微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交 ELISA技术对HCVRNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HCVRNA进行RT PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的微孔板 ,再加入HCV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸杂交 ELISA显色 ,对江西地区 12 9例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为 1b、2a、2b、3a、3b、6a、1a/2a、1b/2a、1b/3a、1b/6a、3a/5a、2a/3a共 12种单一基因型和混合基因型 ,其中以 1b基因型为主 ,占 5 0 .39%;慢性丙肝患者的基因型较为复杂 ,存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以 1b基因型为主。PCR微板核酸杂交 ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型 ,在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。

PCR-微孔板核酸杂交技术检测肺炎衣原体研究

建立一种新的PCR ELISA技术模式 ,简便、特异、敏感地检测肺炎衣原体 ,为肺炎衣原体的检测提供一种有效的新方法。采用链霉亲和素包被于聚乙烯微孔板 ,生物素标记的引物扩增目的DNA片段与荧光素标记的探针在微孔板内进行分子杂交 ,抗荧光素标记的辣根过氧化物酶可以与之结合 ,再加入底物即可产生颜色反应 ,通过测定其吸光度来进行结果判断。新建立的PCR ELISA方法与其它相关的六种病原体无交叉反应 ,临床标本检测检出率高 ,呼吸道感染者标本 42份检出率达 2 1 95 % ,肺炎患者标本 465份检出率为 42 1 5 % ,比套式PCR方法及其它检测方法的检出率都高。应用新建立的PCR ELISA方法检测肺炎衣原体特异、敏感 ,结果客观、稳定、可靠 ,对肺炎衣原体引起的疾病的诊断有十分重要的意义。

定量微板核酸杂交检测乙型肝炎患者血清中HBVDNA及其临床意义

采用定量微板核酸杂交技术检测448例肝病患者血清中HBVDNA含量.结果显示:其阳性率和病毒含量HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)组>HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组>抗-HBs(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组(P<0.05,P<0.01).血清HBVDNA含量与黄疸程度及转氨酶的高低无关.血清HBVDNA含量高低,阳性率大小与临床型的严重程度呈一定的相关性,从而指导临床诊断和治疗.

微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立

以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。