甲基汞诱导母鼠骨髓细胞和胎肝血嗜多染红细胞微核实验

甲基汞诱导母鼠骨髓细胞和胎肝血嗜多染红细胞微核实验白求恩医科大学预防医学院（长春，１３００２１）李艳华，林秀武甲基汞（ＭｅＨｇ）是一种较强的致突变毒物［１，２］，胚胎期血细胞在肝内形成过程中，其染色体极易遭受致突剂作用而发生断裂，这是微核（ＭＮ）形成...

甲基汞诱导大鼠骨髓细胞和胎肝血嗜多染红细胞微核实验(MNT)

本研究采用动物体内实验方法,以微核(MN)为指标,探讨了甲基汞(MeHg)对大鼠肝血细胞MN率的影响,并与母鼠骨髓细胞相比较。结果表明。

LDM抗尼古丁胎鼠微核实验研究

用胎鼠肝血嗜多染红细胞微核实验方法对草本植物燕子鱼（ＬＤＭ）提取物抗尼古丁毒性作用进行了研究。结果：尼古丁组能使胎鼠肝血嗜多染红细胞微核检出率明显增高，Ｐ＜０．０１。ＬＤＭ抗尼古丁组胎鼠微核检出率明显低于尼古丁组，Ｐ＜０．０１。提示：ＬＤＭ具有抑制尼古丁毒性的作用。

GTW对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形的影响

研究了雷公藤多甙(GTW)的抗生育剂量、中间剂量和治疗剂量对昆明种小鼠骨髓细胞微核和精子畸形的影响,并对用药后其体重变化和睾丸/体重的比例进行比较。骨髓微核试验和睾丸/体重比变化分析均显示中间剂量组和治疗剂量组有不同程度的遗传毒性,且存在剂量-效应关系,但小于阳性对照;精子畸形率呈下降趋势,生育力的可复性可能也是下降的;体重变化可见中间剂量组存在较高的代偿能力。

丝裂霉素C诱发小鼠外周血和骨髓细胞微核率的比较

微核实验自创建以来,已得到广泛应用。但仅有小鼠骨髓嗜多染红细胞(polyc-hromatic erythrocytes,PCE)微核实验发展为标准实验。而以骨髓为实验材料易受采样限制,也不能对动物进行长期动态观察。1980年,MacGregor等首先证明小鼠外周血PCE微核(micronuclei,MN)率与骨髓PCE微核率相当,若能以外周血作为材料,实验无疑会大大简化。但近年来国内外有关外周血微核率的报道结果有些混乱。为了进一步研究微核在外用血PCE、正染红细胞(normochromatic erythrocytes,NCE)和骨髓PCE中的分布情况,我们以丝裂霉素C)(mitomycinC,MMC)为诱变剂,观察了小鼠外周血PCE、NCE以及骨髓PCE微核率之间的关系。

纳米抗菌材料对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响

目的初步了解纳米抗菌材料对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响。方法将30只昆明纯系小鼠随机分为两组,实验组20只,口腔喂入10 g/L纳米抗菌材料0.1 mL,每天1次,连续4 d;对照组10只,不喂纳米抗菌材料。分别在实验第25天和第93天分两批处死小鼠,制备股骨骨髓涂片,显微镜下观察小鼠骨髓细胞微核发生情况,计算微核发生率。结果用药后第25、93天实验组小鼠骨髓细胞微核发生率较对照组明显增高,差异有显著性(t=3.20,P<0.01)。结论纳米抗菌材料会对机体产生遗传毒性作用。

Bellidifolin对小鼠的急性毒性及对小鼠骨髓细胞的微核效应

目的研究紫红獐芽菜中单体提取物Bellidifolin的急性毒性及遗传毒性。方法采用急性毒性实验,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验,以经口灌胃方式给药。结果小鼠Bellidifolin最大耐受量MTD为15g/kg,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率结果显示紫红獐芽菜单体提取物Bellidifolin高、中、低剂量组与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.01)。结论Bellidifolin为无毒类物质,无致突变作用。

大鼠骨髓嗜多染红细胞微核的流式细胞仪自动化检测

背景与目的 :建立一种基于单激光流式细胞仪的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率自动化检测方法。材料与方法 :以环磷酰胺诱导雄性Wistar大鼠微核形成 ,采用吖啶橙(acridineorange,AO)荧光染色 ,分别用荧光显微镜及单激光流式细胞仪检测大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及正染红细胞微核率。结果 :以前置角散射光(FSC)和DNA荧光(FL1)作图 ,大鼠骨髓细胞被分成明显的五个细胞群———有核细胞、嗜多染红细胞、正染红细胞、含微核的嗜多染红细胞及含微核的正染红细胞 ;经环磷酰胺处理的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及正染红细胞微核率均呈现良好的剂量_反应关系及时效关系 ;人工显微镜计数结果与流式细胞仪检测结果具有良好的相关性(R=0.949 ,P<0.01) ,二者的曲线拟合方程为 ^Y=1.0967+1.0639X(R=0.949 ,P<0.01)。结论

稳恒磁场强度对小鼠骨髓细胞和精母细胞的遗传效应研究

稳恒磁场强度为 40mT、 5 0mT、 60mT、 10 0mT ,作用 30d后测定分析小鼠初级精母细胞染色体畸变率和骨髓嗜多染红细胞微核率。稳恒磁场强度为 40～ 60mT时 ,对小鼠初级精母细胞染色体畸变的发生无明显影响 ;稳恒磁场强度为 10 0mT时 ,可致小鼠初级精母细胞染色体畸变、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率显著增高。

基于流式细胞术的大鼠骨髓网织红细胞微核实验方法的建立

目的建立并验证大鼠骨髓网织红细胞(reticulocytes,RETs)微核的流式细胞术检测方法。方法选用CD71-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记骨髓网织红细胞,CD45-藻红蛋白(phycoerythrin,PE)标记白细胞,核酸染料DRAQ5标记DNA,建立骨髓微核的流式细胞术检测方法。SD大鼠随机分为甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)、环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)、N-乙基-N-亚硝基脲(ethyl nitrosourea,ENU)和秋水仙素(colchicine,COL)染毒组,各组大鼠按染毒剂量不同再分为4亚组,每亚组5只。以染毒剂量为0,作为各组溶剂对照。染毒方案为间隔24 h两次经口给药。末次给药后24 h采集双侧股骨骨髓,采用本研究建立的基于流式细胞术的骨髓微核检测方法测定骨髓中的RETs微核率和RETs比例,并同时使用人工显微镜下计数方法进行检测。结果成功建立基于流式细胞术的骨髓微核检测方法。采用该方法检测20只溶剂对照大鼠骨髓微核率(背景微核率)为0.83‰±0.12‰,采用人工显微镜下计数微核的方法检测的溶剂对照大鼠背景微核率为1.43‰±0.44‰,基于流式细胞术计数骨髓微核的方法背景微核率更低,且更为稳定。两种方法均可检测到EMS、CP、ENU、COL染毒后RETs微核率呈染毒剂量依赖性上升趋势,RETs比例呈染毒剂量依赖性下降。两种方法检测4种受试物诱导的RETs微核率相关性良好(相关系数为0.834 3~0.913 7)。结论本实验建立的基于流式细胞术的骨髓微核检测方法具有操作简便、灵敏快捷、背景微核率较低等优势,是人工微核计数方法的良好替代,可应用于化学物的遗传毒性评价。

体内彗星实验联合微核实验检测化合物的遗传毒性

目的:考察体内彗星实验联合微核实验检测化合物遗传毒性的可行性。方法:以阳性化合物N-乙基-N-亚硝基脲为模型药物,取♂大鼠随机分为空白对照组和给药组[40 mg/(kg·d)],每组5只,灌胃给药3次,末次给药后3 h处死大鼠。进行彗星实验,收集大鼠外周血、肝、胃、睾丸组织经前处理制备成单细胞凝胶玻片进行电泳,使用Komet 6.0软件分析单细胞显微图像,每种组织分析100个细胞(胃组织50个细胞),计算尾部DNA百分含量。进行微核实验,收集大鼠骨髓细胞进行涂片,计数2 000个嗜多染红细胞(PCE)中含微核细胞(MNPCE)的数目及嗜多染红细胞微核率。结果:与空白对照组比较,模型药物可使大鼠外周血淋巴、肝、胃、睾丸细胞组织的尾部DNA百分含量明显增加(P<0.05),并可使大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率明显升高(P<0.05)。结论:彗星实验可用于动物体内多种脏器遗传毒性的检测;微核实验可用于动物骨髓细胞的遗传毒性检测。

叶下珠有效部位总提取物致突变实验研究

目的评价叶下珠有效部位总提取物的致突变性。方法采用微核实验、Ames实验和体外染色体畸变实验对叶下珠有效部位总提取物进行了诱变性检测。结果小鼠体内骨髓细胞微核实验未发现骨髓细胞微核率增加,Ames实验中对TA97,TA98,TA100,TA102 4种菌株加与不加S9均未发现回变菌落数增加,体外染色体畸变实验加与不加S9均未发现染色体畸变率超过5%。3个实验结果均为阴性。结论在该实验条件下,未检出叶下珠有效部位总提取物的诱变性。

双苯氟嗪小鼠急性毒性及体内致突变毒性评价

目的考察双苯氟嗪 (dipfluzine)对小鼠的急性毒性及体内致突变毒性。 方法小鼠灌胃给予双苯氟嗪 ,计算LD50 ;微核实验设 6组 :空白对照组 (水 )、溶剂对照组 (5g/L羧甲基纤维素钠 )、阳性对照组 (环磷酰胺 )、和双苯氟嗪 3个剂量组 (2 .8、1 .4和 0 .7g/kg) ,于给药 2 4h后取骨髓 ,计数各组骨髓细胞微核率 ;骨髓细胞染色体畸变实验 :小鼠给药与分组同微核试验 ,分别于给药 1 2、2 4、4 8h后取骨髓进行染色体畸变分析。结果小鼠灌胃给予双苯氟嗪LD50 为 (5 6 81± 6 5 0 )mg/kg ;剂量分别为 2 .8、1 .4和 0 .7g/kg时 ,微核实验和骨髓细胞染色体畸变实验中 ,各给药组骨髓细胞微核率和染色体畸变率与空白对照组比较均无显著性差异 (P均 >0 .0 5 ) ,也无剂量反应关系 ,实验结果均为阴性。结论双苯氟嗪在小鼠体内无致突变作用。

大鼠体内多终点实验评价N-亚硝基二乙胺的遗传毒性研究

目的:采用N-亚硝基二乙胺(DEN)作为阳性化合物建立大鼠肝微核实验方法,同时结合彗星实验及外周血微核实验终点于同一个实验中,综合评价其遗传毒性。方法:实验设置阴性对照组(生理盐水)、DEN低(3. 13 mg·kg-1)、中(6. 25 mg·kg-1)、高(12. 5 mg·kg-1)剂量组、Comet阳性对照组(EMS,100mg·kg-1)共5个给药组,每组5只雄性SD大鼠,连续ig给药,在d 14给药后约21 h进行末次给药,在末次给药后约3 h进行外周血采样,进行微核实验,采用流式细胞术测定网织红细胞微核率,并麻醉动物进行彗星和肝微核实验肝脏的取样、处理,最后分别通过Comet Assay软件和荧光显微镜获得结果。结果:肝微核实验中,中、高剂量DEN染毒组肝脏的微核率与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系(r=0. 98,P <0. 01);彗星实验中,所有DEN染毒组肝脏的尾DNA百分含量与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系(r=0. 91,P <0. 05);外周血微核实验中,所有DEN染毒组与阴性对照组相比,外周血网织红细胞微核率均没有明显的升高。结论:本实验初步建立了大鼠肝微核重复剂量实验方法,在同一实验中进行肝微核实验、外周血微核实验以及彗星实验多终点的联合检测,不仅可节省实验动物数量,而且可提高实验效率,大大增加遗传毒性实验结果对致癌性的预测性。

油松花粉遗传毒性研究

目的探讨油松花粉的遗传毒性,为其应用提供安全性毒理学评价依据。方法用鼠伤寒沙门细菌营养缺陷型突变株TA97(a)、TA 98、TA 100和TA 102,采用平皿掺入法进行Ames实验,将实验分为加和不加代谢激活系统S9 2组平行实验。受实物设5个剂量组(0.008、0.040、0.200、1.000、5.000 mg/皿)。应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验,检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率;利用小鼠精子畸形实验,观察不同浓度的油松花粉致小鼠精子畸形的数目。结果在Ames实验中,油松花粉各剂量组引起的回变菌落数未超过对照组自发回变菌落数的1倍以上;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验显示,油松花粉3个剂量组的微核发生率均在正常范围内,与阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05),与阳性对照组比较差异显著(P<0.05);小鼠精子畸形实验显示,油松花粉3个剂量组的精子畸形率均在正常范围内,与阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05),与阳性对照组比较差异显著(P<0.05)。结论油松花粉对所实菌株、小鼠体细胞及生殖细胞无诱变性。

农药粮种安诱变性研究

本实验采用的昆明鼠是由中国预防医科院实验动物中心提供的,体重为25克左右,以灌胃方式给药,受试物是以花生油做溶剂,试验鼠适应饲养五日后随机分组实验,剂量组为LD50之1/2、1/4、1/8、和1/16四个组,并平行设有阴性对照组（花生油）和阳性对照（环磷酰胺）,精子畸变实验,是在连续给药五天,然后于首次给药后的35日取材,附睾精子涂片是用甲醇固定,伊红染色,阳性对照组环磷酰胺:40mg/kg微核实验:连续二日给药,24小时后取材,胸骨骨髓涂片经甲醇固定,吉姆萨染色,其阳性对照组环磷酰胺是70mg/kg,以上各实验组鼠数均为五只,观察细胞数5000个,然后经统计分析评价,结果如下:

盐酸右苄替米特致突变试验研究

盐酸右(艹卡)替米特(Dexetimide)是一种,抗巴金森氏症新药,国内已研制成功。是一种强力,长效中枢抗胆碱药物。口服至少维持24小时有药效。注射一次维持2-3天。且付作用小。 我们按药典规定作一系列特殊毒理实验;微生物回复突变实验,染色体畸变试验,微核实验,均匀阴性。证明盐酸右(艹卡)替米特(Dexetimide)无致突变作用,与国外报导相一致。

天坤疏通胶囊的致突变毒性研究

天坤疏通胶囊系由保定市抚仁医药研究所研制,作为一种抗不孕不育新药,其良好的抗不孕不育作用已为先期的实验所证实,天坤疏通胶囊很可能是一治疗不孕不育症且极具临床开发价值的新型药物。目前,关于天坤疏通胶囊的特殊毒性尚未见报道。本实验对天坤疏通胶囊的体内外致突变毒性进行了研究,以便为开发此药提供遗传学资料。