微板核酸杂交-ELISA方法对肝炎病人血清中HBV DNA的定量检测与分析

目的采用微板核酸杂交-ELISA技术测定肝炎病人血清中HBVDNA含量。方法用PCR法将病人血清标本扩增后，与两条特异性探针夹心杂交，然后通过酶联显色对69例不同临床表现的肝炎患者血清中HBVDNA进行定量检测。结果20例急性重型肝炎血清中的DNA含量超过2μg/L，88.24％的急性轻型肝炎患者和54.55％轻度慢性肝炎患者血清中的HBVDNA含量少于2μg/L,66.67％中度慢性肝炎患者血清HBVDNA含量在2-1000μg/L的范围，75％重度慢性肝炎和45％急性重型肝炎血清中的HBVDNA含量超过1000μg／L。结论做饭核酸杂交-ELISA检测方法能准确、快速进行核酸定量测定，特异性强，灵敏度高，稳定可靠，易自动化，对于研究病毒感染量与临床病程的关系具有较大的现实意义。

用微板核酸杂交-ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况

目的 :用微板核酸杂交 -ELISA技术检测皖北地区不同人群输血传播性病毒 (TTV )感染。方法 :用PCR法将患者血清标本中的TTVDNA扩增后 ,与两条特异性探针夹心杂交 ,通过酶联显色检测血清标本中的TTVDNA ,并进行分型。结果 :TTVDNA在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为 3 3 %、16 7%和 13 5 % ,前者与后两者差异显著 (P <0 0 5 )。 14例非甲非戊型 (NA -NE)肝炎的TTVDNA阳性率为 14 3 %。本地区流行的TTV可分为两个主要的基因型 ,其中 6 6 7%为Ⅰ型 ,2 5 %为Ⅱ型 ,8 3 %为混合感染。结论 :安徽省皖北地区流行的TTV基因型以Ⅰ型为主 ,一般人群、血透患者和肝病患者中均存在TTV感染 ,后两者为TTV感染的高危人群。TTV不是本地区NA -NE肝炎的主要病因。

微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交 ELISA技术对HCVRNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HCVRNA进行RT PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的微孔板 ,再加入HCV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸杂交 ELISA显色 ,对江西地区 12 9例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为 1b、2a、2b、3a、3b、6a、1a/2a、1b/2a、1b/3a、1b/6a、3a/5a、2a/3a共 12种单一基因型和混合基因型 ,其中以 1b基因型为主 ,占 5 0 .39%;慢性丙肝患者的基因型较为复杂 ,存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以 1b基因型为主。PCR微板核酸杂交 ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型 ,在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。

用微板核酸杂交—ELISA技术检测不同人群TTV感染状况

目的 用微板核酸杂交—ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况。方法 用PCR法将病人血清标本中的TTV DNA扩增后,与两条特异性探针夹心杂交,通过酶联显色检测血清标本中的TTV DNA并进行分型。结果 TTV DNA在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为3.3％、16.7％和13.5％,前者与后两者比较差异均有显著性(P<0.05)。14例NA～NE肝炎的TTV DNA阳性率为14.3％。本地区流行的TTV可分为两个主要基因型,其中以Ⅰ型为主(66.7％),Ⅱ型次之(25％),少部分存在混合感染(8.3％)。结论 安徽省皖北地区一般人群、血透患者和肝病患者中均存在TTV感染,后两者为TTV感染的高危人群。TTV不是本地区NA～NE肝炎的主要病因。安徽省皖北地区流行的TTV的基因型以Ⅰ为主。

用微板核酸杂交-ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况

目的：用微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术检测皖北地区不同人群ＴＴＶ感染情况。方法：用ＰＣＲ法将 患者血清标本中的 ＴＴＶ ＤＮＡ扩增后，与两条特异性探针夹心杂交，通过酶联显色检测血清标本中的ＴＴＶ ＤＮＡ，进行分型并与套式ＰＣＲ方法比较。结果：ＴＴＶ在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为３．３％， １６．７％和１３．５％，前者与后两者比较差异均有显著意义（Ｐ＜０．０５）；１４例非甲－非戊（ＮＡ－ＮＥ）肝炎的ＴＴＶ阳性 率为１４．３％。本地区流行的ＴＴＶ可分为两个主要的基因型，即Ｉ型（６６．７％）、Ⅱ型（２５％），并存在混合感染 （８．３％）。微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ与套式ＰＣＲ方法的相符率为９８．ｌ％（２０５／２０９）． 结论：本地区一般人群、血透 和肝病患者中存在ＴＴＶ感染，后两者为感染的高危人群，ＴＴＶ的基因型以Ｉ型为主。ＴＴＶ不是本地 ＮＡ－ＮＥ肝 炎的主要病因。微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术具有灵敏性高、操作简单、易自动化的特点。

微板核酸杂交-酶联显色检测性病沙眼衣原体DNA

目的 建立微板核酸杂交-ELISA方法,检测性病沙眼衣原体。方法 采用PCR、核酸杂交和ELISA三大生物技术相结合,建立微板核酸杂交ELISA法,并用此法分别同McCoy细胞培养和免疫学方法检测307份性传播疾病标本进行比较。结果 微板核酸杂交-ELISA法检测的阳性率为40.39％(122/307),高于细胞培养的9.77％(30/307)和免疫诊断的12.05％(37/307)。结论 微板核酸杂交-ELISA技术检测性病沙眼衣原体灵敏度高、特异性好、简便快速。因此,该方法具有很强的实用价值和发展前景。

微板核酸杂交技术定量检测乙肝病毒的临床应用

目的 用微板核酸杂交技术准确定量检测患者血清乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)的含量 ,探讨其临床应用价值。方法 用聚合酶链反应 (PCR)法将患者血标本扩增后的产物 ,通过微孔板杂交显色对 5 4 0例不同临床表现的乙型肝炎患者血清中HBV DNA进行定量检测。结果 急性乙肝患者血清中HBV DNA含量为 (174 96± 5 0 2 0 ) μg/L ,乙肝病毒长期携带者血清中HBV DNA含量为(94 32± 4 1 31) μg/L ,乙肝恢复期患者血清中HBV DNA含量为 (39 6 2± 2 4 5 1) μg/L ,乙肝疫苗免疫组的HBV DNA含量 <1μg/L ,各组之间比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 微板核酸杂交技术—酶联免疫吸附试验检测方法能准确、快速进行HBV DNA定量 ,与临床诊断相符 ,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效观察有指导意义。

定量微板核酸杂交检测乙型肝炎患者血清中HBVDNA及其临床意义

采用定量微板核酸杂交技术检测448例肝病患者血清中HBVDNA含量.结果显示:其阳性率和病毒含量HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)组>HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组>抗-HBs(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组(P<0.05,P<0.01).血清HBVDNA含量与黄疸程度及转氨酶的高低无关.血清HBVDNA含量高低,阳性率大小与临床型的严重程度呈一定的相关性,从而指导临床诊断和治疗.

微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立

以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。

多种PCR-微孔板核酸杂交法同时检测三种病原体DNA的临床应用

目的 :应用一种同时检测沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法对临床标本进行检测。方法 :采用多重PCR 核酸探针杂交技术 ,对泌尿生殖系统传播疾病 (STD)有症状者分泌物 ,用同一份处理标本与常规PCR法比较。结果 :检测 186分标本 ,沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌检出率分别为 2 4 1%、5 0 0 %和2 9 0 % ,并有 2 5 2 %的双重感染和 6 6 %的三重复合感染。结论 :本法快捷、简便、特异性好 。

PCR-微孔板核酸杂交技术检测肺炎衣原体研究

建立一种新的PCR ELISA技术模式 ,简便、特异、敏感地检测肺炎衣原体 ,为肺炎衣原体的检测提供一种有效的新方法。采用链霉亲和素包被于聚乙烯微孔板 ,生物素标记的引物扩增目的DNA片段与荧光素标记的探针在微孔板内进行分子杂交 ,抗荧光素标记的辣根过氧化物酶可以与之结合 ,再加入底物即可产生颜色反应 ,通过测定其吸光度来进行结果判断。新建立的PCR ELISA方法与其它相关的六种病原体无交叉反应 ,临床标本检测检出率高 ,呼吸道感染者标本 42份检出率达 2 1 95 % ,肺炎患者标本 465份检出率为 42 1 5 % ,比套式PCR方法及其它检测方法的检出率都高。应用新建立的PCR ELISA方法检测肺炎衣原体特异、敏感 ,结果客观、稳定、可靠 ,对肺炎衣原体引起的疾病的诊断有十分重要的意义。

多重PCR-核酸探针杂交法同时检测沙眼衣原体、解脲支原体和淋病奈瑟菌

目的 建立一种同时检测沙眼衣原体、解脲支原体、淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法并用于临床标本检测。方法 采用多重PCR 核酸探针杂交技术 ,结果与常规PCR法比较。结果 本法特异性良好 ,敏感度达到 0 1fg。经过对 166例性传播疾病门诊患者标本测定证实 ,沙眼衣原体、解脲支原体、淋病奈瑟菌检出率分别为 2 2 9% ,5 4 8%和 3 4 3 % ,并有 2 2 2 %的双重复合感染和 4 8%的三重复合感染。并与常规PCR法具有很好的一致性。结论 本法快速、简便、特异性好、能指示多重感染。

TTV与其它肝炎病混合感染及其基因型的研究

研究TTV与其它肝炎病混合感染对肝脏病变的影响及本地区TTVDNA的基因型。选TTVORF1的保守序列作内外引物 ,采用微板核酸杂交 -ELISA方法检测患者血清TTVDNA并对检测结果和临床资料进行统计学分析。选取异源性大于 5 0 %的序列作显色探针Ⅰ和显色探针Ⅱ ,进行分型研究。学生、非甲 -非戊型肝炎、慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清TTV阳性率分别为 3 3 %、14 3%、12 %、16 %。TTV阳性和TTV阴性的慢性乙型肝炎及肝硬化患者 ,在年龄、性别、ALT和TBil之间无显著差异 (P >0 0 5 )。本地区流行的TTV可分为两个主要的基因型 ,即Ⅰ型 (6 6 7% )、Ⅱ型 (2 5 % ) ,部分存在混合感染 (8 3% )。TTV可能与HBV、HCV有类似的传播途径 ,故常重叠感染。TTV与乙型肝炎及肝硬化混合感染后不影响两者的肝脏病变。TTV不是本地区非甲

桂西壮族人群乙肝病毒基因型研究

To study the distribution characteristics of Hepatitis B virus (HBV) genotypes in groups of the Zhuang nationality of Baishe in Guangxi, the PCR sandwich hybridization-ELISA technique was used to determine the genotypes in 30 patinets of Zhuang nationality with hepatitis B. Geontype B, C, D and non A^F were found in this group, in which 56.6% of them were type D,46.6% type C,33.3% typeA^F, 20% type B, Most patients were found with types C+D, D+B or C+B. It is suggested that there are genotypes D, C, B and non A^F in this area, and the major one was genotype D. There are mixture of genotypes C+D, B+C, D+B in this region, so the HBV genotype might be associated with area and nationality.

HBV基因型与干扰素抗病毒疗效的关系

目的:探讨HBV不同基因型对α- 干扰素抗病毒疗效的影响。方法:选取应用α-干扰素进行抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者作为研究对象,观察其抗病毒疗效。患者的HBV基因型采用PCR微板核酸杂交 ELISA方法检测;血清HBVDNA复制水平采用荧光定量PCR检测;HBV前C区和BCP (基础核心启动子)区基因位点变异采用HBV基因多态性芯片进行检测。结果:94例慢性乙型肝炎患者的HBV基因型以C型、B型为主,未发现A、E、F基因型。HBVDNA高复制水平明显与C基因型及混合基因型有关。B基因型对α- 干扰素抗病毒治疗的应答明显优于C、D型,而混合基因型对α- 干扰素的应答最不敏感。仅B基因型对α- 干扰素治疗产生完全应答。部分应答及无应答时HBeAg的转阴与HBV前C区nt 1 896位点变异、以及BCP区nt 1 76 2、nt 1 76 4双位点变异有关。C基因型HBV前C区及BCP区基因变异发生率明显高于B型。结论:HBV基因型与HBVDNA复制水平、HBV基因变异以及α-干扰素抗病毒疗效均有一定的相关性,提示HBV基因分型有重要的临床意义。

HBV DNA定量检测方法的评价

目的 协助临床检验工作者及科研人员选择适合本单位实际条件的HBV DNA定量检测方法。方法 采用核酸分子杂交、荧光定量PCR、微板核酸杂交三种方法对89 例乙型肝炎大三阳患者进行HBV DNA测定。结果 三种方法测定结果依次为荧光定量PCR法阳性89 例,微板核酸杂交法阳性81例,斑点杂交法阳性62例,三种方法均阳性61 例。结论 斑点杂交法准确性和特异性较高,适合于流行病学调查和药物观察等研究。荧光定量PCR技术灵敏度较高,若能提高其检测结果的准确性,它应为临床及科研之首选方法。微板核酸杂交技术有较高的灵敏度和特异性,操作简便,可常规普及。

新疆不同人群血清中TTV病毒流行病学调查

目的了解新疆地区不同民族、不同人群中TTV_DNA病毒的感染情况及流行病学特征。为进一步研究新疆人群中TTV_DNA病毒的分布、分子生物学性状及临床诊断奠定基础。方法应用微板—核酸杂交PCR_ELISA技术对采集到的血样进行TTV_DNA检测 ,同时进行肝功能及其他各型肝炎的检测。结果本次共检测了不同人群的血样201人份 ,TTV_DNA的阳性率为12.93%(26/201)。民族与性别分布 :汉族为13.04 %(15/115) ,维吾尔族为12.79%(11/86) ;女性17.31%(9/52) ,明显高于男性11.41%(17/149)。在不同人群中 ,已排除甲—庚型肝炎的单纯转氨酶增高者TTV_DNA阳性率为21.05 %(8/38) ;HIV阳性人群中TTV_DNA阳性率为18.36%(9/49) ;一般肝炎病人阳性率为13.64%(9/66) ;透析人群及正常对照人群中未检出阳性。结论TTV -DNA的阳性率为12.93%(26/201) ,不同民族和性别的阳性率不同。