慢性肝损伤致肝纤维化过程中微小RNA200家族的表达

目的观察肝组织中微小RNA200(miR-200)家族成员在慢性肝损伤致肝纤维化过程中表达变化并探讨其机制。方法雄性Wistar大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)制备肝纤维化模型,分别在2、4、6、8周处死大鼠测定肝脏指数、血清ALT、AST含量,观察肝组织病理改变,Real-time PCR检测肝组织miR-200a、b、c、141、429mRNA表达变化。结果模型各组大鼠肝脏指数、血清ALT、AST含量显著高于正常对照组(P<0.01),8周模型组肝纤维化明显,8周模型组肝组织中miR-200a、b、c、141、429mRNA表达较正常组显著增加(P<0.05)。结论 miR-200s在慢性肝损伤致肝纤维化过程中的表达变化,提示其参与慢性肝损伤及肝纤维化的发生发展。

血清miR-21、miR-200a水平变化与卵巢癌发生发展的关系

目的探讨血清中微小RNA21(miR-21)、微小RNA200a(miR-200a)的表达变化与卵巢癌发生发展的关系。方法选取90例上皮性卵巢癌患者为病例组、同期健康体检妇女90例为对照组;采用实时荧光定量PCR技术检测2组人群血清中的miR-21、miR-200a水平;并分析不同临床分期、病理学分级、病理学类型、淋巴结转移、病灶大小的卵巢癌患者血清中的miR-21、miR-200a水平差异。结果病例组患者的血清中miR-21、miR-200a表达水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。卵巢癌患者的血清中miR-21表达水平在不同的临床分期、不同组织学分化程度、是否发生淋巴结转移的患者中比较,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢癌患者的血清中miR-200a表达水平在不同组织学分化程度的患者中比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌患者的血清miR-21、miR-200a水平表达显著升高,可能与卵巢癌的发生发展具有一定的关系。

miR-200s在中药丹芍化纤干预大鼠肝纤维化过程中的表达变化

目的:观察肝组织中微小RNA-200家族成员(miR-200s)在肝纤维化形成及中药丹芍化纤胶囊干预过程中的表达变化并探讨其机制。方法:雄性Wistar大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)制备肝纤维化模型,干预组在给予CCl4造模同时给予丹芍化纤胶囊(0.5 g/kg)灌胃,分别在4周和8周处死大鼠,测定肝脏指数和血清谷丙/谷草转氨酶(ALT和AST)活性,观察肝组织病理改变,real-time PCR方法分别检测肝组织miR-200a、-200b、-200c、-141和-429表达变化。结果:模型组及干预4周组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P<0.01),8周模型组肝纤维化明显,并且肝组织中miR-200a、-200b、-200c、-141和-429表达较正常组显著增加(P<0.05)。丹芍化纤胶囊干预8周组肝功能生化指标及病理学改变与对照组无明显差异,且肝组织中miR-200a、-200b、-200c、-141和-429表达均低于8周模型组。结论:miR-200s在肝纤维化形成及中药丹芍化纤胶囊干预过程中的表达变化,提示其参与肝纤维化的发生发展并可能是潜在的中药作用靶点。

孕中期唐氏筛查血清标志物及miR-200C与病理妊娠的关系

目的探究孕中期唐氏筛查血清中甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素(β-h CG)、游离雌三醇(u E3)及微小RNA200C(miR-200C)与病理妊娠的关系。方法回顾性选择862例孕中期妊娠者作为研究对象,收集所有研究对象血清。采用时间分辨荧光法测定血清中AFP、β-h CG、u E3水平,RT-PCR法检测血清中miR-200C水平。根据血清标志物中位数值的倍数(MOM)值、miR-200C平均值进行分组,对比不同水平AFP、β-h CG、u E3、miR-200C病理妊娠发生情况。Logistic多因素回归性分析血清检测指标与病理妊娠的相关性,创建受试者工作特征曲线(ROC)对比不同指标曲线下面积(AUC)。结果 102例妊娠者发生病理妊娠,占11.83%,主要包括胎膜早破、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、早产以及胎儿先天畸。AFP、β-h CG升高组、u E3降低组以及miR-200C高表达组在胎膜早破、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、早产、胎儿先天畸形病理妊娠中发生率高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归性分析显示病理妊娠的发生与血清AFP、β-h CG、u E3、miR-200C均具有显著相关性(OR=1.536,1.732,1.248,1.671,P<0.05)。ROC曲线分析显示,AFP、β-h CG、u E3、miR-200C预测病理妊娠AUC值分别为0.782、0.869、0.806、0.713,其中β-h CG预测价值最高。结论孕中期血清AFP、β-h CG、miR-200C升高,u E3降低与病理妊娠的发生相关,推测其可作为病理妊娠的预测指标。

冬凌草甲素调控miR-200c/EZH2轴抑制黑色素瘤细胞上皮-间质转化的机制研究

目的 探究冬凌草甲素调控微小RNA200c(miR-200c)/组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)轴抑制黑色素瘤细胞(A375细胞)上皮-间质转化(EMT)的影响机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375细胞活力的影响;将A375细胞分为对照组、冬凌草甲素组、mimic control组、miR-200c mimics组、冬凌草甲素+inhibitor control组、冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组,qRT-PCR检测miR-200c、EZH2 mRNA表达情况;免疫印迹法检测EZH2及EMT相关蛋白表达情况;黏附实验检测A375细胞黏附能力;Transwell实验检测A375细胞侵袭及迁移能力;荧光素酶报告基因实验检测miR-200c与EZH2的靶向关系;构建移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤质量;免疫组化法分析EMT相关蛋白表达情况。结果 A375细胞存活率随冬凌草甲素浓度的增加以剂量依赖性显著降低(P<0.05),由于40μmol/L冬凌草甲素接近半数抑制浓度,因此选取40μmol/L冬凌草甲素进行后续实验;与对照组相比,冬凌草甲素组、miR-200c mimics组A375细胞中miR-200c、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,EZH2 mRNA及蛋白表达水平、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达水平、迁移细胞数、侵袭细胞数、黏附细胞数显著降低(P<0.05);与对照组、mimic control组相比,miR-200c mimics组EZH2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);miR-200c沉默可逆转冬凌草甲素对A375细胞的作用;与对照组相比,冬凌草甲素组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平显著降低,miR-200c、E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与冬凌草甲素组相比,冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平显著增加,miR-200c、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 冬凌草甲素可能通过促进miR-200c/EZH2轴来抑制A375细胞的EMT及肿瘤生长。

子宫内膜腺癌中EMT的发生及miR200a/ZEB1信号通路在该过程中发挥的作用

目的检测上皮-间质转化(EMT)在子宫内膜腺癌中的发生,并探讨mi R200a/E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)信号通路在其中发挥的作用。方法 1分组:取自石蜡切片的子宫内膜腺癌为A组(n=45),正常子宫内膜为B组(n=22);取自手术中的子宫内膜腺癌标本为C组(n=34),正常子宫内膜标本为D组(n=15);2采用免疫组化法检测A、B两组间E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、ZEB1的表达;采用Western blotting法检测C、D两组间上述3种蛋白的表达;3 Real-time RT-PCR法检测C、D两组间各蛋白相应m RNA及mi R200a的表达。结果 1 B组与A组比较,E-cadherin表达降低(P<0.05),Vimentin及ZEB1表达升高(P<0.05);2 D组与C组比较,E-cadherin蛋白及m RNA表达降低(P<0.05),Vimentin蛋白及m RNA表达升高(P<0.05),ZEB1蛋白及m RNA表达升高(P<0.05);3与C组数据相比,D组中mi R200a表达量降低(P<0.05),D组中mi R200a与E-cadherin的m RNA表达量之间存在正相关关系(r=0.63,P<0.01)。结论子宫内膜腺癌中明确发生了EMT过程,而mi R200a/ZEB1信号通路可对EMT过程中重要的分子标记物产生抑制作用。

母体血液指标miR-200C、hsA-miR-124A-3p与常规血清标志物在孕中期唐氏综合征筛查中的随机对照研究

目的探究母体血液指标微小RNA200C(miR-200C)、hsA-miR-124A-3p与常规血清标志物在孕中期唐氏综合征(DS)筛查中的临床价值。方法选取我院2015年1月~2020年6月孕中期(14~27w)DS孕妇55例作为观察组,按照1:1原则随机选取正常妊娠孕妇55例作为对照组。比较两组一般资料、母体血液指标miR-200C、hsA-miR-124A-3p、常规血清标志物[游离雌三醇(uE_(3))、人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、甲胎蛋白(AFP)]MOM值,分析血浆miR-200C、hsA-miR-124A-3p与血清uE_(3)、β-hCG、AFP相关性及各指标与DS的关系,评价miR-200C、hsA-miR-124A-3p、血清uE_(3)、β-hCG、AFP对DS的诊断价值。结果两组文化程度、既往吸烟、饮酒、规律服用叶酸、孕期接触放射性物质比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组血浆miR-200C、hsA-miR-124A-3p、血清β-hCG、AFP MOM值高于对照组,血清uE_(3) MOM值低于对照组(P<0.05)。血浆miR-200C、hsA-miR-124A-3p与血清β-hCG、AFP MOM值呈正相关,与uE_(3) MOM值呈负相关(P<0.05)。血浆miR-200C、hsA-miR-124A-3p、血清uE_(3)、β-hCG、AFP与DS发生显著相关(P<0.05)。miR-200C+hsA-miR-124A-3p诊断DS的AUC高于uE_(3)+β-hCG+AFP诊断,且敏感度、特异度分别为78.18%、87.27%。结论母体血液指标miR-200C、hsA-miR-124A-3p联合对DS的诊断效能优于常规血清标志物,可为孕中期DS筛查提供一种新途径,具有较高临床应用价值。