lncRNA TUG1靶向调节miR-31-5p对急性胰腺炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在急性胰腺炎(AP)中的作用机制。方法:体外培养小鼠胰腺腺泡细胞系(MPC-83),用脂多糖(LPS,10μg/ml)和雨蛙素(Caerulein,100 nmol/L)处理3 h,建立AP模型。实验分为对照组(control组)、AP组、AP+sh-NC组、AP+sh-TUG1组、AP+sh-TUG1+inhibitor-NC组、AP+sh-TUG1+miR-31-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA TUG1和miR-31-5p之间的靶向关系。构建AP小鼠模型,给予相应的干预后,qRT-PCR检测胰腺组织中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;试剂盒检测血清中炎症因子IL-1β、TNF-α含量和淀粉酶(AMY)和脂肪酶(Lipase)活性;HE染色观察胰腺组织病理学变化;TUNEL检测胰腺组织中细胞凋亡。结果:在Caerulein和LPS共同处理的MPC-83细胞中lncRNA TUG1水平、细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-31-5p水平、细胞活力降低(均P<0.05);敲低lncRNA TUG1可上调miR-31-5p,增加细胞活力,降低IL-1β和TNF-α水平,抑制细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-31-5p表达可减弱敲低lncRNA TUG1对细胞炎症反应的抑制作用。miR-31-5p是lncRNA TUG1的直接靶标。在体内敲低lncRNA TUG1表达可上调AP小鼠胰腺组织中miR-31-5p表达,降低IL-1β、TNF-α水平,减少细胞凋亡,改善胰腺组织损伤。结论:敲低lncRNA TUG1可能通过上调miR-31-5p表达水平,抑制炎症反应,改善AP。

微小RNA ame-miR-31a和ame-miR-13b在意大利蜜蜂哺育蜂和采集蜂脑部的表达差异

【目的】研究微小RNA ame-miR-31a和ame-miR-13b在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica哺育蜂和采集蜂脑部的表达情况,探索其在蜜蜂哺育蜂和采集蜂行为转变中的调节作用。【方法】利用qPCR分别检测ame-miR-31a和ame-miR-13b在意大利蜜蜂工蜂正常蜂群和同龄蜂群中哺育蜂和采集蜂脑部的表达量。【结果】不论在意大利蜜蜂工蜂正常蜂群中还是在同龄蜂群中,ame-miR-31a在哺育蜂脑部的表达量总是显著高于其在采集蜂脑部的表达量;在正常蜂群中,ame-miR-13b在采集蜂脑部的表达量显著高于其在哺育蜂脑部中的表达量;在同龄蜂群中,ame-miR-13b在年老哺育蜂脑部的表达量极显著高于其在同龄采集蜂脑部的表达量,在年轻哺育蜂脑部与同龄年轻采集蜂脑部的表达量差异不显著。【结论】ame-miR-13b在意大利蜜蜂哺育蜂和采集蜂脑部的表达没有明显规律,而ame-miR-31a总是在哺育蜂脑部高表达,提示ame-miR-31a在蜜蜂哺育蜂和采集蜂行为转变中可能发挥重要的调控作用。

结直肠癌组织LncRNA MEG3、miR-31表达及与病理特征的相关性

目的探讨结直肠癌组织长链非编码RNA母系印记基因3(LncRNA MEG3)、微小RNA-31(miR-31)表达及与病理特征的相关性。方法选取2019年1月—2021年10月我院收治的85例结直肠癌,比较癌组织与癌旁组织LncRNA MEG3与miR-31表达,应用Pearson相关性分析探讨LncRNA MEG3与miR-31的关系,采用荧光素酶报告基因检测分析LncRNA MEG3靶向调控miR-31情况,并比较不同病理特征患者LncRNA MEG3与miR-31表达,应用Spearman分析探讨LncRNA MEG3、miR-31与病理特征的相关性。结果癌组织LncRNA MEG3表达低于癌旁组织,miR-31表达高于癌旁组织(P<0.01)。LncRNA MEG3与miR-31表达呈负相关(r=-0.718,P<0.01)。荧光素酶报告基因检测结果显示,LncRNA MEG3 mimic可明显抑制WT-miR-31的荧光素酶活性(P<0.05);LncRNA MEG3组SW480细胞中miR-31表达显著降低,anti-LncRNA MEG3组SW480细胞中miR-31表达显著升高(P<0.05)。不同T分期、N分期、M分期、分化程度患者LncRNA MEG3与miR-31表达比较差异有统计学意义(P<0.01)。LncRNA MEG3表达与T分期、N分期呈负相关(r=-0.737、-0.725,P<0.01),与分化程度呈正相关(r=0.824,P<0.01);miR-31表达与T分期、N分期呈正相关(r=0.830、0.748,P<0.01),与分化程度呈负相关(r=-0.742,P<0.01)。结论结直肠癌组织中LncRNA MEG3呈低表达,miR-31呈高表达,且LncRNA MEG3可特异性结合miR-31,负向调控miR-31表达,影响结直肠癌患者病理特征。

LncRNA MEG3与miR-31在结肠腺瘤-癌序列转化中的交互作用及意义

目的探究长链非编码RNA母系印记基因3(LncRNA MEG3)与微小RNA-31(miR-31)在结肠腺瘤-癌序列转化中的交互作用与意义。方法选取2016年6月-2018年8月手术切除的62例结肠腺瘤、62例结肠腺瘤癌前病变、62例结肠癌组织,均行实时定量PCR检测LncRNA MEG3、miR-31的相对表达量;分析LncRNA MEG3与miR-31表达在不同序列转化阶段的相关性;分析LncRNA MEG3与miR-31表达在结肠腺瘤-癌序列转化中的交互作用;分析LncRNA MEG3、miR-31表达与结肠癌患者病理特征的相关性;分析LncRNA MEG3、miR-31表达对结肠癌患者生存率与死亡危险度的影响。结果LncRNA MEG3相对表达量在结肠腺瘤-癌序列转化中呈逐渐下降趋势,miR-31相对表达量在结肠腺瘤-癌序列转化中呈逐渐升高趋势(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,LncRNA MEG3与miR-31在结肠腺瘤、结肠腺瘤癌前病变、结肠癌组织中均呈负相关(r=-0.741、-0.753、-0.774,P<0.05)。LncRNA MEG3低表达与miR-31高表达在结肠腺瘤-癌序列转化中呈正向交互作用(OR=30.375,γ=2.244),为次相乘模型。LncRNA MEG3相对表达量与结肠癌患者临床分期、淋巴结转移呈负相关,与结肠癌组织分化程度呈正相关,miR-31相对表达量与结肠癌组织临床分期、淋巴结转移呈正相关,与结肠癌组织分化程度呈负相关(P<0.01)。LncRNA MEG3低表达结肠癌患者3年生存率低于高表达患者,3年内死亡危险度是高表达患者的7.000倍(95%CI:1.027,47.704,P<0.05);miR-31高表达结肠癌患者3年生存率低于低表达患者,3年内死亡危险度是低表达患者的4.810倍(95%CI:1.846,12.536,P<0.05,P<0.01)。结论LncRNA MEG3低表达与miR-31高表达在结肠腺瘤-癌序列转化中具有正向交互作用,且二者均与结肠癌患者病理特征、生存状况密切相关,能为临床制定治疗方案、预测预后提供有效信息。

长链非编码RNA SPATA31D5P吸附微小RNA-320a促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的乳腺癌(BC)中存在多种长链非编码RNA(lncRNA)的异常表达,并且与生存预后密切相关。本研究旨在探讨lncRNA SPATA31D5P在乳腺癌中的表达并通过吸附miR-320a影响乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。方法收集乳腺癌组织及癌旁组织各30例,采用Real-time PCR检测SPATA31D5P在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达水平。选择乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对SPATA31D5P siRNA干扰载体,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)法、Transwell小室实验和细胞划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变。采用生物信息学方法筛选可与SPATA31D5P互补结合的miRNAs,Real-time PCR及双荧光素酶报告实验验证SPATA31D5P对miR-320a的调控作用。结果乳腺癌组织中SPATA31D5P水平显著高于邻近正常乳腺组织,各乳腺癌细胞系中SPATA31D5P表达都高于正常乳腺上皮细胞MCF10 A。siRNA干扰组的SPATA31D5P水平为0.288±0.052,低于空白对照组的1.114±0.096和阴性对照(NC)组的1.079±0.128(P<0.01)。与NC组和空白对照组相比,干扰组MDA-MB-231细胞的增殖活力明显下降并出现G_(1)期阻滞,凋亡率明显增加(P<0.01);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(14.36±1.75)%和(26±1.52)个,低于NC组的(52.25±1.87)%和(67.33±2.91)个(P<0.01)。双荧光素酶实验证实,SPATA31D5P能够直接调控miR-320a的表达及荧光素酶活性。结论 SPATA31D5P在乳腺癌中高表达,干扰其表达能有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调控miR-320a有关。

MiR-31-5p在癌症中的研究进展

MicroRNAs(mi RNAs)是一类长度约22个碱基的非编码RNA,通过与mRNA 3'-非翻译区域(3'-UTR)的特定靶位点结合,导致mRNA的降解或翻译抑制参与关键的生物学过程^([1])。大量研究表明,miRNAs在肿瘤组织或细胞中异常表达,可作为癌症诊断、治疗效果和预后评估的分子标志物。人类mi R-31基因位于9p21.3染色体上^([2])。miR-31基因转录后,形成的初级转录本(pri-miR-31)被Drosha复合物加工成具有茎环结构的前体RNA(pre-miR-31),pre-miR-31在Dicer的作用下,进一步裂解为miR-31-5p和miR-31-3p。

结肠恶性病变患者LncRNA MEG3、miR-31表达及与肿瘤相关基因、预后的关系

目的 探究结肠恶性病变患者LncRNA MEG3、miR-31表达及与肿瘤相关基因、预后的关系。方法 选取2017年5月—2020年6月收治的行手术治疗的结肠癌60例作为观察组,另选取同期收治的结肠良性病变60例作为对照组。比较2组LncRNA MEG3、miR-31表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价LncRNA MEG3、miR-31对结肠良恶性病变的鉴别诊断价值,分析结肠癌患者LncRNA MEG3、miR-31表达与增殖基因、侵袭基因的相关性,并比较不同LncRNA MEG3、miR-31表达水平结肠癌患者复发情况。结果 观察组LncRNA MEG3表达低于对照组,miR-31表达高于对照组(P<0.01)。LncRNA MEG3、miR-31联合鉴别诊断结肠良恶性病变的曲线下面积(AUC)为0.931,较单一指标鉴别诊断价值高。结肠癌患者癌组织LncRNA MEG3表达与hTERT、SphK1、LIMK1、PRDX1呈负相关关系(r=-0.632、-0.607、-0.615、-0.674,P<0.01);miR-31表达与hTERT、SphK1、LIMK1、PRDX1呈正相关关系(r=0.598、0.603、0.612、0.607,P<0.01)。结肠癌组织中LncRNA MEG3高表达组1年内复发率低于LncRNA MEG3低表达组,miR-31高表达组1年内复发率高于miR-31低表达组(P<0.05)。结论 结肠癌患者LncRNA MEG3低表达、miR-31高表达,且二者表达与肿瘤恶性程度有关,临床检测LncRNA MEG3、miR-31可用于鉴别诊断结肠良恶性肿瘤。

敲低lncRNA MIR31HG对肝细胞癌细胞黏附、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)MIR31HG对肝细胞癌(HCC)细胞黏附、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法体外传代培养高侵袭性HCC细胞系MHCC97H、低侵袭性HCC细胞系MHCC97L以及人正常肝细胞系LO2,采用RT-qPCR法检测各细胞系lncRNA MIR31HG、miR-361相对表达量,选择lncRNA MIR31HG相对表达量较高的HCC细胞进行后续实验。取HCC细胞,随机分为对照组和敲低组,对照组转染NC siRNA,敲低组转染MIR31HG siRNA,转染6 h更换新鲜培养基,继续培养48 h,采用RT-qPCR法验证转染效率。收集两组转染后细胞,采用细胞-基质黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin等EMT相关蛋白表达。通过LncBase V.2在线软件预测lncRNA MIR31HG与miR-361的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MIR31HG与miR-361的靶向调控关系。结果MHCC97H、MHCC97L细胞lncRNA MIR31HG相对表达量均高于LO2细胞,miR-361相对表达量均低于LO2细胞(P均<0.05);MHCC97H细胞lncRNA MIR31HG相对表达量高于MHCC97L细胞,miR-361相对表达量低于MHCC97L细胞(P均<0.05)。因此,选择MHCC97H细胞进行后续实验。敲低组lncRNA MIR31HG相对表达量低于对照组(P<0.05)。敲低组细胞黏附、侵袭和迁移能力均低于对照组(P均<0.05)。敲低组E-cadherin蛋白表达高于对照组,N-cadherin、Fibronectin蛋白表达均低于对照组(P均<0.05)。经LncBase V.2在线软件预测,lncRNA MIR31HG存在与miR-361的结合位点;双荧光素酶报告基因实验证实,转染MIR31HG WT+miR-361 mimics的HCC细胞荧光素酶活性低于转染MIR31HG WT+NC mimics的HCC细胞(P<0.05),而转染MIR31HG MUT+miR-361mimics与MIR31HG MUT+NC mimics的HCC细胞荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论HCC细胞lncRNA MIR31HG高表达;敲低lncRNA MIR31HG则能抑制HCC细胞的黏附、侵袭和迁移以及EMT,其机制可能与lncRNA MIR31HG能够靶向调控miR-361有关。

卵巢癌组织中lncRNA-PVT1、miR-31的表达变化及其临床意义

目的观察卵巢癌组织中长链非编码RNA浆细胞瘤移位基因1(lncRNA-PVT1)、微小RNA-31(miR-31)的表达变化,并探讨其临床意义。方法卵巢癌患者93例,均接受手术治疗,术中留取癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测卵巢癌组织及癌旁组织中lncRNA-PVT1、miR-31,采用Pearson线性相关分析法分析卵巢癌组织中lncRNA-PVT1、miR-31表达的相关性,分析lncRNA-PVT1、miR-31表达与卵巢癌患者临床病理参数的关系。结果卵巢癌组织中lncRNA-PVT1、miR-31的相对表达量分别为3.10±0.24、0.53±0.12,癌旁组织中lncRNA-PVT1、miR-31的相对表达量分别为1.02±0.17、0.94±0.14,两者相比,P均<0.05。卵巢癌组织中lncRNA-PVT1、miR-31表达呈负相关关系(r=-0.672,P=0.012)。癌组织中lncRNA-PVT1、miR-31表达与卵巢癌患者肿瘤FIGO分期、腹膜转移及淋巴结转移有关(P均<0.05)。结论卵巢癌组织中lncRNA-PVT1高表达、miR-31低表达,两者负相关,有可能成为新的卵巢癌诊断标志物,可用于辅助判断卵巢癌的进展情况。

血清LncRNA TINCR、miR-31表达水平与妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的关系

目的探讨血清长链非编码RNA(LncRNA)TINCR、微小RNA-31(miR-31)表达水平与妊娠期糖尿病(GDM)胰岛素抵抗(IR)的关系。方法回顾性选取2019年5月至2021年12月首都医科大学大兴教学医院收治的98例经口服葡萄糖耐量试验(OGTT)判定为GDM的患者为GDM组,并纳入同期98名经OGTT确定为正常糖耐量(NGT)的孕妇为NGT组。比较两组临床资料、血清LncRNA TINCR、miR-31、白细胞介素(IL)-10、IL-17水平及稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);分析GDM患者血清LncRNA TINCR、miR-31表达水平与IL-10、IL-17、HOMA-IR,及血清LncRNA TINCR表达水平与miR-31的相关性;分析HOMA-IR的影响因素。结果GDM组患者空腹血糖、甘油三脂、空腹胰岛素(FINS)、miR-31、IL-17水平、HOMA-IR分别为(6.16±2.05)mmol/L、(2.97±0.99)mmol/L、(13.64±4.55)mIU/L、2.15±0.72、(118.72±39.57)ng/L、3.73±0.93,均高于NGT组[(4.73±1.58)mmol/L、(2.08±0.69)mmol/L、(6.80±2.27)mIU/L、1.01±0.34、(45.13±15.04)ng/L、1.43±0.36],血清LncRNA TINCR、IL-10水平分别为0.52±0.17、(154.38±51.46)ng/L,均低于NGT组[1.04±0.35、(195.62±65.21)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM患者血清LncRNA TINCR表达水平与IL-10呈正相关(r=0.509,P<0.05),与IL-17、HOMA-IR呈负相关(r=-0.532、-0.497,P<0.05);而GDM患者血清miR-31表达水平与IL-10呈负相关(r=-0.483,P<0.05),与IL-17、HOMA-IR呈正相关(r=0.540、0.462,P<0.05)。GDM患者血清LncRNA TINCR表达水平与miR-31呈负相关(r=-0.587,P<0.05);LncRNA TINCR、miR-31、空腹血糖、FINS、IL-10、IL-17是HOMA-IR的影响因素(P<0.05)。结论GDM患者血清LncRNA TINCR表达水平较低,miR-31表达水平较高,均与HOMA-IR、IL-10、IL-17显著相关,为临床预防GDM IR提供新策略。

结直肠癌中miR-31的表达及预测靶基因的生物信息学分析

目的检测micro RNA-31(mi R-31)在结直肠癌中的表达及功能,预测其靶基因并进行生物信息学分析,为研究其作用和调控机制奠定基础。方法采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(q RT-PCR)检测8种结肠癌细胞株、40例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者癌组织及匹配的正常黏膜组织及33例结直肠腺瘤组织中mi R-31的表达情况,并分析癌组织中mi R-31表达与患者临床特征的关系。MTS法观察转染mi R-31模拟物(mimics)组、抑制剂(inhibitor)组和对照组(mi RControl)及空白细胞组细胞生长的差异,Western blot检测空白细胞组、mi R-31 mimics和inhibitor三组细胞PCNA蛋白的表达。Target Scan、DIANA-micro T、mi Randa等软件预测mi R-31的靶基因,并进行KEGG功能和信号通路富集分析。结果 mi R-31在8种结肠癌细胞株中高表达,同时CRC患者癌组织中的表达高于腺瘤及正常黏膜组织(P<0.05)。其中癌组织和匹配的正常黏膜相比,mi R-31表达明显上调(P=0.035),但腺瘤和正常黏膜相比,差异无统计学意义(t=0.122,P=0.904)。mi R-31的表达与临床病理特征间未见明显关系(P均>0.05)。转染mi R-31 mimics后,mi R-31的表达明显上调且和mi R-Control组及空白细胞组相比,mi R-31 mimics组细胞生长加快;而转染mi R-31 inhibitor组mi R-31表达显著降低,细胞生长活力明显受抑制。同时转染mi R-31 inhibitor组PCNA蛋白表达较mi R-31 mimics组和空白细胞组显著降低。生物信息学分析mi R-31靶基因功能集中于转录后及翻译水平的调节、细胞连接、迁移及细胞运动等生物学过程。信号通路主要富集于内吞作用、轴突导向、T细胞受体信号通路、Wnt及MAPK信号通路。结论 mi R-31在结直肠癌中高表达,且mi R-31可以促进细胞生长和增殖,其靶基因可能通过调节多种生物学过程发挥作用。

系统性红斑狼疮患者外周血细胞miR-31的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血细胞微小RNA(miR-31)的表达及其临床意义。方法以36例SLE患者和23名健康对照者作为研究对象,采集外周静脉ACD抗凝血,Real-TimePCR检测miR-31表达。分析SLE患者疾病活动指数(SLEDAI)、肾脏受累程度指标(Renal-SLEDAI积分)及临床用药与外周血细胞miR-31表达的相关性。结果 SLE患者的外周血细胞miR-31表达显著低于健康对照者,差异有统计学意义(P<0.001)。SLE患者的外周血细胞miR-31表达与SLEDAI积分和Renal-SLEDAI积分呈显著负相关(r=-0.330,P=0.043;r=-0.337,P=0.044),与临床用药情况无显著相关性(P>0.05)。结论 SLE患者外周血细胞miR-31表达水平与疾病活动及肾脏损害程度相关,作为重要生物标志物有可能为SLE的早期诊断、治疗和预后评估提供一定的依据。

miRNA-31在肿瘤研究中的新进展

微小RNAs（microRNAs,miRNAs）是一类长度为19～23个核苷酸的可调控基因表达的内源性非编码单链RNA分子,广泛存在于真核生物中。多数的人miRNAs位于蛋白编码基因的内含子或非编码miRNA转录片段中,其余miRNAs在基因组中离其他转录本较远,如位于非编码miRNA基因的外显子中,或miRNA基因的3＇端非翻译区（UTR）或成群聚集在其他miRNAs基因中[1]。

MicroRNA-31在肝癌中的肿瘤抑制作用

目的分析微小RNA-31(MicroRNA-31)在肝癌中的肿瘤抑制作用和影响机制。方法选取2014年6月至2016年1月收治的HBV感染者为研究对象,依照患者病情分为急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组、肝癌组,另外选取同期健康体检人员30例作为健康组,采集患者外周静脉血,测定MicroRNA-31表达情况。肝癌手术患者留取肝癌组织和癌旁正常组织,细胞转染,实施平板克隆形成实验。选取健康裸鼠,在无菌条件正常饮食下,将转染肝癌组织经皮下注射置入裸鼠,3 w后处死,取出肿瘤组织,测量体积。同时开展Western印迹,采用实时荧光RNA和免疫组织化学法测定观察。结果感染HBV后,细胞MicroRNA-31存在高表达情况,肝癌组患者组织核细胞MicroRNA-31表达显著高于其他组(P<0.05)。平板克隆实验测定,转染MicroRNA-31的肿瘤细胞克隆数增殖减少50%(P<0.05)。体外成瘤实验,转染MicroRNA-31后的肝癌细胞成瘤能力下降,而且肿瘤体积缩小。Western印迹检测,细胞转染后,LATS2表达水平提高1.5倍,PPP2R2A表达无明显变化,转染LATS2siRNA细胞中LATS2表达显著下降(P<0.05)。MicroRNA-31表达与LATS2呈现负相关(P<0.05)。免疫组织化学法检测显示,肝癌组织中LATS2表达水平显著低于正常组织。结论肝癌组织中MicroRNA-31可能通过调节LATS2抑制肿瘤增殖,MicroRNA有望成为分子指标靶向药物。

miR-31与宫颈癌淋巴转移的相关性研究

目的:研究微RNAs(miRNAs)差异表达与宫颈癌淋巴转移的关系,寻找早期预测淋巴转移的分子标志物及判断患者预后的指标,探讨宫颈癌淋巴转移可能的作用机制。方法:应用安捷伦(Agilent)Human miRNAs V16.0基因芯片检测宫颈癌淋巴转移组与非淋巴转移组的差异表达miRNAs基因,筛选宫颈癌淋巴转移相关miRNAs,并采用实时荧光PCR技术(Real-time PCR)验证芯片结果的准确性,用生物信息学法分析其作用靶点。结果:宫颈癌淋巴转移组中,共筛选出3个显著下调的miRNAs(P<0.05):hsa-miR-31、hsa-miR-31*、hsa-let-7d。其中,hsa-miR-31是宫颈癌淋巴转移组下调最显著的miRNAs。实时荧光PCR验证结果与芯片结果基本吻合。结论:hsa-miR-31抑制肿瘤细胞生长、迁移,在淋巴转移宫颈癌组织中的表达明显下调,它可能成为宫颈癌淋巴转移的分子标志物及治疗靶点。

miR-876-5p通过靶向FBXO31促进卵巢癌细胞增殖和侵袭的机制

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-876-5p通过靶向F-box蛋白31(FBXO31)促进卵巢癌细胞增殖和侵袭的机制。方法对TCGA数据库中,miR-876-5p和FBXO31在卵巢癌患者中的表达特点和与预后的关系进行分析。通过双荧光素酶报告验证miR-876-5p靶向FBXO31。将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+FBXO31组和FBXO31组。通过质粒转染技术过表达miR-876-5p和(或)FBXO31。qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞生长和侵袭能力。通过荷瘤裸鼠实验在体内验证miR-876-5p和FBXO31对肿瘤生长的影响。结果在TCGA数据库中,miR-876-5p高表达的患者的生存率显著低于miR-876-5p低表达患者(P<0.05)。卵巢癌患者FBXO31水平显著降低,卵巢癌分期的越高FBXO31水平越低,并且FBXO31高表达卵巢癌患者的生存率显著高于FBXO31低表达(P<0.05)。miR-876-5p直接靶向FBXO31。过表达miR-876-5p抑制FBXO31 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05),过表达FBXO31显著逆转miR-876-5p对FBXO31的抑制作用(P<0.05)。Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P<0.05),FBXO31组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.05),并且mimic+FBXO31组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于mimic组(P<0.05)。miR-876-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著高于对照组(P<0.05),miR-876-5p+FBXO31组肿瘤体积和质量显著低于miR-876-5p组(P<0.05)。结论miR-876-5p具有促进卵巢癌进展的作用,而FBXO31可能抑制卵巢癌进展。miR-876-5p直接靶向FBXO31,并且miR-876-5p过表达可通过抑制FBXO31促进卵巢癌细胞生长、侵袭,起到抑制卵巢癌生长的作用。

miR-31改善2型糖尿病小鼠的肝损伤

2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)是一种代谢性疾病,在世界范围内发病率逐年增高,会导致肝等多种组织器官损伤。miR-31在不同物种间是保守的,与代谢性疾病密切相关,但在2型糖尿病肝损伤中的作用尚未阐明。本研究的目的为探究miR-31对2型糖尿病肝损伤的影响及其潜在的作用机制。取4~6周龄雄性FVB小鼠与筛选为阳性的过表达miR-31转基因小鼠,随机分为FVB小鼠对照组(C)、FVB小鼠诱导糖尿病组(DM)和过表达miR-31转基因小鼠诱导糖尿病组(31DM)。适应性喂养1周,采用高脂喂养联合腹腔注射链脲佐霉素(STZ)诱导T2DM小鼠模型,继续喂养6周。小鼠的一般情况及相关代谢指标显示,miR-31改善了T2DM小鼠的摄食饮水量升高,体重减轻及糖脂代谢紊乱。HE染色及肝组织学活动指数(histological activity index,HAI)评分结果显示,miR-31改善了T2DM小鼠肝组织中的炎症状况,降低了HAI评分。RT-qPCR结果显示,T2DM小鼠肝中miR-31高表达伴随转录激活因子6(activating transcription factor 6,ATF6)mRNA的表达降低。进一步Western印迹结果表明,miR-31抑制了T2DM小鼠肝中内质网应激相关蛋白质,例如ATF6、葡萄糖调节蛋白78(glucoregulatory protein 78,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的表达。综上所述,miR-31可能通过调节糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗,抑制ATF6、GRP78和CHOP等内质网应激因子,从而改善T2DM小鼠的肝损伤。

MiR-31促进人牙髓间充质干细胞增殖和迁移

牙髓炎和根尖周炎是口腔科目前较为常见的2种疾病,现有的治疗方案主要包括根管治疗和牙髓血运重建,能有效控制住炎症进而保存患牙,然而同时也会导致牙髓组织的永久失活,发生结构故障和继发感染。近年来,结合干细胞和生物材料等的组织工程技术使牙髓再生的研究逐渐进入人们的视野,其中从恒牙或乳牙中分离的牙髓间充质干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs),因其多向分化和高增殖等特性已成为牙本质或者髓样组织再生的重要的干细胞来源。但是由于干细胞不能高效募集到损伤区域,影响受损区的活细胞数量和存活时间,显著降低了其应用疗效,因此,需要提高牙髓干细胞的迁移和增殖能力,本研究旨在探讨微核糖核酸31(microRNA-31,miR-31)能否有效提高DPSCs的增殖迁移能力。通过组织块酶消化法从牙髓组织中成功分离培养了DPSCs,比较了分别取自健康牙与炎症牙的牙髓组织和DPSCs中miR-31水平的差异,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测的结果显示,与健康牙比较,炎症牙来源的牙髓组织和DPSCs中miR-31表达水平明显降低(P<0.05)。干扰和过表达DPSCs中的miR-31表达,具体分为NC组、miR-31 agomir(过表达)组和miR-31 antagomir(抑制剂)3个组,RTq-PCR结果显示,其转染成功(P<0.001)。CCK-8、细胞划痕以及Transwell迁移结果表明,与对照组相比,过表达miR-31成功提高了牙髓干细胞的增殖和迁移能力(P<0.05),且进一步通过Western印迹结果发现,过表达miR-31后增殖关键蛋白质增殖抗原(Ki67)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及迁移关键蛋白质CXC趋化因子受体4型(CXC chemokine receptor type 4,CXCR4)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP2)的蛋白质水平均显著升高(P<0.05)。本研究表明,miR-31能有效提高DPSCs的增殖迁移能力,以期为DPSCs更好应用于再生医学提供了有力的理论支持。

miR-31或将成为肺癌治疗新靶标

近日,来自美国的研究人员在国际学术期刊JCI上发表了一项最新研究进展,他们发现mi R-31在人类肺腺癌中存在过表达,对于促进肺癌发生和进展具有重要作用。这一发现为肺癌靶向治疗药物开发提供了一个新的潜在靶点。肺癌是导致癌症死亡的重要癌症类型之一,而腺癌是非小细胞肺癌的主要亚型,在肺癌形成和进展过程中存在许多基因调控方面的巨大变化。Micro RNA是一类非编码RNA,这种RNA主要通过结合3`端非翻译区,导致翻译水平下降或促进靶向m

微小RNA miR-21和miR-31在口腔鳞癌组织中的表达及意义

目的:检测口腔鳞癌中微小RNA miR-21和miR-31的表达,探讨其与肿瘤发展的关系。方法:应用实时荧光定量PCR的方法检测72例口腔鳞癌,38例正常口腔粘膜miR-21和miR-31的表达,统计学分析其表达与肿瘤临床分期和病理分型的关系。结果:①口腔鳞癌组织与对照组比较,微小RNA miR-21和miR-31的表达都有显著增高(P<0.05),其中miR-21的增高更为显著(P<0.001)。②统计学分析表明,miR-21的表达在晚期鳞癌组织较早中期鳞癌组织增高更为显著(P<0.01),在低分化鳞癌组织较中、高分化鳞癌组织增高更为显著(p<0.001);MiR-31的表达水平在不同肿瘤临床分期和病理分型鳞癌组织中无明显差异(P>0.05)。结论:miR-21和miR-31在口腔鳞癌发生发展过程中表达有明显增高,其中miR-21表达水平可作为潜在的口腔鳞癌临床分期分级和预后的指标。