多发性骨髓瘤患者血清微小RNA-625和微小RNA-203的水平及临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清微小RNA-625(miR-625)、血清微小RNA-203(miR-203)水平及临床意义。方法选取2021年6月—2023年8月本院治疗的103例确诊MM患者为观察组,根据多发性骨髓瘤国际分期体系(ISS)分为Ⅰ期(n=23)、Ⅱ期(n=31)和Ⅲ期(n=49)。按照诊疗情况将患者分为初诊组(n=75)和复发组(n=28);另选取103例同期本院体检健康者为对照组。采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定血清miR-625、miR-203水平;采用多因素Logistic回归模型分析MM的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-625、miR-203对MM患者的诊断价值。结果观察组M蛋白、血红蛋白、白蛋白、miR-625和miR-203水平均低于对照组,血肌酐、24 h尿蛋白、尿素氮、血清β_(2)微球蛋白和血清钙水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。初诊组MM患者血清miR-625、miR-203水平均高于复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅱ期、Ⅲ期患者血清miR-625、miR-203水平均低于Ⅰ期患者,Ⅲ期患者血清miR-625、miR-203水平均低于Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。溶骨性病变<2个的MM患者血清miR-203水平低于溶骨性病变≥2个的患者,差异有统计学意义(P<0.05);骨病分级为1~2级的MM患者血清miR-625水平高于骨病分级为3~4级的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-625、miR-203是MM发生的保护因素(P<0.05)。血清miR-625、miR-203诊断MM的曲线下面积(AUC)分别为0.808、0.866,二者联合诊断的AUC为0.919,二者联合诊断优于血清miR-625、miR-203各自单独诊断(Z_(二者联合-miR-625)=3.816、Z_(二者联合-miR-203)=2.157,P=0.001、0.031)。结论MM患者血清miR-625、miR-203水平下降,二者联合对MM具有较高的诊断价值。

LncRNA HAGLR靶向miR-625-5p对脂多糖诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡和炎症因子表达的影响

目的 探讨长链非编码RNA HAGLR(LncRNA HAGLR)是否可通过靶向调控微小RNA-625-5p(miR-625-5p)表达而影响脂多糖(LPS)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡、炎症因子表达,为揭示视网膜病变机制奠定实验基础。方法 将LPS诱导人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)设为LPS组,正常培养的ARPE-19细胞设为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-625-5p表达水平。根据转染物不同分为LPS+sh-NC组、LPS+sh-HAGLR组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-625-5p组、LPS+sh-HAGLR+anti-miR-NC组、LPS+sh-HAGLR+anti-miR-625-5p组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;验证LncRNA HAGLR、miR-625-5p靶向关系;Western blot检测活化的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)、cleaved-Caspase 9蛋白水平。结果 与Con组比较,LPS组LncRNA HAGLR表达水平升高,miR-625-5p表达水平降低(均为P<0.05),细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均升高(均为P<0.05)。与LPS+sh-NC组比较,LPS+sh-HAGLR组细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均降低(均为P<0.05);LncRNA HAGLR可负向调控miR-625-5p表达水平(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-625-5p组miR-625-5p表达水平升高,细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均降低(均为P<0.05)。与LPS+sh-HAGLR+anti-miR-NC组比较,LPS+sh-HAGLR+anti-miR-625-5p组miR-625-5p表达水平降低,细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均升高(均为P<0.05)。结论 干扰LncRNA HAGLR表达可通过靶向调控miR-625-5p表达抑制细胞凋亡、炎症因子表达,以减轻LPS诱导的ARPE-19细胞损伤。

miR-625-3p在结肠癌组织和细胞中的表达

目的:探讨微小RNA(mi R)-625-3p在结肠癌组织和细胞中的表达,了解其作用机制。方法:利用q RT-PCR分析结肠癌细胞株、癌组织和癌旁组织中mi R-625-3p的表达水平,探讨mi R-625-3p表达水平与结肠癌临床病理参数之间的关系;利用碘化丙啶染色和流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化;Western blot法检测mi R-625-3p对结肠癌细胞株凋亡相关蛋白的影响,初步了解其发挥影响的可能机制。结果:结肠癌组织mi R-625-3p的表达量比癌旁组织高(P<0.05),mi R-625-3p的表达量与结肠癌浸润深度、TNM分期及有无远处转移关系密切(P<0.05)。mi R-625-3p在结肠癌SW620细胞中的表达水平高于在SW480细胞中的表达。抑制mi R-625-3p的表达能显著抑制结肠癌细胞的周期(P<0.05)和促进凋亡;转染mi R-625-3p后,Bcl-2的表达量增加(P<0.05),Bax表达量没有显著变化。结论:mi R-625-3p能促进结肠癌细胞增殖,抑制结肠癌细胞凋亡,可能是结肠癌新的抗癌靶点。

乙型肝炎患者血清miR-27a miR-625表达及与肝硬化和肝癌的相关性研究

目的:探讨乙型肝炎患者血清微小RNA-27a(miR-27a)、微小RNA-625(miR-625)表达水平及与肝硬化和肝癌的相关性。方法:选取2019年11月至2021年2月在成都医学院第三附属医院消化内科就诊的慢性乙型肝炎患者67例,作为乙型肝炎组、乙型肝炎后肝硬化患者63例,作为肝硬化组、乙型肝炎后肝癌患者65例,作为肝癌组,同期健康体检者65例作为对照组。实时荧光定量PCR法检测四组受试者血清miR-27a、miR-625水平;采用多因素Logistic回归分析影响乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的因素;采用受试者工作特征曲线评估血清miR-27a、miR-625水平对乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的预测价值。结果:对照组、乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组血清miR-27a水平依次升高,miR-625水平依次降低(P<0.05)。血清miR-27a水平为影响乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的独立危险因素(P<0.05),血清miR-625水平为影响乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的保护因素(P<0.05)。血清miR-27a、miR-625、二者联合预测乙型肝炎后肝硬化发生的曲线下面积(AUC)分别为0.708(95%CI:0.620~0.797)、0.761(95%CI:0.680~0.843)、0.815(95%CI:0.743~0.888),敏感度分别为73.02%、68.25%、65.08%,特异度分别为61.19%、73.13%、85.07%。血清miR-27a、miR-625、二者联合预测乙型肝炎后肝癌发生的AUC分别为0.870(95%CI:0.812~0.929)、0.913(95%CI:0.864~0.963)、0.966(95%CI:0.938~0.993),敏感度分别为79.23%、76.92%、73.64%,特异度分别为66.57%、72.54%、89.55%。结论:乙型肝炎患者血清miR-27a表达上调,miR-625表达下调,分别为影响乙型肝炎进展为肝硬化、肝癌的独立危险因素和保护因素,对乙型肝炎后肝硬化、肝癌的发生有一定的预测价值。

LINC01133靶向miR-625调控CCND1促进胰腺癌发展的机制研究

目的探讨长非编码RNALINC01133通过靶向微小RNA(microRNA,miR)-625调控G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1,CCND1)促进胰腺癌发展的机制。方法分析TCGA数据库中胰腺癌患者LINC01133水平和患者生存之间的关系。通过双荧光素酶报告验证LINC01133靶向miR-625和miR-625靶向CCND1。将胰腺癌细胞系SW1990分为4组:对照组、LINC01133组、LINC01133+mimic组和mimic组。通过质粒转染技术过表达miR-625和(或)LINC01133。通过qPCR和Western blot检测RNA和蛋白水平,CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞活力、细胞迁移和侵袭能力。结果高水平的LINC01133与胰腺癌更低的生存率和无进展生存期有关(P<0.05)。LINC01133直接靶向miR-625。LINC01133组miR-625水平显著低于对照组(P<0.05),LINC01133+mimic组的miR-625水平显著高于LICN01133组(P<0.05)。LINC01133组的细胞活力、迁移和侵袭能力显著高于对照组(P<0.05),mimic组的细胞活力、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),LINC01133+mimic组的细胞活力、迁移和侵袭能力显著低于LINC01133组(P<0.05)。miR-625直接靶向抑制CCND1 mRNA和蛋白的表达,LINC01133通过靶向miR-625促进CCND1的表达。结论在胰腺癌中,LINC01133具有促癌作用,并且LINC01133可能通过靶向miR-625促进CCND1的表达水平,从而促进胰腺癌细胞生长、迁移和侵袭。

miR-625经RAS信号通路对多发性骨髓瘤大鼠的干预作用

目的:探究基于肉瘤基因(RAS)信号通路研究微小RNA-625(miR-625)对多发性骨髓瘤大鼠的干预作用。方法:在60只大鼠中取15只作为空白组(A组)不建模,其余建立多发性骨髓瘤模型大鼠作为试验组,建模成功后分为模型组(B组)、过表达组(C组)、沉默组(D组)各15只,A组、B组做空白处理,C组、D组分别加入miR-625过表达质粒、miR-625 siRNA行过表达、沉默转染。观察各组大鼠RAS通路蛋白及肿瘤相关指标的变化。结果:实验组大鼠肿瘤体积、腹水量平均值、荷瘤重量平均值均高于空白组(P<0.05)。与A组相比,B、C组细胞增殖率、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达量较高,细胞侵袭数、迁移数较多,细胞凋亡率、RAS、p-p38、Bax蛋白表达量较低(P<0.05)。与B、C组相比,D组大鼠肿瘤体积、腹水量平均值、荷瘤重量、细胞增殖率、RAS、p-p38、Bax蛋白表达量较低,细胞凋亡率、Bcl-2蛋白表达量较高,细胞侵袭数、迁移数较少(P<0.05)。结论:沉默miR-625可能通过抑制RAS信号通路,抑制多发性骨髓瘤大鼠恶性生物学行为。

circ_0000285对过氧化氢诱导的心肌细胞氧化损伤的影响和机制研究

目的 探讨circ_0000285对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞氧化损伤的影响及其可能作用机制。方法 H_(2)O_(2)诱导大鼠心肌细胞H9C2建立细胞氧化损伤模型,si-NC、si-circ_0000285、si-circ_0000285与antimiR-NC、si-circ_0000285与anti-miR-625分别转染至H9C2细胞后加入200μmol/L H_(2)O_(2)处理;用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测circ_0000285、miR-625的表达量;用试剂盒检测丙二醛(malondialedhyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)的浓度与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性;用MTT实验检测细胞增殖能力;用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测circ_0000285与miR-625的靶向关系;Western blot法检测活化半胱氨酸蛋白酶3(cleaved cysteinyl aspartatespecific protease-3,cleaved caspase-3)、微管相关蛋白轻链3II(microtubule-associated protein l light chain 3Ⅱ,LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(microtubule-associated protein l light chain 3Ⅰ,LC3-Ⅰ)蛋白表达量并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果 H_(2)O_(2)诱导的H9C2细胞中circ_0000285的表达量升高(1.00±0.04 vs. 2.24±0.12),而miR-625的表达量降低(1.00±0.05 vs. 0.37±0.05);转染si-circ_0000285可降低H_(2)O_(2)诱导的H9C2细胞中MDA[(44.59±2.74)μmol/L vs.(25.87±2.83)μmol/L]、NO[(88.91±4.15)μmol/L vs.(50.01±4.42)μmol/L]的浓度和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(1.67±0.26 vs. 1.07±0.12)(P<0.05),并可降低细胞凋亡率(28.26%±4.20%vs. 15.42%±0.80%)和cleaved caspase-3蛋白浓度(P<0.05),而细胞存活率(47.62%±5.48%vs. 90.21%±3.67%)、SOD的活性[(11.32±1.39)U/mL vs.(37.44±2.43)U/mL]升高(P<0.05);circ_0000285可靶向调控miR-625的表达;共转染si-circ_0000285与anti-miR-625后H_(2)O_(2)诱导的H9C2细胞中MDA[(25.78±2.33)μmol/L vs.(36.83±2.29)μmol/L]、NO[(50.46±3.15)μmol/L vs.(70.72±2.12)μmol/L]的浓度和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(1.07±0.11 vs. 1.49±0.27)升高(P<0.05),细胞凋亡率(15.35%±0.52%vs. 19.76%±0.74%)和cleaved caspase-3蛋白浓度升高(P<0.05),而细胞存活率(90.24%±4.01%vs. 57.12%±4.07%)和SOD的活性[(37.93±2.59)U/mL vs.(22.45±1.88)U/mL]降低(P<0.05)。结论 干扰circ_0000285表达可通过上调miR-625的表达而促进心肌细胞增殖并可抑制细胞氧化应激反应、凋亡及自噬从而减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞氧化损伤。