胃癌患者血清中miR-375和miR-665的表达变化及临床价值

目的 观察胃癌患者血清中微小RNA-375(miR-375)和微小RNA-665(miR-665)的表达变化,并探讨二者表达变化与临床病理特征及预后的关系。方法 选取该院2018年1月至2020年1月确诊的85例胃癌患者作为胃癌组,85例慢性胃炎患者作为胃炎组,根据胃癌患者3年内死亡情况分为生存组(48例)和死亡组(37例)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中miR-375和miR-665相对表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征之间的关系;采用Kaplan-Meier法分析miR-375及miR-665表达与胃癌患者3年生存率的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-375和miR-665相对表达水平对患者死亡的预测价值。结果 胃癌组血清中miR-375及miR-665相对表达水平均低于胃炎组(t=28.183、22.361,P<0.001)。存活组血清中miR-375及miR-665相对表达水平均高于死亡组(t=8.094、8.330,P<0.001)。肿瘤浸润深度为T3+T4、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、组织分级Ⅲ级及有淋巴结转移的胃癌患者血清中miR-375及miR-665相对表达水平均低于肿瘤浸润深度T1+T2、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、组织分级Ⅰ、Ⅱ级及无淋巴结转移的胃癌患者(P<0.05)。miR-375高表达患者3年累积生存率为84.44%,高于miR-375低表达患者的25.00%(χ^(2)=30.442,P<0.05)。miR-665高表达患者3年累积生存率为74.47%,高于miR-375低表达患者的34.21%(χ^(2)=13.853,P<0.05)。血清miR-375、miR-665及联合预测胃癌患者死亡的曲线下面积分别为0.913、0.902和0.971,灵敏度分别为86.49%、67.57%和94.59%,特异度分别为83.33%、97.92%和91.67%。结论 血清中miR-375和miR-665的低表达可能与胃癌的发生发展及患者的不良预后有重要关系。

microRNA-665调控TRPM7表达对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨microRNA-665(miRNA-665)对心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能和心肌纤维化的影响及作用机制。方法将SD大鼠分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、空载病毒组(Vector组)和miRNA-665组,Sham组仅开胸但不结扎冠状动脉,Model组结扎冠状动脉,Vector组先冠状动脉注射空载病毒rAAV9再结扎冠状动脉,miRNA-665组先注射rAAV9-Zs-Green-pre-miRNA-665再结扎冠状动脉。各组大鼠继续喂养8周,心脏超声检查左室收缩压峰值(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、等容收缩期左心室内压力上升的最大速率(+LV dP/dt max);实时荧光定量PCR检测大鼠心肌组织miRNA-665表达,免疫组织化学法和Western blot检测心肌组织TRPM7蛋白表达,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,Western blot检测心肌组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xl、Bad、Caspase-3、Caspase-9表达水平。结果与Sham组比较,Model组、Vector组、miRNA-665组LVSP、+LV dP/dt max明显降低,LVEDP、心脏重量/体重(HW/BW)明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05);其中miRNA-665组LVSP、+LV dP/dt max明显高于Model组和Vector组,LVEDP、HW/BW明显低于Model组和Vector组(均P<0.05)。miRNA-665组miRNA-665表达明显高于Sham组、Model组和Vector组,Sham组miRNA-665表达又明显高于Model组和Vector组,差异有统计学意义(均P<0.05)。Model组、Vector组、miRNA-665组TRPM7蛋白表达明显高于Sham组,Model组和Vector组TRPM7蛋白表达明显高于miRNA-665组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与Sham组相比Model组、Vector组、miRNA-665组心肌细胞凋亡指数较高,与Model组、Vector组相比miRNA-665组心肌细胞凋亡指数较低,差异有统计学意义(均P<0.05)。与Sham组相比miRNA-665组、Vector组、Model组Bcl-2/Bax比值、Bcl-xl表达水平降低,与Sham组相比miRNA-665组、Vector组、Model组Bad、Caspase-3、Caspase-9表达水平依次升高,其中与Model组、Vector组相比miRNA-665组Bcl-2/Bax比值、Bcl-xl表达水平较高,Bad、Caspase-3、Caspase-9表达水平较低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌组织miRNA-665表达下调,可能使其对TRPM7的抑制作用减弱,进而导致心肌细胞凋亡,上调miRNA-665表达可能有助于改善大鼠心肌纤维化。

布托啡诺通过调控miR-665表达对脂多糖致心肌细胞炎症反应及细胞凋亡的影响

目的探讨布托啡诺对脂多糖(LPS)致心肌细胞炎症反应、细胞凋亡的影响及其对微小RNA-665(miR-665)的调控作用。方法LPS处理心肌细胞建立细胞损伤模型,使用不同剂量的布托啡诺处理细胞,将anti-miR-NC、anti-miR-665分别转染至LPS诱导的心肌细胞,将miR-NC、miR-665 mimics分别转染至LPS诱导的心肌细胞后加入布托啡诺处理;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-665的表达量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果LPS处理后可提高心肌细胞中TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平及miR-665的表达水平(P<0.05),降低Bcl-2蛋白水平(P<0.05);与LPS组比较,布托啡诺不同剂量组可明显降低TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平及miR-665的表达水平(P<0.05),提高Bcl-2蛋白水平(P<0.05);转染anti-miR-665对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的作用与布托啡诺相似;布托啡诺与转染miR-665 mimics共同处理后可明显提高TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.001),降低Bcl-2蛋白水平(P<0.001)。结论布托啡诺可通过下调miR-665的表达而抑制LPS诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡,从而减轻心肌细胞损伤。

circVMA21靶向miR-665对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

为探讨环状RNA VMA21(circular RNA VMA21,circVMA21)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及分子机制,用25 mmol/L葡萄糖处理肾小管上皮细胞株HK-2作为高葡萄糖(high glucose,HG)组,以5.5 mmol/L葡萄糖处理的细胞作为对照组。用qRT-PCR检测circVMA21和miR-665的表达水平;ELISA检测IL-6、TNF-α水平;FACS检测细胞凋亡情况;Western blotting检测蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因试验检测circVMA21和miR-665的靶向关系。结果显示,高糖诱导的肾小管上皮细胞中circVMA21表达水平降低,miR-665表达水平升高,IL-6、TNF-α水平升高,细胞凋亡率升高,B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)表达水平降低,Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达水平升高(P<0.05)。circVMA21过表达或抑制miR-665表达后,高糖诱导的肾小管上皮细胞中IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05)。circVMA21可靶向调控miR-665;miR-665过表达逆转了circVMA21过表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞的作用。该研究提示,circVMA21过表达可通过靶向下调miR-665保护肾小管上皮细胞免受高糖诱导的损伤。