miR-122-5p通过靶向Circ_MTM1在HBV相关肝纤维化中的分子机制研究

目的:研究微小核糖核酸microRNA-122-5p (miR-122-5p)对HBV感染相关肝纤维化的作用及分子机制。方法:分别用采用HBsAg、HBeAg酶联免疫吸附剂测定(ELISA)试剂盒和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HBV表面抗原(HBsAg)、抗原(HBeAg)水平以及HBV DNA、HBV共价闭合环状DNA (cccDNA)水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测相应蛋白水平。RT-qPCR检测人肝星状细胞(LX-2细胞)和HBV相关肝纤维化组织细胞中Circ_MTM1、miR-122-5p的表达情况。应用生物信息学软件StarBaseV3.0预测miR-122-5p的可能靶基因,并应用双荧光素酶检测方法判定miR-122-5p对其靶基因Circ_MTM1表达的调节作用。结果:miR-122-5p在HBV相关性肝纤维化组织和细胞中低表达,而Circ_MTM1在HBV相关性肝纤维化组织和细胞中高表达。miR-122-5p靶向下调Circ_MTM1的表达,通过下调Circ_MTM1可抑制HBV相关肝纤维化的进程。结论:miR-122-5p与Circ_MTM1在HBV相关肝纤维化中存在靶向关系,Circ_MTM1通过调控肝纤维化相关蛋白的水平在HBV相关肝纤维化进程中起到启动子作用。

miR-122-5p通过ADAM10基因抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移的研究

目的研究微小核糖核酸122-5p (miR-122-5p)对卵巢癌细胞的作用及机制。方法应用miR-122-5p转染卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,测定转染后细胞活性、集落形成和凋亡情况,以及侵袭迁移能力的变化。应用TargetScan工具预测miR-122-5p的可能靶基因,并应用荧光素酶检测方法判定miR-122-5p对其靶基因表达的调节作用。应用miR-122-5p转染卵巢癌顺铂耐药株A2780/DDP检测转染后顺铂的半数抑制量(IC50)的变化。结果 miR-122-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移,诱导癌细胞的凋亡。这种作用在引入ADAM10基因后得以逆转,证明ADAM10是miR-122-5p的一个重要靶基因。miR-122-5p在人类卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP中表达下调,过表达miR-122-5p能明显降低该细胞株的IC50。结论 miR-122-5p抑制卵巢癌细胞增殖和迁移,并能逆转癌细胞对顺铂的耐药性。

乙肝病毒携带者外周血单核细胞miR-122表达与病毒增殖的关系研究

乙肝病毒携带者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中微小RNA(microRNA,miR)-122的表达情况及其与病毒增殖的关系,目前鲜有报道。本研究通过检测乙肝病毒携带者PBMC中miR-122的表达情况,探讨其与病毒增殖的关系。选取2017年1月~2018年8月石嘴山中心医院内科门诊的58例乙肝病毒携带者为观察组研究对象,按HBeAg的状态将其分为:HBeAg阳性(+)组31例,HBeAg阴性(-)组27例,同期选择健康体检者32例作为对照组,采用时间分辨荧光免疫分析(Timed-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)定量检测乙肝两对半,采用实时定量PCR法检测血清中HBV DNA拷贝数,采用qRT-PCR法检测PBMC中miR-122表达水平,采用Pearson相关性分析分析乙肝病毒携带者PBMC中miR-122水平与血清HBV DNA拷贝数的关系。结果显示,HBeAg(+)组HBV DNA拷贝数显著高于HBeAg(-)组(P<0.05);观察组PBMC中miR-122表达水平显著高于对照组(P<0.001);HBeAg(+)组外周血单个核细胞miR-122表达水平显著高于HBeAg(-)组(P<0.001);乙肝病毒携带者PBMC中miR-122水平与HBV DNA拷贝数呈正相关(r=0.501,P<0.001)。本研究中,与HBeAg(-)乙肝病毒携带者相比,HBeAg(+)乙肝病毒携带者病毒复制活跃,HBV DNA拷贝数升高,miR-122表达上调,提示乙肝病毒携带者PBMC中miR-122表达异常可能与病毒增殖有关。

miRNA-122联合肿瘤标志物在慢性乙肝病毒感染肝硬化及早期肝癌诊断中的价值

目的探究血清miR-122联合肿瘤标志物在慢性乙肝病毒感染肝硬化及早期肝癌中的诊断价值。方法选取2016年7月-2019年10月于滨州市滨城区市立医院进行诊治的慢性乙肝、肝硬化及早期肝癌患者分别为65例、54例、52例为研究对象,所有患者均进行血清肿瘤标志物甲胎蛋白(Alphafetoprotein,AFP)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)检测,qPCR检测血清微小miR-122(microRNA-122,miR-122)水平。分析三者对肝硬化、早期肝癌诊断的价值。结果肝癌组患者中的AFP、CEA分别为(98.64±13.94)ng/ml、(28.86±2.05)ng/ml高于肝硬化组(34.60±11.84)ng/ml、(11.36±2.31)ng/ml和乙肝组(18.38±8.39)ng/ml、(3.57±1.52)ng/ml),肝硬化组患者的肿瘤标志物水平较乙肝组升高(P<0.05)。肝癌组患者血清中的miR-122低于肝硬化组和乙肝组(P<0.001),硬化组患者miR-122也低于乙肝组(P<0.001)。ROC曲线结果显示,对于肝硬化诊断miR-122联合肿瘤标志物检测的诊断效能(AUC=0.813;灵敏度为85.12%;特异性为70.18%)高于肿瘤标志物、miR-122单独检测的效能(P<0.001)。对于早期肝癌诊断miR-122联合肿瘤标志物检测的诊断效能(AUC=0.866;灵敏度为91.23%;特异性为77.19%)高于肿瘤标志物、miR-122单独检测的效能(P<0.001)。结论血清miR-122单项检测在肝硬化、肝癌早期诊断中有一定价值,血清miR-122联合肿瘤标志物检测的诊断效能高于单一指标检测,本研究可为临床肝硬化、早期肝癌的检测提供参考。