血清微小RNA-19b-3p、微小RNA-933水平对老年慢性心力衰竭患者心功能及预后的评估价值

目的 探讨血清微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)、微小RNA-933(miR-933)水平对老年慢性心力衰竭患者心功能、预后的评估价值。方法 选取收治的108例老年慢性心力衰竭患者作为研究组。研究组中,根据纽约心脏学会(NYHA)分级,分为Ⅱ级患者35例,Ⅲ级患者40例,Ⅳ级患者33例。选择同期体检的90例健康人群作为对照组。入院后检测血清miR-19b-3p、miR-933水平。采用超声心动图测量心功能指标[左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)]。采用Pearson相关分析法分析血清miR-19b-3p、miR-933水平与心功能的关系。根据老年慢性心力衰竭患者入院1年内是否发生终点事件分为发生组(n=34)和未发生组(n=74)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-19b-3p、miR-933对老年慢性心力衰竭预后的预测价值。采用多因素Cox回归分析法分析老年慢性心力衰竭患者预后的影响因素。结果 研究组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心功能分级Ⅳ级患者血清miR-19b-3p、miR-933及LVEF水平低于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,LVEDD大于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,差异有统计学意义(P<0.05)。老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.554、-0.368,P<0.001);血清miR-933水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.505、-0.410,P<0.001)。发生组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-19b-3p、miR-933预测老年慢性心力衰竭患者预后的曲线下面积(AUC)为0.835(95%CI:0.785~0.885)、0.843(95%CI:0.790~0.890),二者联合预测的AUC为0.901(95%CI:0.851~0.951)。血清miR-19b-3p(HR=3.762,95%CI:1.854~7.634)、miR-933(HR=3.480,95%CI:1.903~6.364)及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分(HR=3.047,95%CI:1.837~5.051)为老年慢性心力衰竭患者预后不良的影响因素(P<0.05)。结论 老年慢性心力衰竭患者的血清miR-19b-3p、miR-933水平均呈低表达。miR-19b-3p、miR-933水平变化与心功能及预后密切相关,其可作为预测老年慢性心力衰竭患者预后不良的有效指标。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

miR-19b对冠心病大鼠血管内皮细胞损伤的影响及PTEN/PI3K/AKT信号通路的作用

目的探讨微小RNA(miR)-19b对冠心病大鼠血管内皮细胞损伤的影响及磷酸酶及张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路的作用。方法选取72只大鼠随机分为正常组、模型组、模拟对照物(NC)组、miR-19b组、miR-19b+质粒互补DNA(pcDNA)3.1组、miR-19b+PTEN组。采用高脂饲料+垂体后叶素建立冠心病模型,尾静脉注射miR-19b mimic、pcDNA3.1-PTEN慢病毒液构建miR-19b、PTEN过表达大鼠。采用荧光定量聚合酶链反应检测冠状动脉组织miR-19b和PTEN信使RNA(mRNA)水平,测定大鼠心功能,观察大鼠冠状动脉病理变化,检测心肌组织细胞凋亡情况、血管内皮功能、冠状动脉中PTEN/PI3K/AKT信号通路、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase)-3、cleaved Caspase-9水平。分离培养冠心病大鼠冠状动脉内皮细胞,根据转染方式分为野生型质粒(WT)+NC组、WT+miR-19b mimic组、突变型质粒(MUT)+NC组、MUT+miR-19b mimic组,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-19b与PTEN的靶向关系。将冠心病大鼠冠状动脉内皮细胞分为正常细胞组、NC细胞组和miR-19b细胞组,检测PTEN mRNA和PTEN蛋白水平。结果miR-19b组左心室射血分数(LVEF)、miR-19b、血清血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)/PI3K蛋白、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/AKT蛋白水平高于模型组,左心室收缩末期容积(LVESV)、舒张末期容积(LVEDV)、细胞凋亡率、cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9、PTEN mRNA、内皮素-1(ET-1)、PTEN蛋白水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-19b+PTEN组LVESV、LVEDV、细胞凋亡率、PTEN mRNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、ET-1、VEGF、PTEN蛋白水平高于miR-19b组,LVEF、NO、p-PI3K/PI3K蛋白和p-AKT/AKT蛋白水平低于miR-19b组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组LVEF、miR-19b、VEGF、NO、p-PI3K/PI3K蛋白、p-AKT/AKT蛋白水平低于正常组,LVESV和LVEDV、细胞凋亡率、PTEN mRNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、ET-1、PTEN蛋白水平高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠冠状动脉内皮细胞排列紊乱,并伴有明显的水肿。与模型组比较,miR-19b组冠状动脉组织病理损伤明显减轻。WT+miR-19b mimic组细胞中荧光素酶相对活性低于WT+NC组、MUT+NC组、MUT+miR-19b mimic组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-19b mimic细胞组PTEN mRNA和PTEN蛋白水平低于正常细胞组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-19b靶向抑制PTEN,激活PI3K/AKT信号通路,保护冠心病大鼠心功能和血管内皮功能,减少心肌细胞凋亡。

基于lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的干预效应及机制

目的基于lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制。方法60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型。将成模小鼠随机分为模型组、顺铂组和中药低、中、高剂量联合顺铂组,每组10只,顺铂组予顺铂5 mg/kg腹腔注射,中药低、中、高剂量联合顺铂组予归芪益元膏1.75、3.5、7.0 g/kg灌胃联合顺铂5mg/kg腹腔注射,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续14d。观察小鼠一般状况,测量小鼠瘤质量并计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织病理形态,检测肿瘤组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O_(2))、亚铁离子(Fe^(2+))含量,免疫组化和Western blot检测肿瘤组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤组织lncRNAH19、miR-19b3p mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数均降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠一般状况不同程度改善,瘤质量减少(P<0.05),脾脏指数及胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤细胞溶解、破裂、数量减少,肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3pmRNA表达升高(P<0.05);与顺铂组比较,中药高剂量联合顺铂组小鼠瘤质量减少(P<0.05),体质量、脾脏指数和胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05)。结论归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠具有明显抑瘤作用,其作用机制可能与调节lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴相关铁死亡分子表达有关。

lncRNA H19靶向miR-4735-3p激活NF-κB信号通路调控宫颈癌顺铂耐药

目的揭示lncRNA H19调控宫颈癌细胞顺铂(DDP)耐药的作用及分子机制。方法体外建立顺铂耐药的宫颈癌细胞株HeLa/DDP。qRT-PCR检测H19和miR-4735-3p的表达。CCK-8实验检测不同浓度DDP作用下细胞的增殖抑制率,计算IC50值。克隆形成实验评估细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和c-Caspase3(c-Casp3)及NF-κB信号通路蛋白(p-IκBα/IκBα和p-p65/p65)的表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA交互沉降实验验证H19和miR-4735-3p之间的靶向关系。结果H19在HeLa/DDP细胞中高表达。敲低H19增强HeLa/DDP对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡。H19能够与miR-4735-3p靶向结合,敲低H19上调HeLa/DDP细胞中miR-4735-3p的表达。过表达miR-4735-3p增强HeLa/DDP对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡。抑制miR-4735-3p能够逆转H19敲低对HeLa/DDP顺铂敏感性的增强作用。敲低H19通过靶向miR-4735-3p抑制p-IκBα和p-p65蛋白表达。结论H19通过靶向miR-4735-3p,抑制NF-κB通路活性,增强HeLa/DDP细胞的顺铂敏感性。

盆底功能障碍性疾病患者血清miR-4429和miR-19-3p水平表达及临床价值研究

目的探究盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunctional disease,PFD)患者血清微小RNA(microRNA,miR)-4429和微小RNA(microRNA,miR)-19-3p水平表达及意义。方法选取2021年6月~2022年6月衡水市第二人民医院收治的PFD患者90例作为PFD组,分为盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)组(n=50)、压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)组(n=25)和POP并发SUI组(n=15);并选取同期在衡水市第二人民医院检查的健康女性80例为对照组。比较对照组与PFD组分娩方式、既往流产史、PFD家族史等一般资料。比较各组血清miR-4429和miR-19-3p水平。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-4429,miR-19-3p水平对PFD的诊断价值。Logistic回归分析影响PFD的因素。配对样本t检验比较PFD治疗前后血清miR-4429,miR-19-3p水平变化。结果PFD组在分娩方式、既往流产史、PFD家族史方面与对照组相比差异均有统计学意义(t=4.415,6.444,4.707,均P<0.05)。PFD组血清miR-4429水平较对照组降低(0.71±0.19 vs 1.00±0.25),miR-19-3p水平较对照组升高(1.44±0.35 vs 1.01±0.28),差异具有统计学意义(t=8.927,8.772,均P<0.05)。POP组和SUI组血清miR-4429水平高于POP并发SUI组(0.73±0.22,0.74±0.16 vs 0.59±0.16),POP组和SUI组血清miR-19-3p水平低于POP并发SUI组(1.35±0.39,1.41±0.31 vs 1.77±0.56),差异具有统计学意义(t=3.531,3.411;5.003,3.865,均P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-4429,miR-19-3p可辅助评估是否发生PFD的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.805,0.825,二者联合检测的AUC为0.865。多因素分析显示,miR-19-3p是影响PFD的危险因素,miR-4429是保护因素。经过治疗发现,PFD患者血清miR-4429水平升高(0.93±0.23 vs 0.71±0.19),miR-19-3p水平降低(1.12±0.29 vs 1.44±0.35),差异具有统计学意义(t=6.996,6.679,均P<0.05)。结论PFD患者血清miR-4429水平降低,miR-19-3p水平升高,血清miR-4429,miR-19-3p水平与PFD疾病的发生发展密切相关,可作为预测PFD的评估指标。

微小RNA-19a-3p对充血性心力衰竭模型大鼠心肌纤维化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-19a-3p(miR-19a-3p)对充血性心力衰竭(CHF)模型大鼠心肌纤维化的影响及机制。方法:将60只SD大鼠随机分为NC组、Model组、NC agomir组(尾静脉注射NC agomir)、miR-19a-3p agomir组(尾静脉注射miR-19a-3p agomir)、miR-19a-3p agomir+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C组(尾静脉注射miR-19a-3p agomir和250μg/kg Compound C),每组12只。NC组仅暴露腹主动脉而不结扎,其他组均构建CHF模型。给药结束后,比较各组大鼠血流动力学参数[左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)]和心脏功能指标[左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、室间隔厚度(IVS)、左心室功能(LVEF)]。Masson染色检测心肌纤维化情况。Western blot检测大鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、转化生长因子-β(TGF-β)及通过调控AMPK/沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路相关蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠心肌组织miR-19a-3p的相对表达量。结果:与NC组比较,Model组大鼠心肌纤维化程度加重,LVSP、+dp/dtmax、LVEF、miR-19a-3p表达水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达降低,LVESD、LVEDD、IVS及CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β蛋白表达升高(均P<0.05)。与Model组、NC agomir组比较,miR-19a-3p agomir组大鼠心肌纤维化程度改善,LVSP、+dp/dtmax、LVEF、miR-19a-3p表达水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达升高,LVESD、LVEDD、IVS及CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β蛋白表达降低(均P<0.05)。与miR-19a-3p agomir组比较,miR-19a-3p agomir+Compound C组大鼠心肌纤维化程度加重,LVSP、+dp/dtmax、LVEF及p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达降低,LVESD、LVEDD、IVS及CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β蛋白表达升高(均P<0.05),而miR-19a-3p表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达miR-19a-3p可能通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α通路抑制CHF大鼠心肌纤维化。

血清miR-142-3p、HMGB1水平与急性胰腺炎患者病情及预后的关系

目的探讨急性胰腺炎(AP)患者血清微小核糖核酸-142-3p(miR-142-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平与病情及预后的关系。方法选取AP患者253例(AP组),健康体检者100名(对照组),根据病情将AP患者分为轻症组73例、中度重症组99例、重症组81例,根据预后将AP患者分为死亡组25例、存活组228例。分别于AP组入院时、对照组体检时用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-142-3p,用酶联免疫吸附法检测血清HMGB1;通过TargetScan数据库预测miR-142-3p与HMGB1的结合位点;Pearson相关法分析AP患者血清miR-142-3p、HMGB1表达的相关性;收集AP患者预后相关资料,多因素Logistic回归分析血清miR-142-3p、HMGB1对预后的影响;受试者工作特征曲线分析血清miR-142-3p、HMGB1水平对AP患者死亡的预测价值。结果与对照组比较,AP组血清miR-142-3p水平低,HMGB1水平高(P均<0.05)。miR-142-3p与HMGB1存在结合位点。AP患者血清miR-142-3p水平与HMGB1水平呈负相关(r=-0.732,P<0.05)。轻症组、中度重症组、重症组血清miR-142-3p水平依次降低(P均<0.05),HMGB1水平依次升高(P均<0.05)。AP患者预后的独立危险因素为重症AP、ICU停留时间长、HMGB1水平升高,独立保护因素为miR-142-3p水平升高(P均<0.05)。血清miR-142-3p联合HMGB1预测AP患者预后的曲线下面积为0.900,大于二者单独预测的曲线下面积(P均<0.05)。结论血清miR-142-3p、HMGB1水平变化与AP患者病情和预后有关,二者联合对AP患者预后的预测价值较高。

神经胶质瘤组织中miR-203a-3p、PHOX2B表达水平与临床特征及预后的关系

目的探究神经胶质瘤组织中微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)、配对同源异型盒蛋白2B(PHOX2B)表达水平与临床特征及预后的关系。方法选取2017年6月至2020年4月我院收治的96例神经胶质瘤患者,术中采集切除的胶质瘤组织及相应癌旁组织,采用qRT-PCR和免疫组化法检测胶质瘤组织和癌旁组miR-203a-3p、PHOX2B mRNA表达;采用Pearson法分析miR-203a-3p、PHOX2B mRNA的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-203a-3p、PHOX2B mRNA与神经胶质瘤患者预后的关系;采用COX回归分析影响神经胶质瘤患者预后的危险因素。结果胶质瘤组织miR-203a-3p水平和阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05),PHOX2B mRNA水平和阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson相关性分析,神经胶质瘤患者miR-203a-3p、PHOX2B mRNA水平呈负相关(P<0.05)。miR-203a-3p、PHOX2B与KPS评分、肿瘤组织坏死和WHO分级有关(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线分析得出,miR-203a-3p高表达组生存率显著高于低表达组(P<0.05),PHOX2B mRNA高表达组生存率显著低于低表达组(P<0.05)。COX回归分析表明,miR-203a-3p、PHOX2B mRNA、肿瘤组织坏死和WHO分级是影响神经胶质瘤患者预后的危险因素(P<0.05)。结论在神经胶质瘤中miR-203a-3p表达水平显著降低,PHOX2B mRNA表达水平显著升高,二者与临床特征及预后密切相关。

阿尔兹海默症患者外周血miR-19b-3p和PTEN的表达及临床意义

目的探究阿尔兹海默症(Alzheimer′s disease,AD)患者外周血微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)和磷酸酶及张力蛋白同源物(Phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)的表达及临床意义。方法选取2020年2月-2023年2月新疆医科大学第一附属医院健康管理中心和新疆维吾尔自治区第四人民医院重症医学科收治的97例AD患者纳入AD组,选取同期63例体检健康老年人纳入对照组,检测并比较对照组与AD组血清miR-19b-3p和PTEN mRNA表达水平。根据AD患者不同病情程度分为轻度组和中重度组,采用Logistic回归分析AD病情严重程度的影响因素。采用Spearman相关性分析血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平与AD病情严重程度的相关性。采用ROC曲线分析血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平对AD病情严重程度的预测价值。结果与对照组比较,AD组血清miR-19b-3p、PTEN mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。97例AD患者中59例轻症,25例中症及13例重症。与轻度组比较,中、重度组组血清miR-19b-3p、PTEN mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清miR-19b-3p、PTEN mRNA低水平是影响AD病情严重程度的独立危险因素(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平与AD严重程度均呈负相关(r=-0.610,P<0.05;r=-0.870,P<0.05)。ROC分析结果显示,血清miR-19b-3p、PTEN mRNA水平及二者联合评估AD病情严重程度的AUC值(95%CI)分别为0.757(0.660~0.839)、0.718(0.617~0.804)、0.861(0.776~0.923),二者联合预测效能高于各项单独检测(Z=2.088、2.618,P<0.05)。结论AD患者血清miR-19b-3p、PTEN水平异常降低,与AD病情严重程度呈负相关,miR-19b-3p联合PTEN mRNA检查对于评估AD病情严重程度具有较高价值。

微小RNA-335-5p靶向轴突导向因子3B对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨微小RNA-335-5p(miR-335-5p)靶向轴突导向因子3B(SEMA3B)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:细胞转染分为miR-335-5p NC组、miR-335-5p inhibitor组、pcDNA组、pcDNA-SEMA3B组、miR-335-5p NC+si NC组、miR-335-5p inhibitor+si NC组、miR-335-5p NC+si SEMA3B组、miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组,未转染的Ishikawa细胞作为对照组。生物信息学预测和双荧光素酶法验证miR-335-5p和SEMA3B的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-5p和SEMA3B表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹(WB)检测SEMA3B蛋白表达。结果:miR-335-5p和SEMA3B存在靶向关系,并且在子宫内膜癌组织和Ishikawa细胞中检测到miR-335-5p的高表达和SEMA3B的低表达。与miR-335-5p NC组比较,miR-335-5p inhibitor组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-SEMA3B组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si NC组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),miR-335-5p NC+si SEMA3B组细胞增殖率显著升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si SEMA3B比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率降低、细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与miR-335-5p inhibitor+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。结论:抑制miR-335-5p可靶向激活SEMA3B表达,从而促进子宫内膜癌细胞的凋亡、抑制癌细胞增殖。

槲皮素通过生长抑制特异性基因5调节微小RNA-23a-3p和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制垂体神经内分泌肿瘤的增殖机制

目的:探讨槲皮素对垂体神经内分泌肿瘤(PitNETs)生长的抑制作用及其可能机制。方法:通过Starbase工具预测生长抑制特异性基因5(GAS5)与微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)结合情况,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定GAS5和miR-23a-3p之间的结合关系。体外培养人垂体瘤细胞系RC-4B/C,分为对照组(Control)、槲皮素组(Quercetin)、GAS5抑制组(Si-GAS5)和槲皮素+si-GAS5组(Quercetin+si-GAS5),对比分析槲皮素对GAS5、miR-23a-3p及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响,以及人垂体瘤复苏细胞(RC-4B/C)生长和侵袭能力的影响。结果:Starbase工具预测GAS5与miR-23a-3p结合,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定揭示了GAS5和miR-23a-3p之间的直接结合。槲皮素促进GAS5的表达,抑制miR-23a-3p和PI3K/AKT的表达,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);下调GAS5、miR-23a-3p表达增多,促进RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);槲皮素可以逆转GAS5下调引起的miR-23a-3p、PI3K/AKT表达增加,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05)。结论:槲皮素可能通过促进GAS5表达竞争性抑制miR-23a-3p,降低了PI3K/AKT,抑制垂体神经内分泌肿瘤的生长。

miR-519d-3p通过调控Toll样受体4/核因子-κB信号通路对前列腺癌细胞的影响机制研究

目的 探讨通过微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路对前列腺癌细胞的机制研究。方法 于2021年6月购买前列腺癌细胞株PC3,培养至对数时期,随机分为对照组、下调miR-519d-3p组、上调miR-519d-3p组。采用聚合酶链反应检测miR-519d-3p表达情况,对比干预24h、48h、72h细胞增殖、细胞迁移、侵袭率;检测细胞TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达状况。结果 与对照组相比,下调miR-519d-3p组细胞增殖率、细胞侵袭数、迁移数、miR-519d-3p表达量、B淋巴细胞瘤-2基因/Bcl-2相关X基因(Bcl-2/Bax)、TLR4/β-actin、NF-κB/β-actin蛋白表达量上升,细胞凋亡率下降(P<0.05);与下调miR-519d-3p组相比,上调miR-519d-3p组细胞增殖率、细胞侵袭数、迁移数、miR-519d-3p表达量、Bcl-2/Bax、TLR4/β-actin、NF-κB/β-actin蛋白表达量降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论 上调miR-519d-3p可抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能与TLR4/NF-κB信号通路相关。

微小RNA-203b-3p调控多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的 观察微小RNA-203b-3p(miR-203b-3p)通过调节肿瘤坏死因子超家族成员13b(TNFSF13B)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,探讨miR-203b-3p抑制MM的相关机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹分析(Western blot)检测miR-203b-3p和TNFSF13B在骨髓瘤肿瘤和细胞中的表达情况。miR-203b-3p与TNFSF13B的关系采用双荧光素酶报告实验进行验证。Lipofectamine 2000试剂用于MM细胞转染。miR-203b-3p和TNFSF13B对MM细胞生物功能的影响采用克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验进行分析。结果 与癌旁组织及正常细胞比较,MM组织和细胞中miR-203b-3p的表达量相对较低,而TNFSF13B在MM肿瘤和细胞中的表达量与正常组织和细胞相比升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果表明,TNFSF13B是miR-203b-3p的直接靶点。miR-203b-3p在MM细胞中的过量表达能够抑制细胞的增殖和转移,差异有统计学意义(P<0.05),而TNFSF13B的表达上调则促进了MM细胞的增殖、迁移和侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-203b-3p可能通过下调TNFSF13B抑制MM细胞的增殖、侵袭和转移。

尿道癌相关基因1通过微小RNA-513a-3p/细胞色素P_(450)1B1生物学轴促进人胃癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)在人胃癌细胞中的表达,并探讨UCA1通过微小RNA-513a-3p(miR-513a-3p)/细胞色素P_(450)1B1(CYP1B1)生物学轴对胃癌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法分别向人胃癌细胞中转入UCA1小干扰RNA(siRNA)、miR-513a-3p模拟物和miR-513a-3p抑制剂以抑制UCA1、上调miR-513a-3p和抑制miR-513a-3p表达。通过定量PCR检测不同细胞UCA1、miR-513a-3p和CYP1B1 mRNA的表达,CCK8试剂盒检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移。结果与GES-1细胞相比,UCA1在人胃癌细胞HGC-27、SNU-5、AGS、SGC-7901中表达均升高(t=11.106,P<0.001;t=10.872,P<0.001;t=12.134,P<0.001;t=16.178,P<0.001),细胞增殖活性(t=7.252,P<0.001;t=8.964,P<0.001;t=8.666,P=0.003;t=8.697,P<0.001)和细胞迁移能力(t=4.040,P=0.010;t=7.079,P<0.001;t=6.833,P=0.003;t=7.527,P<0.001)均升高。双荧素酶基因报告实验显示miR-513a-3p与UCA1和CYP1B1靶向结合。与NC siRNA组相比,UCA1 siRNA显著下调UCA1和上调miR-513a-3p在SGC-7901细胞中的表达(t=7.895,P<0.001;t=12.911,P<0.001);miR-513a-3p表达上调显著抑制SGC-7901细胞中UCA1和CYP1B1 mRNA表达(t=7.224,P<0.001;t=5.645,P=0.002),而抑制miR-513a-3p则显著上调SGC-7901细胞中UCA1和CYP1B1 mRNA表达(t=9.628,P<0.001;t=11.665,P<0.001)。与单独UCA1敲低的SGC-7901细胞相比,UCA1和miR-513a-3p共同敲低的SGC-7901细胞CYP1B1 mRNA表达、细胞增殖活性和细胞迁移能力均升高(t=3.695,P=0.014;t=4.198,P=0.009;t=3.602,P=0.016)。结论UCA1通过miR-513a-3p/CYP1B1生物学轴促进人胃癌细胞的增殖和迁移。

miR-30a-3p通过靶向调控BAFF在肾癌细胞迁移和血管生成能力中的作用研究

目的:研究微小RNA(miR)-30a-3p对肾细胞癌(RCC)细胞的转移和血管生成表型的影响。方法:结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库提供的RCC中miR-30a-3p表达数据分析miR-30a-3p在RCC细胞系中的表达特征。结合生物信息学网站预测miR-30a-3p与B细胞激活因子(BAFF)3’非翻译区(3’-UTR)的结合。将RCC细胞系ACHN和786O分为LV-miR-30a-3p组[感染过表达miR-30a-3p的慢病毒载体]、LV-NC组[感染慢病毒载体阴性对照]、LV-miR-30a-3p+pcDNA-BAFF组[联合感染LV-miR-30a-3p和过表达BAFF的载体(pcDNA-BAFF)]以及LV-miR-30a-3p+pcDNA-EV组[联合感染LV-miR-30a-3p和空载体(pcDNA-EV)]。Transwell迁移小室法检测细胞的迁移能力,小管形成实验检测细胞血管生成能力。qPCR检测miR-30a-3p的表达。Western blot检测BAFF、促血管生成蛋白血管内皮生长因子A(VEGFA)的蛋白表达。双荧光素酶基因报告实验检测ACHN细胞中的miR-30a-3p对BAFF的靶向调控作用。结果:分析TCGA数据库中数据,与Normal组比,Cancer组的miR-30a-3p表达都显著降低(P<0.05);与HK-2细胞比,ACHN和786O细胞系中miR-30a-3p的表达都明显降低(均P<0.05)。与LV-NC组比,LV-miR-30a-3p组miR-30a-3p表达增加(均P<0.05),LV-miR-30a-3p组的细胞迁移、小管生成、及BAFF和VEGFA表达均下调(均P<0.05)。经过生物信息学预测以及双荧光素酶报告基因实验验证发现BAFF是miR-30a-3p的靶基因。与LV-miR-30a-3p+pcDNA-EV组比较,LV-miR-30a-3p+pcDNA-BAFF组的细胞迁移、小管生成率及BAFF表达均上调(均P<0.05)。结论:miR-30a-3p通过靶向抑制BAFF抑制RCC细胞的迁移和血管生成能力。

乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平对预后的预测价值

目的探讨乳腺癌组织中微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)、同源异型盒基因B3(HOXB3)水平对患者预后的预测价值。方法选取2016年1月至2017年5月于该院就诊的75例乳腺癌患者,收集患者的乳腺癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中miR-10a-5p水平,免疫组织化学染色观察乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3表达,蛋白质印迹法检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3水平;对患者进行5年随访,将生存的59例患者(生存组)记为预后良好,死亡的16例患者(死亡组)记为预后不良;比较乳腺癌组织和癌旁正常组织、生存组和死亡组乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平;采用Spearman相关分析乳腺癌组织miR-10a-5p与HOXB3水平的相关性;采用受试者工作特征曲线评估乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平及二者联合检测对患者5年内死亡的预测价值;采用Logistic回归分析乳腺癌患者5年内死亡的影响因素。结果乳腺癌组织miR-10a-5p水平低于癌旁正常组织,HOXB3高表达比例和HOXB3水平均高于癌旁正常组织(P<0.05);乳腺癌组织miR-10a-5p水平与HOXB3呈负相关(P<0.05);与生存组比较,死亡组低分化、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者比例均较高(P<0.05);死亡组乳腺癌组织miR-10a-5p水平低于生存组,HOXB3高表达比例和HOXB3水平均高于生存组(P<0.05);乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3、二者联合检测预测患者5年内死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.881、0.836、0.948,二者联合检测的AUC优于miR-10a-5p、HOXB3单独检测的AUC(P<0.05);肿瘤分化程度低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、miR-10a-5p低水平、HOXB3高水平均是影响乳腺癌患者5年内死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌组织中miR-10a-5p表达下调,HOXB3表达上调,二者与患者预后密切相关,可作为预测乳腺癌患者预后的指标。

Toll样受体3与人微小病毒B19在桥本氏甲状腺炎发病机理中的作用

目的:探讨Toll样受体3(TLR3)和人微小病毒B19(B19)在桥本氏甲状腺炎(HT)发病机理中的作用,以进一步明确其发病机制。方法:选取33例桥本氏甲状腺炎患者的石蜡标本,分别采用免疫组化SP法及免疫组化双染法检测TLR3和B19在HT中的表达与定位,分析两者与HT发病的关系。结果:TLR3和B19主要表达在HT的甲状腺滤泡上皮细胞内,且大多数(62%)位于同一细胞内。在33例HT病例中,TLR3染色18例以胞浆表达为主,15例以胞核表达为主;B19染色18例主要表达于胞浆,11例主要表达于胞核,4例为阴性表达。统计学分析表明,TLR3和B19在HT中的表达具有相关性(r=0.565,P=0.001)。结论:TLR3和B19在HT甲状腺滤泡上皮细胞呈共表达,表明TLR3可能通过特异性识别人微小病毒B19复制过程中产生的dsRNA,使促炎症因子及辅助刺激分子释放,引起自身免疫性疾病。

miR⁃449a与miR⁃19b⁃3p在急性脑梗死介入取栓前后的水平变化及检测价值

目的探究miR⁃449a与miR⁃19b⁃3p在急性脑梗死介入取栓前后的水平变化及检测价值。方法选取佛山市中医院2019年8月至2021年8月116例急性脑梗死患者作为观察组,另选取同期58例健康体检者作为对照组,比较两组血清miR⁃449a、miR⁃19b⁃3p水平,观察组均行介入取栓治疗,比较观察组介入取栓前、介入取栓后12 h血清miR⁃449a、miR⁃19b⁃3p水平,对比不同预后患者临床资料、介入取栓前后血清miR⁃449a、miR⁃19b⁃3p水平,分析血清miR⁃449a、miR⁃19b⁃3p对预后的影响及预测价值。结果观察组血清miR⁃449a低于对照组,miR⁃19b⁃3p高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组介入取栓后12 h血清miR⁃449a高于介入取栓前,miR⁃19b⁃3p低于介入取栓前,差异有统计学意义(P<0.05);预后不良患者介入取栓后12 h血清miR⁃449a低于预后良好患者,miR⁃19b⁃3p高于预后良好患者,差异有统计学意义(P<0.05);根据介入取栓后12 h血清miR⁃449a、miR⁃19b⁃3p表达均数为界分为低表达与高表达,血清miR⁃449a单独低表达所致预后不良的OR为7.619,miR⁃19b⁃3p单独高表达所致预后不良的OR为3.800,两者同时存在时呈正向交互作用OR为20.583,γ为2.265,为次相乘模型;介入取栓后12 h血清miR⁃449a、miR⁃19b⁃3p两者联合预测预后不良的AUC为0.892(95%CI:0.821~0.942),明显优于两者单独预测(P<0.05)。结论miR⁃449a与miR⁃19b⁃3p在急性脑梗死患者中呈异常表达,介入取栓后早期检测两者水平可作为预测预后不良的重要辅助途径。

皮肤鳞状细胞癌中miR-383-5p、KIF3B mRNA的表达及临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌(cSCC)组织中微小RNA(miRNA)-383-5p、驱动蛋白家族成员3B(KIF3B)mRNA的表达及临床意义。方法选取2016年1月—2021年8月华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科收治手术切除cSCC患者49例,qRT-PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-383-5p、KIF3B mRNA表达。Pearson相关性分析cSCC癌组织中miR-383-5p与KIF3B mRNA表达的相关性。分析miR-383-5p、KIF3B mRNA表达与cSCC患者临床病理参数的关系。ROC曲线分析miR-383-5p、KIF3B mRNA表达对cSCC发生的预测价值。结果与癌旁组织比较,癌组织中miR-383-5p表达降低,KIF3B mRNA表达升高(t=31.868、33.517,P均<0.001)。Pearson相关性分析显示,cSCC癌组织中miR-383-5p与KIF3B mRNA表达呈负相关(r=-0.573,P<0.001)。miR-383-5p、KIF3B mRNA表达与cSCC患者TNM分期、侵袭程度、淋巴结转移有关(P<0.01)。ROC曲线显示,miR-383-5p、KIF3B mRNA及二者联合预测cSCC发生的曲线下面积(AUC)分别为0.807、0.800、0.905,敏感度分别为0.837、0.878、0.735,特异度分别为0.653、0.612、0.918。二者联合预测cSCC发生的AUC大于单独预测(Z=2.936、3.220,P=0.003、0.001)。结论cSCC癌组织中miR-383-5p低表达,KIF3B mRNA高表达,与TNM分期、侵袭程度、淋巴结转移有关,二者可能共同参与cSCC发生发展,可作为cSCC发生预测指标。