微核糖核酸-125a通过调控细胞凋亡和炎症反应延缓阿尔茨海默病进展的研究

目的 探究微核糖核酸-125a(mircoRNA-125a,简称miR-125a)在PC12阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)细胞模型中,对细胞凋亡、总神经突生长和炎症因子水平的影响。方法 采用Aβ1-42毒化神经生长因子诱导的PC12细胞株构建PC12 AD模型细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应检测miR-125a相对表达量。将miR-125a模拟物(mimic)、对照mimic、miR-125a抑制剂(inhibitor)和对照inhibitor转染至PC12 AD模型细胞后,统计Hoechst 33342阳性细胞数和碘化丙啶阳性细胞数,计算细胞凋亡率;于显微镜下观察细胞形态,计算总神经突生长长度;采用ELISA法测定细胞上清液中炎症因子水平。结果 Aβ1-42组miR-125a相对表达量显著少于对照组(P<0.05)。miR-125a mimic组细胞凋亡率为(7.55±1.56)%,显著低于对照mimic组的(13.00±1.11)%(P<0.05);miR-125a inhibitor组细胞凋亡率为(19.34±2.41)%,显著高于对照inhibitor组的(13.11±2.04)%(P<0.01)。miR-125a mimic组中乳酸脱氢酶(LDH)毒性细胞比例为(6.14±1.20)%,显著低于对照mimic组的(15.43±2.55)%(P<0.05);miR-125a inhibitor组中LDH毒性细胞比例为(23.07±3.86)%,显著高于对照inhibitor的(14.79±2.26)%(P<0.05)。miR-125a mimic组总神经突生长长度为(34.54±2.95)μm,较对照mimic组的(23.93±2.64)μm显著增长(P<0.01)。miR-125a inhibitor组总神经突生长长度为(18.47±2.27)μm,较对照inhibitor组的(24.62±1.52)μm显著缩短(P<0.05)。miR-125a mimic组中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17水平较对照mimic组均显著降低(P<0.01或0.001)。miR-125a inhibitor组中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17水平较对照inhibitor组均显著增高(P<0.05或0.01)。miR-125a mimic组中脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA和蛋白质相对表达量均较对照mimic组显著增加(P值均<0.01)。miR-125a inhibitor组中BDNF mRNA和蛋白质相对表达量均相较对照inhibitor组显著减少(P值均<0.01)。结论 miR-125a可能对Aβ1-42毒化的分化PC12细胞株具有保护作用。

重复经颅磁刺激对阿尔茨海默病患者临床症状及血浆微小核糖核酸-125b、血浆磷酸化Tau-181蛋白的影响

目的:观察重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者认知功能、神经精神行为症状及血浆微小核糖核酸-125b(microRNA-125b,miR-125b)、血浆磷酸化Tau-181蛋白(phosphorylated Tau181 protein,P-tau181)表达的影响。方法:筛选轻中度AD患者34例,随机分为对照组(n=16)和试验组(n=18)。对照组采取认知训练及重复经颅磁伪刺激,试验组采取认知训练结合重复经颅磁真刺激。磁刺激强度为100%的静息运动阈值,频率为10Hz,每日治疗1次,每周治疗5天,持续4周,刺激脑区为左侧前额叶背外侧区和左侧颞叶区。在治疗前、后进行Addenbrooke-Ⅲ认知检查(the AddenbrookeⅢcognitive examination,ACE-Ⅲ)、简易精神状态量表(mini-mental state scale,MMSE)及神经精神症状问卷(neuropsychiatric inventory,NPI)评估,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测微小miR-125b表达量,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测P-tau181的浓度。结果:治疗结束后,试验组ACE-Ⅲ、MMSE和NPI评分以及miR-125b、P-tau181均较组内治疗前显著改善,差异具有显著性意义(P<0.05),且上述指标与对照组治疗后相比,差异具有显著性意义(P<0.05);而对照组各项指标改善不具有显著性意义(P>0.05)。结论:rTMS能改善轻中度AD患者的认知功能及神经精神行为症状,这可能与rTMS促进血浆miR-125b的表达和抑制P-tau181蛋白产生相关。

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P<0.05),促进Caspase 2表达(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P<0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P<0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P<0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P<0.05),促进Survivin的蛋白表达(P<0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P<0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。

微小核糖核酸-21调控spry2影响Jurkat细胞炎症反应的研究

目的:探讨微小核糖核酸(miRNA)-21通过调控spry2进而对Jurkat细胞炎症反应的影响。方法:将人T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞分为miRNA-21模拟物组、miRNA-21模拟物阴性对照组、miRNA-21抑制物组和miRNA-21抑制物组阴性对照组,每组例数为8,进行细胞转染,使用荧光定量PCR检测各组细胞的miRNA-21和spry2 mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹技术检测各组spry2蛋白表达情况,同时用酶联免疫法检测细胞上清液IL-10、IL-2和TNF-α的分泌水平。结果:与其阴性对照组比较,模拟物组miRNA-21的相对表达量和IL-10的分泌水平明显增加(P<0.05),spry2 mRNA的相对表达量和spry2的相对蛋白含量显著减少(P<0.05);抑制物组miRNA-21的相对表达量和细胞上清液IL-10的分泌水平明显减少(P<0.05),spry2 mRNA相对表达量和spry2的相对蛋白含量显著增加(P<0.05);两组细胞上清液TNF-α和IL-2的分泌水平均无明显变化(P>0.05)。结论:在Jurkat细胞中,miRNA-21可能通过抑制其靶基因spry2的表达而促进抗炎细胞因子IL-10的分泌,表明miRNA-21可能通过影响IL-10的分泌而作为血管的一种保护因子。

成人癫痫患者血清miR-146a、miR-125a、TLR4水平及临床意义

目的 探讨成人癫痫患者血清微小核糖核酸(miR)-146a、miR-125a、Toll样受体4(TLR4)水平及其与疾病严重程度的关系。方法 选取2020年8月至2023年8月新疆维吾尔自治区人民医院收治的69例癫痫患者作为癫痫组,另选取同期体检的69例健康人群作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测入组对象血清miR-146a、miR-125a水平,采用酶联免疫吸附试验检测血清TLR4、白细胞介素(IL)-1β、IL-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。根据脑电图检测结果,将癫痫患者分为轻度组、中度组和重度组,并比较3组患者血清miR-146a、miR-125a、TLR4、IL-1β、IL-2和TNF-α水平。采用Pearson相关分析癫痫患者血清miR-146a、miR-125a、TLR4水平与IL-1β、IL-2、TNF-α水平的关系,采用Spearman相关分析癫痫患者血清miR-146a、miR-125a、TLR4水平与疾病严重程度的关系。结果 癫痫组血清miR-146a、miR-125a水平低于对照组,TLR4、IL-1β、IL-2和TNF-α水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。脑电图检测结果显示,轻度组、中度组及重度组分别有23、25和21例,3组患者血清miR-146a、miR-125a、TLR4、IL-1β、IL-2和TNF-α水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);且血清miR-146a、miR-125a水平均为轻度组>中度组>重度组,血清TLR4、IL-1β、IL-2和TNF-α水平均为轻度组<中度组<重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,癫痫患者血清miR-146a和miR-125a水平与IL-1β、IL-2、TNF-α水平呈负相关(P<0.05),TLR4水平与IL-1β、IL-2、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,癫痫患者血清miR-146a和miR-125a水平与疾病严重程度呈负相关(P<0.05),TLR4水平与疾病严重程度呈正相关(P<0.05)。结论 成人癫痫患者血清miR-146a、miR-125a表达下调,TLR4表达上调,且三者与IL-1β、IL-2和TNF-α水平相关,可以评估癫痫患者疾病严重程度。

中心性肥胖2型糖尿病189例血清微RNA-221表达与微血管并发症的关系

目的探讨中心性肥胖2型糖尿病(T2DM)病人血清微RNA-221(miR-221)表达与微血管并发症的关系。方法将2019年6月至2021年9月聊城市第二人民医院收治的中心性肥胖T2DM病人189例作为观察组,另选取181例健康体检者作为对照组,检测并比较两组的血清miR-221表达水平。根据观察组有无并发微血管并发症将其分为并发组和未并发组,采用多因素logistic回归分析微血管并发症发生的影响因素,并绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析相关血清指标对微血管并发症发生的诊断价值。结果观察组腹围、身体质量指数和空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血尿酸(UA)均高于对照组(P<0.05),血清miR-221水平高于对照组(0.86±0.27比0.32±0.06,P<0.05);观察组微血管并发症发生率为51.32%(97/189);并发组年龄、合并高血压及高脂血症占比、病程、未按时服药占比及空腹血糖、HbA1c、hs-CRP、UA均高于未并发组(P<0.05),血清miR-221水平高于未并发组(0.91±0.25比0.81±0.16,P<0.05),且均是中心性肥胖T2DM病人出现微血管并发症的危险因素(P<0.05);血清miR-221水平诊断中心性肥胖T2DM病人微血管并发症的临界值、灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.83、88.66%、79.35%、0.81,其诊断价值低于HbA1c水平(P<0.05),高于hs-CRP和UA水平(P<0.05),与空腹血糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清miR-221水平在中心性肥胖T2DM病人中呈高表达,是微血管并发症发生的危险因素,且对微血管并发症发生具有重要的临床诊断价值。

微核糖核酸-221对小鼠癫痫神经元细胞的作用及其机制研究

目的探讨微核糖核酸(miRNA)-221对小鼠癫痫神经元细胞氧化应激和凋亡影响的机制。方法建立癫痫神经元细胞株模型,随机分为正常对照组、miRNA阴性对照(miRNA-con)组和miRNA-221 mimic转染(miRNA-221)组,每组样本12例。采用实时荧光定量RT-PCR法检测细胞miRNA-221的表达;ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量;免疫印迹实验检测细胞中bcl-2、Bax、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-Caspase3)、血红素氧化酶1(HO-1)、核转录相关因子2(Nrf2)蛋白质表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果在各组细胞进行转染干预后,miRNA-con组的miRNA-221表达水平(0.95±0.12),显著低于miRNA-221组(3.14±0.25,F=168.190,P<0.05)。miRNA-con组的GSH表达水平(96.27±12.20)显著低于miRNA-221组(162.65±19.53),miRNA-con组细胞的MDA表达水平(97.46±10.19)显著高于miRNA-221组(58.66±8.81,F=168.190、19.352,P值均<0.05)。miRNA-con组的凋亡率为(16.34±1.20)%,显著高于miRNA-221组[(8.75±1.53)%,F=27.115,P<0.05],而与正常对照组(15.71±1.46)%的差异无统计学意义(P>0.05)。与miRNA-con组相比,miRNA-221组细胞中抗凋亡蛋白质bcl-2表达水平显著升高,促凋亡蛋白质Bax和cleaved-Caspase3表达水平显著降低,抗氧化应激蛋白质HO-1、Nrf2的表达水平显著升高(P值均<0.01)。结论过表达miRNA-221可减轻小鼠癫痫神经原细胞的氧化应激和凋亡反应诱导的细胞损伤。

miR-125a对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及机制

目的探讨微小RNA-125a(miR-125a)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响及机制。方法常规培养人EC细胞(JEC、HEC-1B、Ishikawa细胞)和子宫内膜上皮细胞(ECS细胞)。用RT-PCR法检测细胞中miR-125a表达,筛选miR-125a表达最低的细胞为实验细胞。取对数生长期miR-125a表达最低的EC细胞,并将其随机分为miR-NC组、miR-125a mimics组,分别转染miRNA阴性对照miR-NC、miR-125a模拟物miR-125a mimics。用RT-PCR法检测miR-125a表达,用CCK-8实验检测细胞增殖活性(OD值),用平板克隆实验检测细胞集落形成能力,用流式细胞术检测细胞凋亡能力(凋亡率),用Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测细胞内LIN28同系物B(LIN28B)蛋白表达。结果与ECS细胞比较,JEC、HEC-1B、Ishikawa细胞中miR-125a相对表达量均低(P均<0.05),且Ishikawa细胞miR-125a的相对表达量最低,将其作为实验细胞。与miR-NC组比较,miR-125a mimics组miR-125a表达高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-125a mimics组培养24、48、72 h后OD值低,集落形成数少,凋亡率高,迁移细胞数、侵袭细胞数少,LIN28B蛋白相对表达量低,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论上调miR-125a表达可抑制EC细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡,该作用可能与其靶向调控LIN28B表达有关。

微核糖核酸-124靶向Jagged2对低氧性肺动脉高压新生大鼠血管重塑的影响

目的探究微核糖核酸-124(简称miR-124)对低氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠血管重塑的影响,及其与Jagged2的靶向关系。方法将48只Wistar新生大鼠随机分为常氧组、低氧组、miR-124组和miR-124阴性对照(NC)组,每组12只。miR-124组和miR-124 NC组大鼠分别给予相应的miR-124激动剂或miR-124 NC行尾静脉注射。除常氧组正常饲养外,将其余3组大鼠置于氧气体积分数为0.1的常压低氧舱中28 d,制备HPH大鼠模型。使用压力信号采集系统记录平均肺动脉压(mPAP);计算右心室肥大指数[RV/(LV+S)];采用H-E染色检测肺组织病理学变化,并计算肺血管内壁厚度与外径的比值(MT%)、内膜横截面积与总动脉横截面积的比值(MA%);检测血清NO、内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平;实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织miR-124、Jagged2 mRNA水平;免疫印迹实验检测大鼠肺组织Jagged2、split多毛增强子1(Hes-1)蛋白质水平;双荧光素酶实验验证miR-124与Jagged2的靶向关系。结果与常氧组相比,低氧组和miR-124 NC组大鼠的mPAP和右心室肥大指数、MT%和MA%、ET和AngⅡ水平均显著升高(P值均<0.05),NO水平显著降低(P<0.05)。与低氧组和miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的mPAP和右心室肥大指数、MT%和MA%、ET和AngⅡ水平均显著降低(P值均<0.05),NO水平显著升高(P<0.05)。肺组织H-E染色结果显示,低氧组和miR-124 NC组大鼠肺动脉壁明显增厚,管腔变窄,细胞排列紊乱,呈现肺动脉重塑特征。与miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的肺动脉壁增厚程度明显减轻,管腔狭窄不明显。与常氧组相比,低氧组和miR-124 NC组大鼠肺组织的miR-124水平显著降低(P值均<0.05),Jagged2 mRNA、Jagged2和Hes-1蛋白质水平均显著升高(P值均<0.05)。与低氧组和miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的miR-124水平显著升高(P值均<0.05),Jagged2 mRNA、Jagged2和Hes-1蛋白质水平均显著降低(P值均<0.05)。双荧光素酶实验结果证实,miR-124与Jagged2存在靶向结合位点。结论miR-124可能通过靶向下调Jagged2表达改善HPH诱导的肺血管重塑。

乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

中枢性性早熟女童血清微小核糖核酸-125b和微小核糖核酸-664-2表达及与促性腺激素释放激素激动剂疗效的关系

目的 探讨中枢性性早熟女童血清微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-664-2(miR-664-2)表达及与促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)疗效的关系。方法 选取2020年1月-2022年12月宁波大学附属人民医院收治的120例中枢性性早熟女童作为研究组,另招募健康体检女童127例作为对照组。采用实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组血清miR-125b、miR-664-2表达量并比较。研究组采用GnRHa治疗,对比研究组治疗前后血清性激素水平,评价研究组临床疗效,比较研究组治疗有效与治疗无效女童的血清miR-125b、miR-664-2表达量,采用logistic回归分析法分析研究组治疗无效的影响因素。结果 研究组血清miR-125b、miR-664-2表达均高于对照组(P<0.05)。研究组治疗后血清miR-125b、miR-664-2表达,黄体生成素(LH)、雌激素(E_2)、卵泡刺激素(FSH)水平均低于治疗前(均P<0.05)。研究组治疗总有效率为74.17%。研究组治疗无效女童治疗前后血清miR-125b、miR-664-2表达均高于治疗有效女童(均P<0.05),治疗有效女童治疗后血清miR-125b、miR-664-2表达均低于治疗前(均P<0.05),而治疗无效女童治疗前后比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。发病年龄(OR=0.456,95%CI:0.246~0.844),骨龄(OR=2.368,95%CI:1.290~4.347),未遵医嘱调整饮食(OR=2.843,95%CI:1.801~4.489),经常使用成人洗护用品(OR=2.818,95%CI:1.508~5.266),治疗前血清miR-125b表达(OR=3.196,95%CI:1.694~6.032)、miR-664-2表达(OR=3.873,95%CI:2.126~7.055)均是治疗无效的影响因素(均P<0.05)。结论 中枢性性早熟女童血清miR-125b、miR-664-2表达升高,与性激素有关,且是GnRHa治疗无效的危险因素。

非小细胞肺癌患者血清miR-873和miR-138-5p表达水平及其与免疫微环境及预后的相关性分析

目的探讨血清微小核糖核酸(micro RNA,miRNAs)-873和微小核糖核酸-138-5p表达与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者肿瘤免疫微环境(tumor immune microenvironment,TIME)以及预后的关系。方法选择2019年2月~2021年2月重庆医科大学附属巴南医院收治的108例NSCLC患者(NSCLC组)和65例门诊体检的健康志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-873和miR-138-5p表达,多重免疫荧光染色法检测TIME指标,出院后定期随访。Pearson分析血清miR-873和miR-138-5p表达与TIME指标的相关性,Kaplan-Meier和COX比例风险回归分析miR-873,miR-138-5p与NSCLC患者预后的关系。结果与对照组比较,NSCLC组血清miR-873(1.02±0.23 vs 3.15±0.82)和miR-138-5p(1.21±0.26 vs 3.54±0.92)表达降低,差异具有统计学意义(t=-25.426,-24.769,均P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低中度分化患者血清miR-873和miR-138-5p表达低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、高度分化患者(t=9.615,10.253;6.889,3.361,均P<0.05)。血清miR-873,miR-138-5p表达与PD-1,PD-L1,CD4和CD8 H值呈负相关(r=-0.418~-0.673,均P<0.05)。低表达miR-873和miR-138-5p的NSCLC患者OS生存率低于高表达miR-873和miR-138-5p的NSCLC患者(Log-Rankχ^(2)=4.724,5.607,P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期是NSCLC患者不良预后的危险因素(P<0.05),miR-873,miR-138-5p是保护因素(P<0.05)。结论NSCLC患者血清miR-873和miR-138-5p表达下调,且与TIME以及低生存率有关。

口腔鳞状细胞癌组织中LncRNA CASC9、miR-125a-3p表达变化及临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中长链非编码核糖核酸(LncRNA)癌症易感性候选基因9(CASC9)、微小核糖核酸-125a-3p(miR-125a-3p)的表达变化及临床意义。方法选取OSCC患者80例,术中收集OSCC组织及对应癌旁组织,实时荧光定量PCR法检测组织中LncRNA CASC9、miR-125a-3p。用Pearson相关法分析OSCC组织中LncRNA CASC9与miR-125a-3p表达的相关性,并分析LncRNA CASC9、miR-125a-3p表达与OSCC患者临床病理参数的关系。术后随访3年,比较LncRNA CASC9、miR-125a-3p高/低表达者总生存率;Cox回归模型分析LncRNA CASC9、miR-125a-3p对OSCC患者预后的影响。结果与癌旁组织比较,OSCC组织中LncRNA CASC9表达高,miR-125a-3p表达低(P均<0.05)。Pearson相关法分析显示,OSCC组织中LncRNA CASC9与miR-125a-3p表达呈负相关(r=-0.754,P<0.05)。不同分化程度、TNM分期及是否有淋巴结转移的OSCC组织中LncRNA CASC9、miR-125a-3p表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,患者死亡24例,总生存率为70.00%(56/80)。LncRNA CASC9高表达者(≥1.20,42例)3年总生存率59.52%(25/42)低于LncRNA CASC9低表达者(<1.20,38例)81.58%(31/38),miR-125a-3p高表达者(≥1.04,39例)3年总生存率79.49%(31/39)高于miR-125a-3p低表达者(<1.04,41例)60.98%(25/41),比较差异有统计学意义(P均<0.05)。低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和LncRNA CASC9≥1.20为OSCC患者预后的独立危险因素(P均<0.05),miR-125a-3p≥1.04为OSCC患者预后的独立保护因素(P<0.05)。结论LncRNA CASC9高表达、miR-125a-3p低表达与OSCC患者组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

脓毒症患者外周血miR-125b、miR-150表达及其临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-150(miR-150)表达及其临床意义。方法 选取邢台市中心医院收治的103例脓毒症患者为研究组,另选取体检健康者82例为健康组,均测定外周血miR-125b、miR-150表达及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平。对比研究组、健康组各指标水平,采用Pearson相关性分析法分析脓毒症患者miR-125b、miR-150表达与IL-6、CRP、PCT水平的关系;比较不同严重程度脓毒症患者及不同预后患者的miR-125b、miR-150表达;采用多因素Logistic回归分析法分析miR-125b、miR-150表达与预后的关系;通过受试者工作特征曲线分析miR-125b、miR-150表达对脓毒症预后的预测价值。结果 研究组外周血miR-125b表达与IL-6、CRP、PCT水平分别为(2.43±0.35)、(159.42±26.81)pg/mL、(115.47±20.38)mg/L、(10.57±2.03)ng/mL,均高于健康组(t=31.012、52.149、48.978、46.945,均P=0.000),miR-150表达(0.21±0.04)低于健康组(t=52.008,P=0.000);经Pearson相关性分析,脓毒症患者外周血miR-125b表达与IL-6(r=0.706,P=0.016)、CRP(r=0.711,P=0.013)、PCT(r=0.759,P=0.001)水平均呈正相关,miR-150与IL-6(r=-0.702,P=0.018)、CRP(r=-0.709,P=0.015)、PCT(r=-0.728,P=0.006)水平均呈负相关;脓毒症者外周血miR-125b表达(2.16±0.43)低于严重脓毒症者(2.82±0.27)(t=8.815,P=0.000),脓毒症者外周血miR-150表达(0.24±0.02)高于严重脓毒症者(0.16±0.03)(t=16.248,P=0.000);入院28 d生存者外周血miR-125b表达(2.25±0.41)低于死亡者(3.13±0.36)(t=8.982,P=0.000),生存者外周血miR-150表达(0.23±0.04)高于死亡者(0.13±0.02)(t=11.078,P=0.000);年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、疾病严重程度及外周血miR-125b表达均是脓毒症患者预后的危险因素(OR=2.438、2.689、2.866、2.824,P=0.036、0.012、0.000、0.005),miR-150表达是其保护因素(OR=0.390,P=0.003);外周血miR-125b、miR-150表达预测脓毒症预后的最佳截断点分别为2.854、0.179,灵敏度分别为76.19%、80.95%,特异度分别为79.27%、75.61%,曲线下面积分别为0.861、0.843。结论 与健康人群比较,脓毒症患者外周血miR-125b表达升高,而miR-150表达降低,且miR-125b、miR-150表达均与炎症因子水平、疾病严重程度及预后相关,并对预后具有一定的预测价值,可作为临床判断病情严重程度及预后的指标。

肝细胞癌组织微RNA-597表达与临床病理特征、肝动脉化疗栓塞术疗效的关系

目的 探讨肝细胞癌组织微核糖核酸-597(miR-597)表达与临床病理特征、肝动脉化疗栓塞术(TACE)疗效的关系。方法选取2019年1月至2021年1月荆门市人民医院收治的肝细胞癌病人136例,比较不同临床病理特征病人癌组织中miR-597表达水平;另治疗后随访3个月,根据TACE疗效将病人分为有效组和无效组,并比较miR-597表达水平;采用多因素logistic回归分析影响肝细胞癌病人TACE疗效的相关因素。结果 伴门静脉癌栓、伴淋巴结转移、肿瘤长径>5 cm、Ⅲa期、低分化、Child-Pugh分级B级的肝细胞癌病人癌组织中miR-597表达水平均低于无门静脉癌栓、无淋巴结转移、肿瘤长径≤5 cm、Ⅰb+Ⅱ期、中高分化、Child-Pugh分级A级的病人(P<0.05);TACE治疗后,治疗有效率为22.06%,有效组癌组织中miR-597表达水平高于无效组(0.827±0.054比0.351±0.046,P<0.05);经logistic回归分析发现,门静脉癌栓、淋巴结转移、肿瘤长径、临床分期、病理分化、Child-Pugh分级、微血管侵犯、血清甲胎蛋白(AFP)及癌组织中miR-597表达水平均是肝细胞癌病人TACE疗效的影响因素(P<0.05)。结论 肝细胞癌组织miR-597表达水平与病人临床病理学特征密切相关,且miR-597表达水平亦与TACE疗效有关,其低表达量常提示TACE疗效不佳。

非霍奇金淋巴瘤患者血清β_2-微球蛋白和CA125检测的意义

目的：探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者血清β2-微球蛋白（β2-MG）和CA125检测的临床意义。方法检测76例NHL患者及32例体检健康者的血清β2-MG和CA125水平，分析β2-MG和CA125与疾病临床进展及预后的关系。结果 NHL患者血清β2-MG和CA125水平高于健康体检者（P〈0.05）；β2-MG和CA125水平与患者年龄和性别均无相关性（P〉0.05）；侵袭性和高侵袭性淋巴瘤患者的β2-MG和CA125水平比惰性淋巴瘤患者高（P〈0.05）；Ⅲ～Ⅳ期比Ⅰ～Ⅱ期患者的β2-MG和CA125水平高（P〈0.05）；患者经2个周期化疗后β2-MG和CA125的水平较治疗前下降（P〈0.05）。结论血清β2-MG和CA125水平检测可作为NHL诊断、疾病恶性程度、分期、疗效评估的参考指标。

三螺旋脱氧核糖核酸的研究进展

阐述了三螺旋DNA的发展和最新动态 ,并从 3个方面展开评述 :( 1 )三螺旋DNA稳定性的研究。三螺旋DNA的稳定性不仅取决于寡聚核苷酸的内在结构 ,还受外界环境如溶液的pH值、阳离子的种类和价态、DNA分子嵌入试剂和共聚物等的影响 ;( 2 )三螺旋DNA的应用。三螺旋DNA的形成为基因操纵和基因疗法提供了新方法 ,它在抑制DNA转录、复制、基因定点诱变、定点切割和诱导基因重组等方面有重要的应用前景 ;( 3 )三螺旋DNA的检测方法 ,包括紫外 可见吸收光谱法、荧光分析法、原子力显微术和顺磁共振谱等。

高级别浆液型卵巢癌中微RNA 18a-5p糖类抗原-125人附睾蛋白4表达及其意义

卵巢恶性肿瘤是妇科常见的三大恶性肿瘤之一,其发病率位居子宫颈癌及子宫内膜癌后的第三位,致死率却居首位[1]。由于卵巢在盆腔较深位置,一般不易扪及,且早期没有明显症状;在临床上患者如果有腹胀、腹部肿块或腹腔积液等表现,显示肿瘤已长大或到晚期。数据表明早期卵巢癌患者的5年存活率可高达85%以上,晚期患者不足30%[2]。其中高级别浆液型卵巢癌(HGSOC)是卵巢癌患者死亡的最主要原因,所占比例达70%~80%,且病死率居高不下[2]。

miR-525-5p、围脂滴蛋白3的表达与胶质瘤预后的关系研究

目的 探讨微核糖核酸-525-5p(mi R-525-5p)、围脂滴蛋白3(PLIN3)的表达与胶质瘤预后的关系。方法选取2018年2月至2020年7月青岛市市立医院收治的102例胶质瘤患者,收集术中部分瘤组织和瘤旁组织采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测mi R-525-5p、PLIN3 m RNA表达,免疫组织化学染色法检测PLIN3表达。通过Target Scan数据库预测mi R-525-5p与PLIN3的结合位点,分析二者在胶质瘤组织中表达的相关性。根据胶质瘤组织中PLIN3 m RNA表达均值分为高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制高/低PLIN3 m RNA表达胶质瘤患者生存曲线,多因素Cox回归分析胶质瘤患者预后影响因素。结果 与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中mi R-525-5p表达降低,PLIN3 m RNA表达升高(P<0.05)。与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中PLIN3阳性率升高(P<0.05)。mi R-525-5p与PLIN3存在结合位点。mi R-525-5p与PLIN3 m RNA表达在胶质瘤组织中呈负相关(P<0.05)。PLIN3 m RNA高表达组3年总生存率低于低表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,低分化、世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、PLIN3 m RNA≥1.86为胶质瘤患者死亡的独立危险因素(HR>1,P<0.05)。结论 胶质瘤组织中mi R-525-5p低表达和PLIN3 m RNA高表达,二者表达呈负相关,PLIN3 m RNA高表达与胶质瘤患者预后不良有关。

超声微泡介导的膀胱癌抑制因子miR-490-5p调控转录因子ZEB1对膀胱癌细胞的影响研究

目的:探究微泡介导的膀胱癌抑制因子微小核糖核酸(miR)-490-5p调控锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:检测人膀胱上皮细胞.人膀胱癌细胞VM-CUB-3、639V和5637、HT-1197细胞中mi R-490-5p和ZEB1 mRNA与蛋白的表达情况。选择人膀胱癌639V细胞株进行实验,对639V细胞给予1%、5%、10%、20%浓度水平的微泡以及超声强度为0.5 W/cm2、0.75 W/cm2的超声照射30 s处理,筛选超声强度为0.5 W/cm2、微泡浓度为10%;将常规培养639V细胞纳入对照组,将培养及微泡制备后的639V细胞分别纳入超声微泡组、超声微泡转染miR-490-5p组、脂质体转染miR-490-5p组及超声微泡转染miR-490-5p+ZEB1组,分别检测5组639V细胞增殖抑制率、侵袭细胞数及划痕愈合率,并用Westernblot法检测5组639V细胞ZEB1、增殖细胞核抗原(PCNA)、钙黏蛋白E(E-cad)和钙黏蛋白N(N-cad)水平。结果:膀胱癌VM-CUB-3、639V、5637和HT-1197细胞与人膀胱上皮细胞相比,miR-490-5p水平降低,ZEB1mRNA和ZEB1蛋白水平均升高,其中639V细胞差异最明显。在超声0.5 W/cm2、微泡浓度10%的处理条件下,超声微泡组细胞增殖抑制率和E-cad蛋白均高于对照组,差异有统计学意义(t=22.282,t=4.517;P<0.05),PCNA蛋白水平、侵袭细胞数和N-cad蛋白和划痕愈合率降低,差异有统计学意义(t=2.441,t=2.325,t=4.572,t=4.417;P<0.05);超声微泡转染miR-490-5p组、脂质体转染miR-490-5p组细胞增殖抑制率、E-cad蛋白高于超声微泡组,差异有统计学意义(t细胞增殖抑制率=16.902,t=12.426;tE-cad=5.586,t=2.765;P<0.05);PCNA蛋白水平、侵袭细胞数、N-cad蛋白和划痕愈合率低于超声微泡组,差异有统计学意义(tPCNA蛋白水平=7.530,t=4.164;t侵袭细胞数=9.007,t=5.682;tN-cad蛋白=8.089,t=4.297;t划痕愈合率=11.366,t=6.665,P<0.05)。超声微泡转染miR-490-5p+ZEB1组细胞增殖抑制率、E-cad蛋白低于超声微泡转染miR-490-5p组,差异有统计学意义(t=2.903,t=6.114,P<0.05),PCNA蛋白水平、侵袭细胞数、N-cad蛋白和划痕愈合率高于超声微泡转染miR-490-5p组,差异有统计学意义(t=6.586,t=4.487,t=5.695,t=4.603,P<0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-490-5p与ZEB1存在靶向关系。结论:超声微泡介导的miR-490-5p可能通过负向调控ZEB1,抑制人膀胱癌细胞639V增殖、侵袭及迁移,超声微泡介导是一种行之有效的转染方式。