微小RNA204在人肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的研究微小RNA204(miR-204)在人肾透明细胞癌(RCCC)中的表达及临床意义。方法收集泌尿外科行手术切除的RCCC及对应癌旁正常肾脏组织标本共65例,运用qRT-PCR技术检测miR-204在RCCC及癌旁组织中的表达水平,统计分析miR-204表达水平与患者临床病理资料间的相关性;采用人工合成的miR-204模拟物转染人RCCCCaki-1细胞,分别采用qRT-PCR及Western-Blot检测转染后miR-204下游潜在靶点Bcl-2及SIRT1 mRNA及蛋白的表达变化。结果miR-204在RCCC组织中表达水平显著低于对应癌旁正常肾组织(P<0.05);miR-204低表达与肿瘤体积增大(>3cm,P<0.05)、肿瘤淋巴结转移(P<0.05)及高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ期,P<0.05)显著相关;miR-204转染人RCCCCaki-1细胞后可显著降低细胞内Bcl-2及SIRT1mRNA及蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 miR-204在RCCC组织中表达下调并与肿瘤恶性临床病理特征有关,miR-204可能通过下调Bcl-2及SIRT1的表达来抑制RCCC的发生、发展过程。

微小RNA204(miR-204)低表达与肝细胞癌预后不良相关

目的研究微小RNA204(mi R-204)在肝细胞癌中的表达及与预后的关系和可能机制。方法选择50例肝细胞癌患者,收集手术切除后的肝癌细胞以及肝癌旁组织,采用定时定量PCR检测肝细胞癌组织及癌旁组织mi R-204的表达,以mi R-204表达水平中位数为分界点,观察mi R-204的表达与肝细胞癌患者临床病理特征的关系。采用免疫组织化学染色检测Bcl2及SIRT1(sirtuin 1)蛋白的表达,合成mi R-204转染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法检测细胞增殖,采用PCR检测SMMC-7721细胞的SIRT1与Bcl2 m RNA的水平。结果 HCC组织mi R-204水平显著降低;与mi R-204低表达的患者相比,mi R-204高表达的患者瘤体直径较小(在5 cm)、肿瘤数少、TNM分期较低,与患者年龄、性别、乙型肝炎病毒(HBV)感染情况无关;mi R-204低表达组中Bcl2及SIRT1蛋白水平显著高于mi R-204高表达组,mi R-204与Bcl2及SIRT1的水平呈负相关;mi R-204转染SMMC-7721细胞后,过表达mi R-204的SMMC-7721细胞SIRT1与Bcl2 m RNA水平不仅显著低于转染阴性对照mi RNA的细胞,也显著低于癌旁肝组织SIRT1与Bcl2 m RNA水平;与阴性对照组相比,转染mi R-204的SMMC-7721细胞的增殖能力明显降低。结论 mi R-204低表达肝细胞癌预后不良相关,上调其表达可下调SIRT1、Bcl2水平,抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡。

微小RNA⁃204⁃3p通过靶向调控Krüppel样因子6对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨微小RNA⁃204⁃3p(miR⁃204⁃3p)对高糖诱导小鼠足细胞MPC5损伤的保护作用及其分子机制。方法采用高糖(30 mmol/L D⁃葡萄糖)处理MPC5细胞。实时定量PCR(qPCR)检测细胞中miR⁃204⁃3p与锌指蛋白Krüppel样因子6(KLF6)mRNA水平。MPC5细胞分为NG组(正常对照),HG组(高糖刺激),HG+miR⁃204⁃3p组、HG+miR⁃NC组、HG+si⁃KLF6组、HG+si⁃NC组,HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA⁃KLF6组和HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA组。蛋白质印迹法(Western Blot)检测肌动蛋白微丝偶联蛋白(synaptopodin)、结蛋白(desmin)、B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)与活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved⁃caspase⁃3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,生物学信息预测和双荧光素酶报告基因分析miR⁃204⁃3p和KLF6的靶向关系。结果与正常对照相比,高糖可显著降低MPC5细胞中miR⁃204⁃3p表达量[(0.41±0.04)比(1.02±0.08)],上调KLF6 mRNA[(2.86±0.27)比(1.03±0.08)]和蛋白[(0.89±0.08)比(0.46±0.04)]水平,还可上调KLF6、desmin[(0.81±0.07)比(0.34±0.03)]、Bax、cleaved⁃caspase⁃3蛋白表达及细胞凋亡率[(22.46±2.08)%比(5.26±0.64)%],下调synaptopodin蛋白[(0.34±0.03)比(0.76±0.07)]及Bcl⁃2蛋白表达量(P<0.05)。与HG+miR⁃NC组比较,HG+miR⁃204⁃3p组明显提高synaptopodin[(0.67±0.06)比(0.32±0.03)]及Bcl⁃2蛋白水平,降低desmin[(0.41±0.04)比(0.83±0.08)]、Bax、cleaved⁃caspase⁃3蛋白水平及细胞凋亡率[(11.25±1.65)%比(24.58±2.47)%](P<0.05)。与HG+si⁃NC组比较,HG+si⁃KLF6组明显提高synaptopodin[(0.62±0.06)比(0.28±0.03)]及Bcl⁃2蛋白水平,降低desmin[(0.49±0.05)比(0.86±0.08)]、Bax蛋白水平及细胞凋亡率[(14.69±1.87)%比(25.47±2.68)%](P<0.05)。miR⁃204⁃3p直接靶向KLF6。与HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA组比较,HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA⁃KLF6组显著增加高糖刺激小鼠肾脏足MPC5细胞中KLF6、desmin[(0.68±0.06)比(0.36±0.04)]、Bax蛋白表达量和细胞凋亡率[(18.41±1.67)%比(11.05±1.02)%],显著减少synaptopodin蛋白[(0.38±0.03)比(0.69±0.07)]和Bcl⁃2蛋白表达量(P<0.05)。结论miR⁃204⁃3p通过直接靶向KLF6抑制高糖刺激的足细胞凋亡,保护细胞损伤。

微小RNA-204对前列腺癌细胞株CL1的生长调节及其机理研究

目的:探讨微小RNA(mi R)-204对前列腺癌细胞株CL1的生长调节及其机理。方法:获得mi R-204高表达的CL1稳转细胞株(CL1-mi R-204)及其阴性对照的CL1稳转细胞株(CL1-对照)后,观察其细胞生长速度,检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)磷酸化水平及AKT总蛋白和p27蛋白的表达,并检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通道抑制剂LY294002对2种细胞生长的影响。结果:mi R-204能促进CL1的生长;升高AKT在苏氨酸(T308)和丝氨酸(S473)2个位点的磷酸化水平;抑制AKT下游的靶基因p27蛋白表达水平。加入LY294002后,CL1-对照和CL1-mi R-204的生长速度都降低。但CL1-mi R-204的生长速度下降得更明显。结论:mi R-204可能是通过AKT信号通路来促进CL1的生长。