miR-194在葡萄膜黑色素瘤细胞系中的表达及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-194在葡萄膜黑色素瘤细胞系中的表达及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法RT-PCR检测miR-194在正常视网膜上皮细胞系ARPE-19及葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6. 5、M23及OM431中的表达。取SP6. 5、M23及OM431细胞分成两组,miR-194过表达组(miR-194组)及阴性对照组(NC组),经Lipofectamine^(TM) 2000分别转染miR-194 mimic及阴性对照序列scramble。CCK-8实验及流式细胞仪分别测定细胞增殖和凋亡能力,细胞划痕及Transwell实验分别测定细胞迁移和侵袭能力。Western blot测定叉头盒蛋白A1 (forkhead box,FOXOA1)、多聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白表达。结果正常视网膜上皮细胞系ARPE49中miR-194的相对表达量为1.03±0.04,葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及OM431相对表达量分别为0.25±0.02、0.37±0.02及0.47±0.03,葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及OM431中miR-194相对表达量低于正常视网膜上皮细胞系ARPE-19(均为P<0.001)。转染0 h、24 h、48 h、72 h、96 h后,miR-194组和NC组A值分别为:0.23±0.02、0.21±0.03(t=0.960,P=0.391),0.38±0.02、0.37±0.03(t=0.480,P=0.656),0.75±0.04、0.78±0.06(t=-0.720,P=0. 511),0.87±0. 09、1.59±0. 12 (t=-8. 313,P=0.001),1.53±0. 14、3. 05±0. 22 (t=-10. 096,P=0.000);流式细胞仪检测结果显示:miR494组细胞凋亡率为23. 30%±2. 10%,NC组为2. 47%±0.30%,miR-194组细胞凋亡率高于NC组(t=17.007,P=0.000)。细胞划痕实验结果显示:miR-194组细胞划痕愈合率为25.3%±3.5%,NC组为72.9%±6.4%,miR-194组细胞划痕愈合率低于NC组(t=-11.302,P=0.000);Transwell实验结果显示:200倍视野下,miR-194组侵袭细胞数为(188.6±20.7)个,NC组为(352.9±32.8)个,miR-194组侵袭细胞数少于NC组(t=-7.337,P=0.001)。miR-194组FOX A1蛋白相对表达量为0.29±0.03,NC组为1.03±0.06,miR-194组FOX A1蛋白相对表达量低于NC组(t=-19.106,P=0.000);miR-194组裂解型PARP蛋白相对表达量为2.87±0.24,NC组为1.03±0.06,miR-194组裂解型PARP蛋白相对表达量高于NC组(t=12.882,P=0.000)。结论miR-194在葡萄膜黑色素瘤细胞系中低表达,上调miR-194表达可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖,促进凋亡,抑制迁移和侵袭,其机制可能与下调FOX A1及上调裂解型PARP蛋白表达有关。