卵巢癌抗独特型微抗体主动免疫治疗卵巢癌动物实验

目的用模拟人卵巢癌抗原并有满意免疫原性的抗独特型微抗体进行临床前动物实验研究。方法将已构建的抗独特型微抗体融合基因在大肠杆菌进行表达,用Westernblot、竞争抑制ELISA进行微抗体活性测定。20只人淋巴细胞免疫功能重建的荷卵巢癌腹腔瘤SCID小鼠分2组,10只用微抗体免疫后取血采用间接ELISA检测Ab3。观察小鼠腹腔积液生成时间、生存期,取脾做流式细胞分析CD4+、CD8+。结果在宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功诱导表达出微抗体,Westernblot结果表明微抗体可同时与COC166-9(6B11的一抗)及羊抗人的IgG1反应。竞争抑制ELISA表明微抗体可模拟原始抗原与一抗结合。微抗体免疫小鼠后可诱导产生Ab3,在末次免疫14d时最高,持续6周降至对照组水平;CD4+/CD8+在末次免疫13d达最高值。对照组和微抗体治疗组小鼠分别在(37.7±5.5)d和(48.6±14.3)d长出血性腹腔积液(P=0.04);两组小鼠生存期分别为(42.5±1.8)d和(59.4±16.8)d(P=0.011)。结论微抗体保留了6B11scFv和人IgG的双重免疫学活性,达到了部分人源化的目的,并有满意的免疫原性,可诱导小鼠产生特异性体液免疫反应,抑制荷瘤小鼠腹腔积液的生成,延长生存期,或许将来可作为卵巢癌疫苗用于临床。

卵巢癌抗独特型单链抗体的人源化——抗独特型微抗体的构建与表达

为了降低人抗鼠抗体反应 ,获得满意的免疫原性 ,将模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体人源化 .采用重叠PCR和基因工程的技术 ,将 6B11ScFv基因的轻链和重链颠倒 ,成为 6B11VL VH.再与人IgG1铰链区和CH3区的基因进行融合 (VL VH CH3) ,构建抗独特型微抗体的原核表达载体 .转化E .coliBL2 1(DE3)后用IPTG诱导表达 .经SDS PAGE分离显示 ,在 5 0kD左右处有一诱导蛋白带 .不连续非变性凝胶电泳显示 ,表达产物分子量为 10 0kD左右 .采用ELISA、竞争抑制实验、West ern印迹对其进行活性测定 .结果表明 ,人源化的抗独特型微抗体具有特异性双价结合卵巢癌单克隆抗体COC16 6 9和识别人免疫球蛋白IgG1的活性 。

卵巢癌抗独特型微抗体疫苗诱导BALB/c小鼠体内抗肿瘤免疫应答的实验研究

背景与目的6B11抗独特型微抗体由模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体(6B11ScFv)融合人IgG1铰链区和CH3区所构成,它具有6B11ScFv和人IgGFc的双重免疫学活性。本研究观察6B11抗独特型微抗体在BALB/c小鼠体内诱导抗肿瘤免疫反应情况,探讨其作为卵巢癌疫苗的可能性。方法用卵巢癌6B11抗独特型微抗体免疫BALB/c小鼠。采用间接ELISA、竞争抑制实验和流式细胞术检测免疫鼠血清。结果6B11抗独特型微抗体免疫小鼠后,在不用佐剂的情况下可诱导小鼠产生较高的Ab3,末次免疫后30天仍持续在较高的水平。分别在末次免疫后4天、14天、24天和30天可刺激小鼠脾脏淋巴细胞CD4+T细胞和CD8+T细胞明显升高。结论6B11抗独特型微抗体可诱导机体产生特异体液免疫和细胞免疫反应,这为抗独特型微抗体疫苗的临床应用提供了一定的实验依据。

6B11抗独特型微抗体负载树突状细胞对卵巢癌细胞系细胞杀伤作用的体外研究

目的 用 6B1 1抗独特型微抗体体外负载树突状细胞 (DC) ,以期诱导出抗原特异性的抗肿瘤免疫反应。方法 分离培养HLA -A2 +健康人外周血树突状细胞 ,培养过程中用 6B1 1微抗体负载 ,无关抗原F (ab)’2负载及未负载组为对照。光镜、电镜下观察树突的形态 ;流式细胞仪检测DC表面分子表达 ;3 H -TdR掺入法测DC刺激自体T细胞增殖 ;51 Cr 6h释放试验测激活的T细胞对卵巢癌细胞系的杀伤。结果 培养的树突细胞有典型形态 ,CD80、CD86、HLA -DR等表面分子呈高表达 (分别为 6 5 %、 86 2 %、 93 7% ) ;6B1 1微抗体负载的DC不仅能刺激自体T细胞的增殖 ,而且其诱导的CTL细胞对HLA -A2 +、OC1 6 6 - 9+卵巢癌细胞系HOC1A有特异性的杀伤 ,结论 6B1 1抗独特型微抗体模拟卵巢癌抗原OC1 6 6 - 9负载树突状细胞在体外可以诱导出抗原特异性的细胞毒T细胞 ,为进一步研究 6B1

微间隙抗体芯片检测试剂盒及生物仪器研发与应用研究

本研究聚焦于微间隙抗体芯片检测试剂盒及其生物仪器的研发与应用,探讨了微间隙抗体芯片的基本原理、工作机制及其制备工艺。通过对该试剂盒的组成、制备工艺、性能检测及质量控制等方面的分析,对其应用效果进行了评价。详细讨论了该系统的设计原理,硬件结构,软件设计和集成优化。实例分析表明,微隙型抗体芯片及其相关仪器对疾病早期诊断具有较高的敏感性与准确性,极大地提高了临床诊断的效率与可靠性。

单侧种植微螺钉支抗体矫治上颌前牙中线偏斜的临床研究

目的研究单侧植入微螺钉支抗体矫治上颌中线偏斜的临床效果。方法选择16例上颌中线偏斜3～5 mm的正畸患者,植入一颗或两颗微螺钉作为支抗,微螺钉植入部位为非中线偏移侧的第一磨牙近中颊侧(需要强支抗的也可在两侧上颌第一磨牙近中植入);非偏移侧用拉簧或链状橡皮圈牵引尖牙、侧切牙,牵引力约100～150 g;偏移侧放置推簧在侧切牙和尖牙之间。结果 16例患者上颌中线都能调整到与面部中线一致,牙弓对称性明显改善,未出现切牙唇倾和上颌平面偏斜情况。调整时间平均4个月。结论利用单侧微螺钉牵引前牙,能有效地矫治上颌中线偏斜。

固相微球双抗体夹心ELISA法检测NDV抗原

用抗新城疫病毒单克隆抗体FN_(29)和FN_(29)—HRP,分别作为捕捉抗体和示踪抗体,建立了MDS—ELISA法检测NDV抗原.FN_(29)为400μg—IgM时,可检出3μg/ml NDV蛋白.MDS—ELISA敏感性高于DFA,DFA阳性的标本,MDS—ELISA亦阳性,MSD—ELISA阳性的部分标本,DFA为阴性.两者符合率92%.人工感染病鸡的组织中NDV抗原检出率为:盲肠扁桃体、肺和肾混合液100%,肾100%,肺90%,肝、脾和盲肠扁桃体均为80%.鸡接种Ⅰ系弱毒疫苗后6天内,部分鸡肺组织中可检出NDV抗原.鸡接种Ⅱ系弱毒疫苗后,在组织中未能检出NDV抗原.该方法特异性强,灵敏度高,快速、经济、简便,克服了DFA需要特殊仪器的限制,易于基层推广应用.

抗α-1C微管蛋白抗体在系统性硬化症中的表达及临床意义

目的:检测抗α-1C微管蛋白(tubulin-α-1C)抗体在系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)患者血清中的表达,并探讨其潜在的临床意义。方法:入组SSc患者62例、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者38例、原发性干燥综合征(primary Sjögren’s syndrome,pSS)患者24例和健康对照组(health control,HC)30例,收集血清,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测各组血清中抗tubulin-α-1C抗体水平。同时,用标准实验室技术测定红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、补体C3、补体C4、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)、抗着丝点抗体(anti-centromere antibodies,ACA)、抗心磷脂抗体(anticardiolipin,aCL)、抗双链DNA抗体(抗dsDNA抗体)、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗Scl-70抗体、抗Ro-52抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、着丝点蛋白A(centromere protein A,CENP-A)、着丝点蛋白B(centromere protein B,CENP-B)等指标。记录雷诺现象和改良的Rodnan评分(modified Rodnan skin score,MRSS)等临床表现来评估SSc的疾病状态,分析抗tubulin-α-1C抗体与其他实验室指标和临床表现的关系。组间计量资料比较采用两独立样本t检验或Mann-Whitney U检验;组间计数资料比较采用卡方检验;采用绘制实验组工作曲线确定抗tubulin-α-1C抗体对诊断SSc最佳截断值并分析其诊断效能,相关性分析采用Spearman相关分析。结果:SSc患者、SLE患者、pSS患者和正常对照组血清中抗tubulin-α-1C抗体水平分别为81.24±34.38、87.84±38.52、59.79±25.24、39.37±18.7,SSc患者血清抗tubulin-α-1C抗体水平显著高于pSS患者和正常对照组,P均小于0.001。SSc患者血清抗tubulin-α-1C抗体水平与SLE组差异没有统计学意义。Spearman相关性分析示抗tubulin-α-1C抗体与SSc炎症和疾病活性标志物ESR正相关(r=0.313,P=0.019),与MRSS正相关(r=0.636,P<0.01)。根据正常对照组表达抗tubulin-α-1C抗体+2s定义阳性阈值为76.77,将SSc患者分为抗tubulin-α-1C抗体阳性组和阴性组,抗tubulin-α-1C抗体阳性组出现雷诺现象的比例明显高于阴性组(71.4%vs.37.5%,P=0.039);抗tubulin-α-1C抗体阳性组中抗Scl-70抗体、ACA抗体和aCL抗体的阳性率也显著高于阴性组(分别为37.9%vs.15.2%,P=0.041;34.5%vs.12.1%,P=0.035;13.8 vs.0,P=0.027)。结论:抗tubulin-α-1C抗体在SSc患者血清中异常升高,可能成为一种新的生物标志物用于SSc的临床诊断和风险预测。

抗体微矩阵玻片经硅酸钠处理后对红细胞血型抗体吸附能力的研究

目的探讨经硅酸钠修饰后用作抗体微矩阵载体的玻璃基片对血型抗体的吸附能力。方法用硅酸钠溶液在玻片上形成一层膜,再酸化以形成硅酸,然后用红细胞血型抗体包被后,以可与其发生特异性抗原抗体免疫反应的对应红细胞作反应指示剂,检测经硅酸钠处理后的玻片对血型抗体的吸附能力,以及血型抗体的免疫活性。结果红细胞血型抗体可以牢固的结合在硅酸钠处理过的玻片上,并且可以与其对应的红细胞抗原发生免疫学反应。结论经硅酸钠处理的玻片对血型抗体有很高的结合效力,同时抗体仍保持很高的免疫活性,因而可充当蛋白质抗体微矩阵基片。

盐酸米诺环素软膏对微种植支抗体周围炎的治疗效果观察

目的观察分析盐酸米诺环素软膏对微种植支抗体周围炎的治疗效果。方法取样分析我院收治的80例种植支抗体周围炎患者,随机配对划为两组,均对两组患者者实施常规治疗,观察组患者40例在常规治疗基础上结合盐酸米诺环素,对照组40例在常规治疗基础上结合采用2%碘甘油治疗,对比分析临床治疗效果。结果观察组、对照组治疗有效率分别为78.6%、89.6%,且治疗后SBI、PD、PLI与治疗前相比,治疗后组间对比,均存在显著差异有统计学意义,P<0.05。结论盐酸米诺环素软膏用于治疗种植体周围炎效果显著,可有效改善牙周疾病,提高患者的生活质量水平。

羊布鲁氏菌病荧光微球抗体测试纸在布病检测净化中的应用

用布鲁氏菌病荧光微球抗体测试纸检N216份羊布病阳性血请，试验结果是，183份为布鲁氏菌病感染，需要扑杀净化，33份为免疫阳性，不用扑杀。通过实验可以看出羊布鲁氏菌病荧光微球抗体测试纸有较好的敏感性和特异性，并且操作简便快速安全，更重要是能区别免疫阳性和布鲁氏菌病感染，对布病阳性监测和净化有很大的用处，是对虎红平板试验的补充和验证，可以大面积推广应用，进一步为布病阳性扑杀提供更有力的依据。

单侧种植微螺钉支抗体矫治上颌前牙中线偏斜的临床研究

目的上颌前牙中线偏斜患者通过单侧种植微螺钉支抗体矫治方法进行治疗,对患者的临床疗效进行研究分析。方法选取重庆市高新区人民医院2017年8月至2019年8月收治的60例上颌前牙中线偏斜的患者作为研究对象,通过随机抽签法分成观察组(n=30)和对照组(n=30)。对照组患者通过传统的强支抗进行矫治治疗,观察组则通过单侧种植微螺钉支抗体进行矫治治疗,比较两组患者的矫治效果[下中切牙切缘到Y轴的距离(L1-Y)、上中切牙切缘到Y轴的距离(U1-Y)、上第一磨牙冠近中点至T轴距离(U6-Y)、下颌平面和下中切牙长轴形成的后上夹角(L1-MP)、上、下中切牙长轴间的夹角(U1-L1)]以及治疗总有效率。结果观察组患者的L1-Y、U1-Y、U6-Y、L1-MP低于对照组患者,U1-L1高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的治疗总有效率为96.67%(29/30),对照组患者的治疗总有效率为73.33%(22/30),差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过单侧种植微螺钉支抗体矫治方法对上颌前牙中线偏斜患者进行治疗,治疗效果明显,值得推广。

固相微球法人IgG放射免疫分析试剂盒的研制

采用氯胺 T法标记的人 12 5I- Ig G与人 Ig G(标准品或样品中人 Ig G)竞争结合人 Ig G微球抗体 ,直接离心分离 ,用于测定样品中的人 Ig G含量。经方法学鉴定 ,其灵敏度为 0 .3mg/ L,回收率为 10 0%～ 110 % ,零管结合率为 60 %～ 80 % ,非特异结合率 <2 .5% ,测量范围为 1.0～ 50 .0 mg/ L,批内变异系数为 3.1%～ 5.4 % ,批间变异系数为 4 .5%～ 7.2 % ,温育时间为 1h。

几种自身抗体辅助诊断类风湿关节炎临床应用评价

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是以关节慢性炎症为主的自身免疫性疾病,疾病后期患者关节致残率很高。预防和减少骨关节破坏,减少致残率并提高患者的生活质量,关键在于对RA患者进行早期诊断和早期治疗。本研究检测RA患者血清中类风湿因子（rheumatoid factors,RF）、抗环瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide,CCP）抗体、抗RA33抗体、抗核周因子（antiperinuclear factor,APF）、

类风湿关节炎五种自身抗体的检测及其诊断意义

目的分析在类风湿关节炎(RA)中抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、抗核周因子抗体(APF)、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)、抗RA33抗体和类风湿因子(RF)在诊断中的意义。方法选取RA组63例,非RA组67例,正常对照组30例,进行相关实验指标测定,并对结果进行统计学分析。结果抗CCP抗体、APF、AFA、抗RA33抗体、RF在RA诊断中的敏感度为87.3%、55.6%、38.1%、27.0%、69.8%;特异度为91.0%、92.5%、94.0%、91.0%、79.1%;联合检测五个指标,出现其中一种抗体阳性者63例(100%),两种阳性者54例(85.7%),三种阳性者34例(54.0%),四种阳性者18例(28.6%),五种检测均阳性者6例(9.5%)。在非RA中,无四种以上抗体检测阳性者。抗CCP抗体阳性组和阴性组患者在肿胀关节数、压痛关节数、DAS28评分、RF滴度,骨侵蚀发生率方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗CCP抗体对RA的诊断有较高的敏感度和特异度。联合检测多种血清学指标,有助于RA的诊断和鉴别诊断。抗CCP抗体与RA的骨侵蚀和病情活动度有关。

AFA、抗CCP抗体RF对类风湿关节炎诊断及病情评估的意义(英文)

目的:①检测类风湿关节炎(RA)病人血清抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体及类风湿因子(RF),比较单独检测和联合检测对RA诊断的敏感性、特异性、阳性预测值.②比较AFA、抗CCP抗体阳性组与阴性组间关节指数、晨僵时间、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、X线骨侵蚀之间的关系.③分析引起骨侵蚀的危险因素.方法:RA组92例血清标本来自2003-10～2005-01就诊于内蒙古医学院附属医院内科门诊及住院病人.AFA、抗CCP抗体用酶联免疫吸附法(ELISA),RF、CRP用液相终点散射沉淀法.结果:①AFA、抗CCP抗体阳性率与对照组有统计学意义(P＜0.05).②AFA、抗CCP抗体、RF联合检测的敏感性降低,特异性、阳性预测值较单独检测明显升高(P＜0.05).③AFA、抗CCP抗体阳性组病情活动指标与阴性对照组差异有统计学意义(P＜0.05),抗CCP抗体阳性是RA发生骨侵蚀的危险因素之一.结论:抗CCP抗体、AFA有共同的抗原决定簇,存在相关性,但不完全重叠.临床上与RF联合检测有助于提高RA的早期诊断、预测病情的活动性及严重程度,具有广泛的临床应用前景.

联合检测AFA与抗CCP抗体RF对评估类风湿关节炎的临床意义

目的：①检测类风湿关节炎（RA）患者血清抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体及类风湿因子（RF），比较单独检测和联合检测对RA诊断的敏感性，特异性，阳性预测值。②比较AFA、抗CCP抗体阳性组与阴性组间关节指数、晨僵时间，血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP），X线骨侵蚀之间的关系。③分析引起骨侵蚀的危险因素。方法：RA组92例血清标本来自2003年10月～2005年1月就诊于内蒙古医学院附属医院内科门诊及住院患者。AFA、抗CCP抗体用酶联免疫吸附法（ELISA），RF、CRP用液相终点散射沉淀法。结果：①AFA、抗CCP抗体阳性率与对照组有统计学意义（P〈0．05）。②AFA、抗CCP抗体、RF联合检测的敏感性降低，特异性、阳性预测值较单独检测明显升高（P〈0．05）。③AFA、抗CCP抗体阳性组病情活动指标与阴性对照组差异有统计学意义（P〈0．05），抗CCP抗体阳性是RA发生骨侵蚀的危险因素之一。结论：抗CCP抗体、AFA有共同的抗原决定簇，存在相关性，但不完全重叠。临床上与RF联合检测有助于提高RA的早期诊断、预测病情的活动性及严重程度。具有广泛的临床应用前景。

血清GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA联合检测在类风湿关节炎诊断中的临床分析

目的:评价葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)在类风湿关节炎(RA)诊断中的意义,并比较多种指标联合检测在RA诊断中的意义。方法:对178例确诊为RA的患者进行血清学指标检测,并进行回顾性分析。血清GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体、AFA检测均采用酶联免疫吸附法,采用χ~2检验和Pearson相关分析对多种指标在RA诊断中的价值及相关性进行比较,并对不同指标间的联合检测进行讨论分析。结果:GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA在RA组的特异性和灵敏度分别为65.00%和70.22%、95.00%和84.83%、78.33%和72.47%、75.71%和63.48%。RA组中GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA阳性率分别为70.22%、84.83%、72.47%、63.48%,显著高于对照组的11.67%、5.00%、21.67%、13.33%,差异有统计学意义(P<0.001);任意3种或4种指标联合检测特异性较高,但敏感度降低,明显低于单项检测抗CCP抗体,差异有统计学意义(P<0.001);任意3种或4种指标联合检测较单一指标检测均具有较高的阳性率,差异有统计学意义(P<0.001),尤其是GPI+抗CCP抗体+抗MCV抗体+AFA联合检测,RA组中阳性率可达96.07%。结论:GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA均可作为RA诊断的血清学指标,多种血清学指标联合检测有助于提升RA诊断的阳性率。