用微弹轰击法将GUS基因导入小麦的完整细胞

微弹轰击法将外源DNA导入小麦(Triticum aestivum)未成熟胚和悬浮细胞系的完整细胞。用pCI GUS作报告基因,质粒DNA涂于钨粉微弹表层,用基因枪轰击使微弹穿透细胞壁进入小麦细胞。处理2天后,用X-glucuronide染色,对GUS基因产物的活性进行鉴定,GUS基因表达的细胞呈深蓝色的小点。小麦幼胚表面的蓝点最多可达40～50个,悬浮细胞系中GUS基因表达的细胞较少。试验表明微弹轰击法是小麦组织水平上进行外源基因导入的一个有效途径。试验对微弹轰击的有关参数及条件进行了讨论。

用微弹轰击法将GUS基因导入香蕉茎尖组织细胞

用在弹轰击法将外源ＤＮＡ导入香蕉（Ｍｕｓａ，ｓｐｐ）茎尖细胞，以ＧＵＳ基因作为报告基因，用Ｘ－Ｇｌｕｃ浴液对ＧＵＳ基因表达产物进行组织化学鉴定。样品材料细胞中发现有明显的蓝色斑点，而对照则没有。实验说明用微弹轰击法可以将外源基因导入香蕉茎尖组织并在其中成功表达，这为香蕉的外源基因导入工作提供了新的有效途径．

用高速微弹轰击技术将外源基因导入甜玉米的研究

利用不至自行研制和设计的高速微弹轰击装置将外源新霉素磷酸转移酶（ＮＰＴⅡ）基因和β－葡萄糖苷酸酶（ＧＵＳ）基因导入甜玉米品种甜１３２８的幼胚细胞中，经筛选培养２０～３０天后得到抗Ｇ４１８的抗性愈伤组织。ＮＰＴⅡ点滴分析和ＤＮＡ杂交证明了外源基因在抗性愈伤组织细胞中的整合与表达．

微弹轰击介导转化

渗透压处理促进基因枪介导转化 瑞典农业科学院D.Clapham及其同事研究发现,在微弹轰击前后用渗透处理挪威云杉胚性细胞悬浮培养物可使轰击转移及报道基因表达提高3～20倍。0.25M肌醇或蔗糖对轰击一天后表达率的促进效应比甘露醇+山梨醇约高2倍。脱落酸提高肌醇的效应。轰击10天后测定发现,细胞保存在含有肌醇的培养基上可使基因表达率提高5～12倍,且对生长及其形态学无副作用。

微弹转化葡匐剪股颖使之抗除草剂

Rutegers University的科学家们建立了一种可有效转化商品化葡匐剪股颖品种的系统。稳定整入并嵌合性表达bar(phosphinothricin乙酰转移酶)基因可使之获得对包括Herbiace在内的多种商品化除草荆的活性成份bialaphos的解毒能力。葡匐剪股颖在经多次刈割后可形成分枝细密、质量均一的优质草皮,这是一种用于高尔夫球场保绿的出色的耐冷品种,也可用于航道,高尔夫球场发球地和草坪。 曾有过通过体细胞胚发生作用再生葡匐剪股颖植株和用微弹轰击导入无选择标记的GUS(uidA)基因的报道。而在《Bio/Technology》1994年12期919～923页上叙述的这项研究。

拟南芥ats1A基因启动子的克隆和功能分析

通过PCR扩增,从拟南芥中克隆出ats1A基因启动子(包括叶绿体转运肽),将此启动子与GUS基因相连构建植物瞬时表达载体,用基因枪法将之导入烟草进行瞬时表达。GUS基因检测分析表明,ats1A基因启动子能特异的启动GUS基因在烟草叶片中高效表达。

微弹射击将大麦黄矮病毒外壳蛋白基因转入小麦获可育植株

以小麦品种济南１７７、３８４、４７１的幼胚和济南１７７的胚性愈伤组织为材料，质粒为ｐＰＰＩ２［含大麦黄矮病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因和ＧＵＳ（β－葡萄糖苷酸酶）基因］；ｐＰＰＩ５（含ＣＰ基因）＋ｐＥｍｕＧＮ（含ＧＵＳ基因），用高速基因枪轰击钨粉质粒进入幼胚和胚性愈伤组织细胞．ＧＵＳ基因的瞬间表达平均频率幼胚约为４２％，愈伤组织为１８．５％．转化处理后用ＰＣＲ扩增技术检测植株中ＣＰ基因是否存在并稳定遗传．检测结果表明，来源于幼胚的Ｔ０代转化频率为２～９％（１９９３～１９９４年），并获得Ｔ１、Ｔ２和Ｔ３代稳定表达的转化植株．用愈伤组织转化，其转化频率３月龄者为０．４％；２年龄者为零．潮霉素（Ｈｍ）用于对转化幼胚和愈伤组织的筛选，低浓度时不能抑制非转化细胞的生长，高浓度则使细胞受伤害。

自制基因枪在小鼠活体转基因中的应用

将携带有β－半乳糖苷酶基因的质粒ｐＳＶ－β－Ｇａｌ包裹在直径１～５μｍ的金微粒表面，用自行设计并构建的基因枪加速微弹轰击成年小鼠耳朵及幼鼠腹部皮肤。１～２ｄ后剪下轰击部位组织，用β－半乳糖苷酶的底物Ｘ－Ｇａｌ进行组化检测，在显微镜下看到轰击部位出现许多酶与底物特异反应所形成的深蓝色斑点，证实β－半乳糖苷酶基因转移到了小鼠体内并且获得表达。

抗肝炎转基因枸杞新品种培育的初步研究

以质粒pMVL-HisE制备金粉子弹,通过基因枪轰击枸杞叶片,经壮观霉素筛选获得了抗性完整再生植株,为探索提高转基因植株同质化程度的可能途径,对再生植株在高浓度的壮观霉素选择压下进行了2轮次的再生抗性筛选,并通过腋芽繁殖的方式继代4～6次,并进一步对枸杞叶绿体转化植株进行PCR扩增分子检测,结果初步证明外源抗肝炎病毒基因已经导入转基因枸杞植株体内。

抗肝炎转基因枸杞新品种培育的初步研究

以质粒pMVL-HisE制备金粉子弹,通过基因枪轰击枸杞叶片,经壮观霉素筛选获得了抗性完整的再生植株;为探索提高转基因植株同质化程度的可能途径,对再生植株在高浓度的壮观霉素选择压下进行了2轮次的再生抗性筛选,并通过腋芽繁殖的方式继代4-6次,并进一步对枸杞叶绿体转化植株进行PCR扩增分子检测,结果初步证明外源抗肝炎病毒基因已经导入转基因枸杞植株体内。

玻璃珠促进土壤杆菌介导转化植物

Bidney等人曾报道,在土壤杆菌介导转化前先对组织进行微弹轰击可促进土壤杆菌介导的植物组织的转化。最近,美农部科学家W.S.Grayburn及B.A.Vick提出了一种通过创伤方法来促进土壤杆菌介导转化向日葵的技术。该方法勿需采用微弹轰击所需的专门的设备。 方法是:先除去向日葵的子叶,露出苗尖,将之与玻璃珠一起摇动,使向日葵胚性籽苗受伤,然后将籽苗与一种携带含gus基因质粒的根癌土壤杆菌毒性株共培养。转化后。

植物遗传工程

961071 植物基因克隆的新方法[英]/Sawahel.W.…//Bio-Techniques.-1995,19(1).-106～110,112,114～115[译自DBA,1995,14(17),95-10284] 以鸟枪拯救法和染色体定向的方法为主讨论了产生转基因植物的新方法。