微小RNA-95在胃癌细胞增殖、凋亡中的作用及其机制

目的分析微小RNA(miRNA,miR)-95与胃癌细胞增殖、凋亡的关系,并探讨其作用机制。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测70例胃癌手术标本的肿瘤组织及癌旁黏膜组织中miR-95的表达;记录患者的临床病理特征,分析miR-95与患者这些临床病理特征之间的关系。应用miR-95抑制物(anti-miR-95)转染人胃癌细胞株BGC823,检测转染前后细胞活性、细胞周期、凋亡率;同时应用Real-time PCR及Western blot检测增殖及凋亡相关基因增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、p21、生存素(Survivin)、Livin、Bad的表达。结果胃癌组织中miR-95水平明显高于癌旁黏膜组织(t=-3.399,P<0.05)。miR-95表达与肿瘤的分化程度及淋巴结转移情况有关:分化差的肿瘤组织miR-95水平明显高于分化好者,存在淋巴结转移的肿瘤组织miR-95水平明显高于无淋巴结转移者(t=-3.021,P<0.05;t=3.348,P<0.05)。胃癌细胞株AGS、SGC7901、MKN45、BGC823及胃上皮细胞株GES-1中,miR-95在胃癌细胞株表达均高于GES-1,在BGC823细胞表达最高(F=5.998,P<0.05)。anti-miR-95转染BGC823后细胞的活性明显降低,细胞G0/G1期比例升高(F=39.758,P<0.01),而G2/M(F=10.349,P<0.05)、S期比例均降低(F=15.118,P<0.01);anti-miR-95转染后凋亡率明显增高(F=25.182,P<0.01);转染后增殖、凋亡相关基因PCNA、Cyclin D1、Survivin的mRNA和蛋白表达明显降低,而p21、Bad的mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论胃癌组织中miR-95的表达增高,与肿瘤分化及淋巴结转移有关,miR-95可能通过调节一些增殖、凋亡基因表达而参与胃癌进展。

酪氨酸蛋白磷酸酶非受体型3在结直肠癌组织中表达下调并受微小RNA-95调控

目的 观察酪氨酸蛋白磷酸酶非受体型3（PTPN3）在结直肠癌（CRC）中的表达,探讨其表达下调的机制.方法 用免疫组织化学方法检测112例CRC组织及其配对组织中的表达,荧光素酶实验分析微小RNA-95（miR-95）对PTPN3的调控作用,定量反转录.聚合酶链反应（RT-PCR）技术及Western blot技术检测PTPN3的表达.结果 PTPN3蛋白在50.9％的CRC组织中（57/112）下调,并与肿瘤TNM分期负相关（r=-0.253,P＜0.01）,PTPN3强表达的患者生存期有缩短的趋势（P＞0.05）.荧光素酶结果显示PTPN3是miR-95的靶基因,在CRC细胞株中过表达miR-95后,PTPN3 mRNA和蛋白表达均下降,而抑制miR-95后PTPN3表达增加.结论 PTPN3表达在CRC组织中下调,可能与肿瘤进展相关;miR-95调控是PTPN3在结直肠中表达下调的关键机制。

妊娠期高血压患者HLA-Ⅰ、miR-95-5p表达及与母婴不良结局相关性

目的:分析妊娠期高血压患者血清白细胞抗原Ⅰ类分子(HLA-Ⅰ)、微小RNA-95-5p(miR-95-5p)表达及与母婴结局相关性。方法:选取2019年1月-2020年1月本院收治的妊娠期高血压患者95例为高血压组,产前检查正常妊娠孕妇80例为健康组,酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)水平,Western Blot法检测HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白水平,荧光定量PCR法检测血miR-95-5p表达量,统计并分析与各指标母婴结局关系。结果:与健康组相比,高血压组sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G表达降低,miR-95-5p表达升高(P<0.05)。HLA-Ⅰ、miR-95-5p表达与妊娠期高血压患者高血压家族史、妊娠高血压史有关(P<0.05)。高血压组不良母婴结局发生率高于健康组(P<0.05)。高血压组中,与正常母婴结局相比不良母婴结局者sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G表达降低,miR-95-5p表达升高(P<0.05)。sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G与miR-95-5p均呈负相关(P<0.05)。结论:妊娠期高血压患者血清HLA-Ⅰ类分子低表达、miR-95-5p高表达且与母婴不良结局相关,提示临床加以关注。

miR-95与胃癌细胞洛铂敏感性的关系及作用机制研究

目的:探讨miR-95与胃癌细胞洛铂敏感性的关系及作用机制.方法:收集30例手术切除的胃癌组织及癌旁组织标本,实时定量PCR(qPCR)法检测组织中miR-95的表达情况,CCK-8法检测洛铂对胃癌组织细胞的体外抑制率.采用miR-95抑制物(anti-miR-95)和miR-95模拟物(miR-95 mimics)分别转染人胃癌细胞株SGC7901,检测转染前后细胞对洛铂敏感性的变化;采用qPCR及Western blot法检测细胞耐药相关基因MDR1、GST-π、LRP、Survivin、xIAP、Bad mRNA和蛋白的表达.结果:qPCR检测结果显示,30例胃癌组织miR-95的相对表达水平(0.106±0.023)显著高于癌旁组织(0.046±0.025)(P<0.05).以miR-95表达均值为界将胃癌组织分为miR-95高表达组17例,低表达组13例.洛铂对miR-95表达水平高的胃癌细胞的抑制率低于miR-95低水平者(P<0.05).anti-miR-95转染后,SGC7901细胞对洛铂的敏感性明显增高(P<0.01),耐药相关基因MDR1、Survivin、xIAP mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而Bad mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05).miR-95 mimics转染后,洛铂对SGC7901细胞的抑制率明显增加(P<0.01),耐药相关基因MDR1、Survivin、xIAP mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而Bad mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:miR-95通过调节一些耐药基因的表达影响胃癌组织和细胞对洛铂的敏感性.

uc.339经miR-95/K-RAS通路促进肾癌的生长

目的 探讨uc.339经miR-95/K-RAS促进肾癌细胞增殖、凋亡和迁移的机制。方法 收集76例肾透明细胞癌组织及癌旁正常组织,应用RNA原位杂交技术检测uc.339表达情况,并分析其与肾透明细胞癌患者病理参数的相关性。CCK-8法检测肾癌细胞增殖活性;Annexin V/PI法检测细胞凋亡;Transwell小室检测肾癌细胞的迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-95对靶基因K-RAS的调控;Western blot方法分析uc.339下游基因蛋白的表达。结果 uc.339在肾透明细胞癌组织中呈阳性表达,占77.63%(59/76),其阳性表达与肿瘤大小、肿瘤TNM分期均密切相关(P<0.05)。uc.339对肾癌细胞迁移能力无影响。过表达uc.339促进肾癌增殖活性、抑制细胞凋亡,而降低uc.339表达则抑制肾癌增殖活性、促进细胞凋亡(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证uc.339下游靶基因是微小RNA-95(miR-95);双荧光素酶报告基因实验表明miR-95与K-RAS的结合具有特异性,K-RAS是miR-95的直接靶基因。Western blot和Rescue实验表明无论uc.339和miR-95如何变化,K-RAS都能受到uc.339的调控。结论 在肾癌中,uc.339抑制了miR-95的表达,进而升高K-RAS蛋白水平,促进肾癌生长。本研究为今后诊断和治疗肾癌提供有力的理论依据。

miR-95在胃癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义

目的:探讨微小RNA(miR)-95在胃癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义。方法:选取2018-01~2019-12郑州市金水区总医院行手术治疗胃癌患者122例,以实时定量聚合酶链反应(qPCR)法测定其手术标本中胃癌组织、癌旁组织miR-95表达情况。比较胃癌组织、癌旁组织中miR-95表达水平,同时比较不同临床病理特征(TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况)患者胃癌组织中miR-95表达水平。结果:胃癌组织miR-95表达量高于癌旁组织(P<0.05);肿瘤高、中分化患者胃癌组织miR-95表达量低于肿瘤低、未分化患者,淋巴结转移阳性患者胃癌组织miR-95表达量高于淋巴结转移阴性患者(P<0.05);不同TNM分期患者胃癌组织miR-95表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与正常胃黏膜组织相比,胃癌组织miR-95表达水平较高,且miR-95在肿瘤低、未分化、淋巴结转移患者中表达增高,测定miR-95表达量可一定程度反映胃癌患者病情进展情况。

长链非编码RNA C16orf89在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)C16orf89在胃癌组织及细胞系中的表达,观察lncRNA C16orf89过表达对胃癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法:应用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库在线分析lncRNA C16orf89在胃癌组织中的表达。应用Oncolnc数据库在线分析lncRNA C16orf89表达量与胃癌患者总生存期的关系。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA C16orf89在胃癌细胞系中的表达。分别将阴性对照质粒和lncRNA C16orf89过表达质粒转染至lncRNA C16orf89表达最低的胃癌细胞系,分别定义为NC组和lncRNA C16orf89组。采用噻唑蓝(MTS)和Transwell实验检测lncRNA C16orf89过表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响。采用在线生物信息学网站分析可能与lncRNA C16orf89结合的微小RNA(miRNA)。采用双荧光素酶报告载体实验检测lncRNA C16orf89与miR-95-3p的相互作用。采用qRT-PCR检测lncRNA C16orf89过表达对miR-95-3p表达的影响。采用Western blot检测NC组和lncRNA C16orf89组细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白的表达。结果:胃癌组织中lncRNA C16orf89表达量明显低于癌旁组织(P<0.01)。与lncRNA C16orf89低表达的胃癌患者相比,lncRNA C16orf89高表达的胃癌患者总生存期较长(P<0.01)。胃癌细胞系中lncRNA C16orf89表达量明显低于GES-1细胞,且AGS细胞中lncRNA C16orf89表达量最低(均P<0.01)。与NC组相比,lncRNA C16orf89过表达显著抑制AGS细胞的增殖和侵袭能力(均P<0.05)。lncRNA C16orf89能够靶向结合miR-95-3p。与NC组比较,lncRNA C16orf89过表达明显抑制miR-95-3p的表达,lncRNA C16orf89组细胞中PI3K/AKT信号通路蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、细胞周期蛋白D1(CCDN1)表达降低,磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达增加(均P<0.01)。结论:胃癌中lncRNA C16orf89呈低表达状态,其通过竞争结合miR-95-3p干扰PI3K/AKT信号通路转导,进而抑制胃癌细胞的增殖及侵袭。

IP3R sHLA-ⅠmiR-95-5p在妊娠期高血压中的表达及与母婴结局的相关性研究

目的分析三磷酸肌醇受体(IP3R)、人可溶性白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)、微小RNA-95-5p(miR-95-5p)在妊娠期高血压(PIH)中的表达及与母婴结局的相关性。方法选取2018年7月—2020年7月丽水市中医院收治的正常妊娠产妇、妊娠期高血压患者、子痫前期患者83例、200例、67例分别作为健康组、PIH组、子痫前期组为研究对象,检测IP3R、sHLA-Ⅰ、miR-95-5p,分析其与PIH患者母婴结局的相关性。结果与子痫前期组相比,PIH组IP3R、miR-95-5p较低,sHLA-Ⅰ较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与结局不良组相比,结局良好组IP3R、miR-95-5p较低,sHLA-Ⅰ较高,差异有统计学意义(P<0.05)。IP3R、sHLA-Ⅰ、miR-95-5p为影响PIH患者母婴结局的因素(P<0.05)。IP3R、sHLA-Ⅰ之间负相关(r=-0.243,P=0.001);IP3R、miR-95-5p之间正相关(r=0.200,P=0.005);sHLA-Ⅰ、miR-95-5p之间负相关(r=-0.208,P=0.003)。结论IP3R、miR-95-5p在PIH中降低,sHLA-Ⅰ在PIH中升高,且与患者母婴结局相关,IP3R、sHLA-Ⅰ、miR-95-5p有望作为评估PIH患者预后及母婴结局的指标。

胃癌患者血浆miR-95检测临床价值

目的研究发现miR-95在一些恶性肿瘤中存在异常表达。本研究探讨miR-95在胃癌患者血浆与肿瘤组织中表达及临床意义。方法选取2015-01-01-2017-10-31在河北医科大学第四医院外三科进行手术的胃癌患者85例作为手术组(A组),同期手术后确诊为复发或转移的患者25例作为复发转移组(B组),同期健康体检者50名作为对照组(C组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常黏膜组织(距癌周>3cm)及血浆miR-95表达水平。结果 A组术前、A组术后、B组和对照组血浆miR-95水平分别为0.31±0.09、0.07±0.03、0.45±0.13和0.08±0.04,差异有统计学意义,F=308.171,P<0.001。A组、B组和C组肿瘤组织miR-95表达水平分别为0.15±0.08、0.27±0.08和0.10±0.03,F=62.108,P<0.001。A组患者肿瘤组织与术前血浆miR-95水平呈正相关(r=0.580,P<0.001),B组肿瘤组织与血浆miR-95水平呈正相关(r=0.408,P<0.001)。A组术前血浆中miR-95水平与肿瘤浸润深度(t=-4.823,P<0.001)及临床分期(F=17.770,P<0.001)有关联。结论 miR-95在胃癌患者血浆及肿瘤组织中表达增高,且存在正相关。监测血浆miR-95水平对评价胃癌患者病情有临床价值。