139低表达组5年生存率[73.68%(56/76)]低于高表达组[91.67%(22/24)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.279,P=0.039);miR-622高表达组5年生存率[72.86%(51/70)]低于低表达组[90.00%(27/30)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.791,P=0.029)。死亡组血清miR-139表达水平明显低于生存组,血清miR-622表达水平明显高于生存组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-622高表达是宫颈癌患者死亡的危险因素(P<0.05),miR-139高表达是宫颈癌患者死亡的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-139、miR-622单独及联合预测宫颈癌患者预后的曲线下面积分别为0.826、0.828、0.889,联合预测效果优于单独预测(Z二者联合-miR-139=2.085,P=0.037;Z二者联合-miR-622=2.216,P=0.027)。结论宫颈癌患者血清miR-139表达水平明显降低,miR-622表达水平明显升高,其表达水平与患者FIGO分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度有关,且miR-139、miR-622均是宫颈癌患者预后的影响因素,检测二者表达水平对预测宫颈癌患者预后具有一定价值。

miR-622在骨关节炎中的作用及机制研究

目的分析微小RNA-622(miR-622)在骨关节炎中的作用及可能机制。方法体外培养人软骨细胞C28/I2,将其分成对照组、下调miR-622组及上调miR-622组;MTT方法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;ELISA方法检测各组细胞TNF-α、IL-1β、MMP-13的表达水平;双荧光素酶报告实验验证miR-622与SDF-1、CXCR4的靶向关系;RT PCR与Western blot检测各组细胞SDF-1及CXCR4 mRNA表达量的变化。结果与对照组相比,下调miR-622表达后,C28/I2细胞增殖率降低,凋亡率、TNF-α、IL-1β与MMP-13的表达水平均升高;上调miR-622表达后,C28/I2细胞增殖率升高,凋亡率、TNF-α、IL-1β与MMP-13的表达水平均降低。双荧光素酶报告实验结果证实,SDF-1与CXCR4为miR-622的靶基因。与对照组相比,下调miR-622表达后,C28/I2细胞SDF-1及CXCR4 mRNA与蛋白的表达上调;上调miR-622表达后,C28/I2细胞SDF-1及CXCR4 mRNA与蛋白的表达降低。结论miR-622可通过调控SDF-1/CXCR4轴参与骨关节炎的病理机制。