脂联素调控微小RNA221／金属蛋白酶组织抑制因子3信号对高糖环境下小鼠肾系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨脂联素通过微小RNA221（miR-221）靶向调控金属蛋白酶组织抑制因子3（Timp3）基因对高糖诱导的小鼠肾系膜细胞增殖的影响及作用机制。方法在体外高糖条件下培养小鼠。肾系膜细胞，分别加入脂联素以及转染miR-221抑制物、miR-221模拟物、小干扰RNA-Timp3（Si—Timp3）等干预因素。根据实验目的及干预因素不同将细胞分组为：正常对照组、高糖组、高糖＋脂联素组、高糖＋miR-221抑制物转染组及转染对照组、Si-Timp3转染组及转染对照组、miR-221模拟物转染组及转染对照组、高糖＋脂联素＋miR-221模拟物转染组及转染对照组。噻唑蓝法检测细胞的增殖活性，实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）分析miR-221、Timp3的表达水平，Westernblotting法检测Timp3的蛋白表达，荧光素酶报告基因实验检测Timp3的3＇-UTR活性。两组间比较采用t检验。结果高糖组促进小鼠肾系膜细胞增殖明显，上调miR．221和抑制Timp3的表达（分别为3．20±0．28比1、0．67±0．07比1，t=13．69、8．35，均P〈0．05），而脂联素加人后该作用减弱（t=7．60、4．12，均P〈0．05）。与高糖＋miR-221抑制物对照组比较，转染miR-221抑制物后，Timp3的mRNA表达水平上调（0．78±0．03比0．38±0．04，t=14．57，P〈0．05），细胞增殖减弱。与Si．Timp3对照组比较，转染Si-Timp3后，细胞增殖活性增强（1．72±0．06比1．04±0．12，t=8．76，P〈0．05）。与高糖＋脂联素＋miR-221minie转染对照组比较，加入脂联素及转染miR-221模拟物后，Timp3的mRNA表达水平下降（O．72±0．09比1．40±0．06，t=10．93，P〈0．05），细胞增殖加强。结论高糖是诱导小鼠肾系膜细胞增殖、上调miR-221水平、抑制Timp3基因表达的重要因素，脂联素可逆转该作用，其机制可能是通过miR-221／Timp3途径，靶向负调控Timp3基因的表达来实现的。

参芪扶正注射液联合最佳支持治疗对中晚期非小细胞肺癌患者外周血miR221、肿瘤标志物及生存质量的影响

目的探讨参芪扶正注射液联合最佳支持治疗对中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血miR221、肿瘤标志物及生存质量的影响。方法将94例中晚期非小细胞肺癌患者随机分为对照组与研究组各47例。对照组给予最佳支持治疗,研究组在对照组治疗基础上联合参芪扶正注射液治疗,2组均持续治疗4周。统计2组治疗前后中医证候积分,检测2组治疗前后外周血miR221表达水平、血清肿瘤标志物水平,评价2组治疗前后肺癌治疗功能评估量表(FACT-L)评分。结果治疗后,2组中医证候积分及研究组外周血miR221表达水平及血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平均较治疗前显著降低(P均<0.05),且研究组各指标均显著低于对照组(P均<0.05);研究组FACT-L评分显著高于对照组(P<0.05)。结论参芪扶正注射液联合最佳支持治疗可减轻中晚期非小细胞肺癌患者临床症状,下调外周血miR221及肿瘤标志物水平,提高生存质量。

Galectin-3、CK-19、MiRNA221对细针穿刺标本中BRAF^(V600E)阴性及细胞病理不确定甲状腺结节的诊断价值

目的探讨半乳糖凝集素-3(Gal-3)、细胞角蛋白19片段(CK-19)及微小RNA221(MiR221)对BRAF^(V600E)阴性、细胞病理(TBSRTC)Ⅲ~Ⅴ类甲状腺结节的诊断价值。方法回顾我院甲状腺结节手术治疗的患者资料。以术后组织病理为金标准,建立基于二分类变量的决策树模型。分析模型、3种标记物单独或组合后的受试者工作特征曲线(ROC),比较曲线下面积(ROCAUC)的差异。结果纳入甲状腺结节115例,恶性46例,良性69例。Gal-3、CK-19和MiR221的ROCAUC分别为0.808、0.848、0.669;两个标记物阳性(组合1)和3个均阳性(组合2)的ROCAUC分别为0.873,0.812;CK-19、Gal-3和TBSRTC进入决策树模型,模型ROCAUC=0.942。两两比较后,决策树模型、MiR221 ROCAUC与其他ROCAUC差异均有统计学意义(P≤0.05);CK-19、Gal-3、组合1及组合2之间的ROCAUC差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CK-19、Gal-3和TBSRTC对BRAF^(V600E)阴性及细胞病理不确定恶性甲状腺结节具有较高的诊断价值。

长链非编码RNA NEAT1通过调节miR-221-3p对哮喘炎症和细胞屏障损伤的影响

目的研究长链非编码RNA NEAT1在哮喘中的作用及其相关机制。方法将人气道平滑肌细胞(ASMCs)分为对照组(常规培养,不做处理),模型组[用血小板活化因子(PAF)处理ASMCs 12 h],转染组1(转染空载质粒24 h后,给予PAF处理12 h),转染组2(转染NEAT1过表达质粒24 h后,给予PAF处理12 h)。通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测NEAT1和微小RNA-221-3p(miR-221-3p)的表达。用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;比较各组ASMCs之间的单层通透性;用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证NEAT1和miR-221-3p之间的相关性。结果对照组、模型组、转染组1和转染组2的ASMCs中NEAT1 mRNA的表达水平分别为1.00±0.00,1.54±0.07,1.50±0.13和2.12±0.13;miR-221-3p的表达水平分别为1.00±0.00,0.55±0.02,0.62±0.04和0.34±0.03;IL-1β分别为(1.57±0.09),(6.48±0.37),(6.16±0.55)和(15.21±0.98)pg·mL^(-1);IL-6分别为(153.51±8.37),(753.41±49.86),(712.79±83.83)和(1179.52±85.86)pg·mL^(-1);TNF-α分别为(9.94±0.56),(28.33±1.13),(26.52±0.90)和(54.86±3.74)pg·mL^(-1);ASMCs的单层通过率分别为(4.44±0.21)%,(8.43±0.39)%,(8.27±0.47)%和(16.54±0.78)%。对照组与模型组,转染组1和转染组2相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因检测实验结果表明NEAT1可以靶向调控miR-221-3p(P<0.05)。结论NEAT1通过靶向miR-221-3p加重了哮喘气道炎症和细胞屏障损伤。

阿托伐他汀改善急性心肌梗死后左室收缩功能实验研究

目的:探讨不同剂量阿托伐他汀对兔急性心肌梗死后心肌组织微小RNA126(miR-126)和微小RNA221(miR-221)表达、血管新生及左室收缩功能的影响。方法:建立兔急性前壁心肌梗死模型,随机均分为对照组、急性心肌梗死(AMI)组和低剂量阿托伐他汀组、高剂量阿托伐他汀组。4周时超声心动图测定左心室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、左心室短轴缩短率(LVFS),然后取梗死区心肌组织,免疫组化法检测梗死区心肌组织微血管密度(MVD)、 RT-PCR法检测心肌miR-126和miR-221表达。结果:与对照组比较,AMI组心肌miR-126表达显著下调,miR-221表达显著上调(均P<0.01),LVEF、SV、LVFS显著降低(均P<0.01)。阿托伐他汀治疗后,心肌组织miR-126表达水平较AMI组明显增高,miR-221水平显著降低(均P<0.01),梗死组织MVD显著增高(P<0.01),LVEF、SV、LVFS有一定程度增加(均P<0.01),以上变化在高剂量他汀组更为显著。梗死心肌组织MVD与miR-126表达呈显著正相关(r=0.703,P<0.05),与miR-221表达呈显著负相关(r=-0.755,P<0.01)。结论:阿托伐他汀可能通过调控miR-126和miR-221的表达,促进心肌梗死后梗死心肌组织的血管新生,进而改善左室收缩功能,且作用呈剂量依赖性。

反义miR-221／222上调p27kp1对胶质母细胞瘤U251的放射增敏作用

目的探讨敲低微小RNA（microRNA，miRs）-221／222表达上调p27kp1对U251胶质母细胞瘤细胞系放射敏感性的影响。方法经生物信息学分析查询miR-221／222成熟体序列和它们与p27kp1的关系。脂质体共转染反义寡聚核苷酸（反义miR-221／222）下调U251胶质母细胞瘤细胞系miR-221与miR-222的表达。使用Northern印迹方法鉴定转染后u251细胞miR-221、miR-222表达水平下调；流式细胞术检测转染后U251联合X线照射的细胞周期分布；克隆形成实验验证各组细胞增殖性死亡；Western印迹分析p27kp1蛋白的表达变化。结果经生物信息学分析显示miR-221／222成熟体序列的种子序列几乎一致，p27kp1是miR-221／222的靶基因。Northern印迹分析显示反义miR221／222共转染组使miR-221／miR-222的表达水平明显下降。转染无义序列组及对照组的miR-221／miR-222表达水平没有改变。流式细胞术检测可见反义miR-221／222共转染组细胞周期阻滞于G0／G1期且明显高于其它各组。经X线照射后，可明显降低S期比例。反义miR-221／222联合X线照射可增加U251细胞增殖性死亡。Western印迹分析显示反义miR-221／ee2共转染组的p27kp1蛋白表达明显上调。结论反义miR-221／222通过上调p27kp1蛋白表达可增加U251胶质母细胞瘤细胞系的放射敏感性。