miR-639在骨肉瘤组织中的表达及其模拟物转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的观察微小RNA-639(miR-639)在骨肉瘤组织中的表达及miR-639模拟物(miR-639 mimics)转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法通过GEO数据库和TCGA数据库分析骨肉瘤组织及癌旁组织miR-639表达情况,另分析miR-639高表达与骨肉瘤临床病理参数的关系。取U20S细胞,将miR-639 mimics和模拟物阳性对照(miR-NC)转染入U20S细胞中(分别计为观察组和对照组),转染后继续培养24 h,后收集细胞进行后续实验。采用CCK-8实验检测两组细胞集落形成数,Ed U实验检测细胞Ed U染色数,克隆形成实验检测细胞迁移细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭数,荧光定量PCR法和Western blotting法分别检测细胞TUSC5 mRNA、蛋白。结果 GEO数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为11.2±0.4、7.1±0.6,两者比较,P <0.05;TCGA数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为19.5±3.4、7.7±2.2,两者比较,P <0.05。miR-639高表达与骨肉瘤肿瘤直径、淋巴结转移、解剖部位有关(P均<0.05)。观察组、对照组集落形成数分别为(155±12)、(84±8)个,Ed U染色数分别为(14±3)、(6±2)个,迁移细胞数分别为(120±30)、(70±18)个,侵袭细胞数分别为(100±16)、(52±23)个,两组比较,P均<0.05。观察组和对照组TUSC5 mRNA分别为0.18±0.07、0.84±0.13,TUSC5蛋白分别为0.31±0.06、0.81±0.09,两组比较,P均<0.05。结论 miR-639在骨肉瘤组织中表达升高;miR-639 mimics转染促进了骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,可能与其抑制TUSC5有关。

miR-383-5p转染对人卵巢颗粒细胞株KGN凋亡的影响及其机制

目的 观察miR-383-5p转染对人卵巢颗粒细胞株KGN凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 取对数生长期KGN细胞,分为3组,Blank组为空白对照组,miR-383-5p mimics组转染150 pmol的微小RNA-383-5p模拟物(miR-383-5p),miR-383-5p mimics+NAC组为转染150 pmol的miR-383-5p mimics后N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预组,比较Blank组与miR-383-5p mimics组、miR-383-5p mimics组与miR-383-5p mimics+NAC组两组间凋亡率及凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3蛋白)的表达和活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 与Blank组比较,miR-383-5p mimics组凋亡率及Bax、cleaved caspase 3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(P均<0.05);与miR-383-5p mimics组比较,miR-383-5p mimics+NAC组miR-383-5p mimics组凋亡率及Bax、cleaved caspase 3蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加(P均<0.05)。与Blank组比较,miR-383-5p mimics组ROS、MDA水平升高,SOD活性降低(P均<0.05);与miR-383-5p mimics组比较,miR-383-5p mimics+NAC组ROS、MDA水平降低,SOD活性升高(P均<0.05)。结论 miR-383-5p过表达可促进KGN细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活氧化应激途径。