微板核酸杂交-ELISA方法对肝炎病人血清中HBV DNA的定量检测与分析

目的采用微板核酸杂交-ELISA技术测定肝炎病人血清中HBVDNA含量。方法用PCR法将病人血清标本扩增后，与两条特异性探针夹心杂交，然后通过酶联显色对69例不同临床表现的肝炎患者血清中HBVDNA进行定量检测。结果20例急性重型肝炎血清中的DNA含量超过2μg/L，88.24％的急性轻型肝炎患者和54.55％轻度慢性肝炎患者血清中的HBVDNA含量少于2μg/L,66.67％中度慢性肝炎患者血清HBVDNA含量在2-1000μg/L的范围，75％重度慢性肝炎和45％急性重型肝炎血清中的HBVDNA含量超过1000μg／L。结论做饭核酸杂交-ELISA检测方法能准确、快速进行核酸定量测定，特异性强，灵敏度高，稳定可靠，易自动化，对于研究病毒感染量与临床病程的关系具有较大的现实意义。

用微板核酸杂交-ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况

目的 :用微板核酸杂交 -ELISA技术检测皖北地区不同人群输血传播性病毒 (TTV )感染。方法 :用PCR法将患者血清标本中的TTVDNA扩增后 ,与两条特异性探针夹心杂交 ,通过酶联显色检测血清标本中的TTVDNA ,并进行分型。结果 :TTVDNA在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为 3 3 %、16 7%和 13 5 % ,前者与后两者差异显著 (P <0 0 5 )。 14例非甲非戊型 (NA -NE)肝炎的TTVDNA阳性率为 14 3 %。本地区流行的TTV可分为两个主要的基因型 ,其中 6 6 7%为Ⅰ型 ,2 5 %为Ⅱ型 ,8 3 %为混合感染。结论 :安徽省皖北地区流行的TTV基因型以Ⅰ型为主 ,一般人群、血透患者和肝病患者中均存在TTV感染 ,后两者为TTV感染的高危人群。TTV不是本地区NA -NE肝炎的主要病因。

用微板核酸杂交—ELISA技术检测不同人群TTV感染状况

目的 用微板核酸杂交—ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况。方法 用PCR法将病人血清标本中的TTV DNA扩增后,与两条特异性探针夹心杂交,通过酶联显色检测血清标本中的TTV DNA并进行分型。结果 TTV DNA在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为3.3％、16.7％和13.5％,前者与后两者比较差异均有显著性(P<0.05)。14例NA～NE肝炎的TTV DNA阳性率为14.3％。本地区流行的TTV可分为两个主要基因型,其中以Ⅰ型为主(66.7％),Ⅱ型次之(25％),少部分存在混合感染(8.3％)。结论 安徽省皖北地区一般人群、血透患者和肝病患者中均存在TTV感染,后两者为TTV感染的高危人群。TTV不是本地区NA～NE肝炎的主要病因。安徽省皖北地区流行的TTV的基因型以Ⅰ为主。

用微板核酸杂交-ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况

目的：用微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术检测皖北地区不同人群ＴＴＶ感染情况。方法：用ＰＣＲ法将 患者血清标本中的 ＴＴＶ ＤＮＡ扩增后，与两条特异性探针夹心杂交，通过酶联显色检测血清标本中的ＴＴＶ ＤＮＡ，进行分型并与套式ＰＣＲ方法比较。结果：ＴＴＶ在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为３．３％， １６．７％和１３．５％，前者与后两者比较差异均有显著意义（Ｐ＜０．０５）；１４例非甲－非戊（ＮＡ－ＮＥ）肝炎的ＴＴＶ阳性 率为１４．３％。本地区流行的ＴＴＶ可分为两个主要的基因型，即Ｉ型（６６．７％）、Ⅱ型（２５％），并存在混合感染 （８．３％）。微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ与套式ＰＣＲ方法的相符率为９８．ｌ％（２０５／２０９）． 结论：本地区一般人群、血透 和肝病患者中存在ＴＴＶ感染，后两者为感染的高危人群，ＴＴＶ的基因型以Ｉ型为主。ＴＴＶ不是本地 ＮＡ－ＮＥ肝 炎的主要病因。微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术具有灵敏性高、操作简单、易自动化的特点。

PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的 采用PCR ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA ,并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板 ,再加入结核杆菌显色探针 ,同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本 5 10例。结果 该法的灵敏度为 5 9.3% ,特异性为 95 .0 % ;阳性预测值为 96 .3% ,阴性预测值为 5 1.4 %。结论 PCR ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA ,是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。

多种PCR-微孔板核酸杂交法同时检测三种病原体DNA的临床应用

目的 :应用一种同时检测沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法对临床标本进行检测。方法 :采用多重PCR 核酸探针杂交技术 ,对泌尿生殖系统传播疾病 (STD)有症状者分泌物 ,用同一份处理标本与常规PCR法比较。结果 :检测 186分标本 ,沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌检出率分别为 2 4 1%、5 0 0 %和2 9 0 % ,并有 2 5 2 %的双重感染和 6 6 %的三重复合感染。结论 :本法快捷、简便、特异性好 。

微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交 ELISA技术对HCVRNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HCVRNA进行RT PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的微孔板 ,再加入HCV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸杂交 ELISA显色 ,对江西地区 12 9例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为 1b、2a、2b、3a、3b、6a、1a/2a、1b/2a、1b/3a、1b/6a、3a/5a、2a/3a共 12种单一基因型和混合基因型 ,其中以 1b基因型为主 ,占 5 0 .39%;慢性丙肝患者的基因型较为复杂 ,存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以 1b基因型为主。PCR微板核酸杂交 ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型 ,在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。

微板核酸杂交-酶联显色检测性病沙眼衣原体DNA

目的 建立微板核酸杂交-ELISA方法,检测性病沙眼衣原体。方法 采用PCR、核酸杂交和ELISA三大生物技术相结合,建立微板核酸杂交ELISA法,并用此法分别同McCoy细胞培养和免疫学方法检测307份性传播疾病标本进行比较。结果 微板核酸杂交-ELISA法检测的阳性率为40.39％(122/307),高于细胞培养的9.77％(30/307)和免疫诊断的12.05％(37/307)。结论 微板核酸杂交-ELISA技术检测性病沙眼衣原体灵敏度高、特异性好、简便快速。因此,该方法具有很强的实用价值和发展前景。

微板核酸杂交技术定量检测乙肝病毒的临床应用

目的 用微板核酸杂交技术准确定量检测患者血清乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)的含量 ,探讨其临床应用价值。方法 用聚合酶链反应 (PCR)法将患者血标本扩增后的产物 ,通过微孔板杂交显色对 5 4 0例不同临床表现的乙型肝炎患者血清中HBV DNA进行定量检测。结果 急性乙肝患者血清中HBV DNA含量为 (174 96± 5 0 2 0 ) μg/L ,乙肝病毒长期携带者血清中HBV DNA含量为(94 32± 4 1 31) μg/L ,乙肝恢复期患者血清中HBV DNA含量为 (39 6 2± 2 4 5 1) μg/L ,乙肝疫苗免疫组的HBV DNA含量 <1μg/L ,各组之间比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 微板核酸杂交技术—酶联免疫吸附试验检测方法能准确、快速进行HBV DNA定量 ,与临床诊断相符 ,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效观察有指导意义。

PCR-微孔板核酸杂交技术检测肺炎衣原体研究

建立一种新的PCR ELISA技术模式 ,简便、特异、敏感地检测肺炎衣原体 ,为肺炎衣原体的检测提供一种有效的新方法。采用链霉亲和素包被于聚乙烯微孔板 ,生物素标记的引物扩增目的DNA片段与荧光素标记的探针在微孔板内进行分子杂交 ,抗荧光素标记的辣根过氧化物酶可以与之结合 ,再加入底物即可产生颜色反应 ,通过测定其吸光度来进行结果判断。新建立的PCR ELISA方法与其它相关的六种病原体无交叉反应 ,临床标本检测检出率高 ,呼吸道感染者标本 42份检出率达 2 1 95 % ,肺炎患者标本 465份检出率为 42 1 5 % ,比套式PCR方法及其它检测方法的检出率都高。应用新建立的PCR ELISA方法检测肺炎衣原体特异、敏感 ,结果客观、稳定、可靠 ,对肺炎衣原体引起的疾病的诊断有十分重要的意义。

定量微板核酸杂交检测乙型肝炎患者血清中HBVDNA及其临床意义

采用定量微板核酸杂交技术检测448例肝病患者血清中HBVDNA含量.结果显示:其阳性率和病毒含量HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)组>HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组>抗-HBs(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组(P<0.05,P<0.01).血清HBVDNA含量与黄疸程度及转氨酶的高低无关.血清HBVDNA含量高低,阳性率大小与临床型的严重程度呈一定的相关性,从而指导临床诊断和治疗.

微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立

以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。

PCR微孔板核酸杂交法检测Ng、Ct、Uu、HPV结果分析

淋病奈瑟菌(Ng)、沙眼衣原体(ct)、解脲支原体(uu)、人类乳头瘤病毒(HPV)是常见的性传播疾病(STD)的病原体。为了解上述病原体在凯里的感染情况。我们于1999、9～2000．8月，采用PCR微孔板核酸杂交法对高度怀疑为性传播疾病患者284例进行了Ng、Ct、Uu、HPV的检测，结果报如下。

聚合酶链反应及微板杂交法对人乳头瘤病毒分型检测

目的 :为适应临床人乳头瘤病毒分型检测 ,建立了通用引物扩增 (GP -PCR)及微孔板杂交 -ELISA检测法。方法 :先进行GP -PCR ,其中一条引物 5’端标记有地高辛 ,探针标记有生物素 ,通过包被在微孔板上的亲和素预先固定 ;将扩增产物加入预先包被有HPV型特异寡核苷酸探针和HPV基因组混合探针的聚苯乙烯微孔板中 ,42℃杂交仅需 2 0～30min ;最后 ,用酶底物与所标记的酶进行显色反应 ,通过测定吸光度来判断结果。结果 :本法HPV各型之间无交叉杂交 ;杂交灵敏度比PCR -琼脂糖凝胶电泳检测高 10 0倍 ,最佳杂交时间为 2 0～ 30min ,重复性好 ,CV为 8 75 % ;6 0例子宫颈癌标本的总检出率为 92 5 % ,2 0例正常宫颈石蜡标本本法测定均为阴性。结论 :该法特异性强 ,灵敏度高 ,操作简单 ,无放射性和E .B .污染 ,杂交时间短 ,检测成本低 ,便于临床常规应用。

多重PCR-核酸探针杂交法同时检测沙眼衣原体、解脲支原体和淋病奈瑟菌

目的 建立一种同时检测沙眼衣原体、解脲支原体、淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法并用于临床标本检测。方法 采用多重PCR 核酸探针杂交技术 ,结果与常规PCR法比较。结果 本法特异性良好 ,敏感度达到 0 1fg。经过对 166例性传播疾病门诊患者标本测定证实 ,沙眼衣原体、解脲支原体、淋病奈瑟菌检出率分别为 2 2 9% ,5 4 8%和 3 4 3 % ,并有 2 2 2 %的双重复合感染和 4 8%的三重复合感染。并与常规PCR法具有很好的一致性。结论 本法快速、简便、特异性好、能指示多重感染。

采用PCR微板核酸杂交-ELISA技术进行HBV DNA基因分型的研究

目的 采用PCR微板核酸杂交 ELISA技术对HBVDNA进行基因分型研究。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HBVDNA进行PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被HBV通用探针的微孔板 ,再加入HBV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸夹心杂交 ELISA显色 ,对 15 2例临床诊断为不同程度乙型肝炎患者血清中的HBVDNA进行基因分型。结果 15 2例不同临床表现的肝炎患者血清中的HBVDNA的基因型大多集中在B、C和D这 3种基因型 ,其所占比例分别为 :B型 2 8.2 9% (43 15 2 )、C型 37.5 0 % (5 7 15 2 )、D型 18.42 % (2 8 15 2 ) ;A型、E型、F型所占比例很少 ,各只有 3.2 9% (5 15 2 )。还存在一定比例的混合基因型 ,B、C、D三型不同组合的混合型共占 10 .5 3% (16 15 2 )。结论 PCR微板核酸杂交 ELISA方法可以准确、快速、简便进行HBV基因分型 ,在探讨HBV的流行病学及观察各基因型毒力强弱及致病性大小方面有重要意义。