基于阵列微流控细胞芯片的植物组分抗氧化活性分析

设计并制作了一种集成有8个重复6×6细胞培养单元的阵列微流控细胞芯片,以实现细胞培养和系列植物组分的细胞抗氧化活性(Cellular antioxidant activity,CAA)分析。芯片主要包含聚二甲基硅烷盖片、288个圆形培养腔体,48个独立平行通道的玻璃基底层,一次可完成8个样本的6个浓度筛选,并可在酶标仪上实现测试。槲皮素、芦丁和山奈酚等植物组分与芯片上培养的细胞作用24 h,细胞存活率大于90%。以芯片上培养的人肝癌细胞HepG2为细胞载体,以2',7'-二氯荧光素-乙酰乙酸酯(2',7'-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)为荧光探针,采用2,2'-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(2,2'-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride,ABAP)为细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)引发剂,测得槲皮素、芦丁、山奈酚等植物组分的CAA unit分别为71.42±0.19、74.31±0.36和69.92±0.09(±s,n=3),IC_(50)分别为(7.20±0.06)μmol/L,(52.06±0.14)μmol/L,(32.55±0.03)μmol/L(±s,n=3)。

超微电极电化学及显微荧光成像时空监测单细胞释放

细胞的受激释放即分泌化学信号分子是胞间通讯最重要、最广泛的一种途径,是其参与生命活动的重要形式,在生命活动中起着非常重要的作用.对其进行研究在神经生物学、细胞生物学、病理学和药学等多个学科领域中都具有非常重要的意义.……

人着床前胚胎的单细胞和单胚胎基因表达研究

在小鼠胚胎发育过程中,有报道显示FGF信号通路在着床前胚胎的细胞分化中起关键作用。然而,人着床前胚胎的细胞分化分子机制尚未明确。本研究利用体外发育第7天和第3天的人着床前胚胎,通过单细胞微流控芯片技术和单胚胎的全基因组表达谱技术,确定了在不同发育阶段中出现的差异表达基因和信号通路变化,发现了FGF/PI3K通路在人内细胞团分化中起到重要作用,同时还锁定该通路中的两个基因FN1和AKT3,是关键的细胞分化基因。因此,与FGF通路相关的细胞分化关键基因可能在胚胎发育、辅助生殖、人类干细胞研究中有重要作用。本研究使用了独特的差异基因分析技术,在寻找发育相关基因中有重要的应用价值。

人参皂苷Rg_(1)、Rb_(1)对脂多糖体外诱导肠上皮屏障损伤的保护作用

目的:基于人髓系白血病单核细胞(THP-1)与肠上皮细胞(Caco-2)共培养体系,研究人参皂苷Rg_(1)和人参皂苷Rb_(1)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1细胞炎症因子释放的影响,及其对THP-1细胞活化致Caco-2细胞炎性损伤的保护作用。方法:首先制备THP-1与Caco-2细胞共培养微流控芯片,实验分为空白组、LPS组和给药组。空白组细胞正常培养;LPS组在上层Caco-2细胞形成单层屏障后,在下层THP-1细胞中加入LPS(1 mg·L^(-1));给药组在LPS组的基础上在THP-1细胞中分别加入33 mg·L^(-1)的人参皂苷Rg_(1)和人参皂苷Rb_(1)。THP-1细胞与Caco-2细胞共培养24 h后采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)示踪法检测下层芯片通道中的FITC-Dextran荧光值。THP-1细胞实验分为空白组、LPS组、给药组。空白组THP-1细胞正常培养;LPS组在THP-1细胞中加入LPS(1 mg·L^(-1));给药组在LPS组的基础上分别加入相应剂量的人参皂苷Rg_(1)和人参皂苷Rb_(1)(11、33、100 mg·L^(-1))。细胞培养24 h后细胞增殖与活性检测(CCK-8)检测THP-1细胞活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测THP-1细胞炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达。Caco-2细胞实验分为空白组、LPS组、给药组。空白组Caco-2细胞正常培养;其他组将第二部分THP-1细胞实验中对应组的细胞上清置换于Caco-2细胞中,继续培养24 h后CCK-8检测Caco-2细胞活性,Real-time PCR检测Caco-2细胞炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α及紧密连接蛋白封闭蛋白(Occludin)表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caco-2细胞紧密连接蛋白Occludin的表达。结果:在THP-1与Caco-2细胞共培养体系中,与LPS组比较,人参皂苷Rg_(1)和Rb_(1)均能有效保护LPS诱导肠上皮屏障通透性升高(P<0.01)。Rg_(1)和Rb_(1)拮抗LPS诱导的THP-1细胞IL-6、IL-1β、TNF-α炎性细胞因子表达升高(P<0.05)。经Rg_(1)和Rb_(1)处理的THP-1细胞上清与Caco-2细胞共培养后,与LPS组比较,显著降低Caco-2细胞IL-6、IL-8、TNF-α炎性细胞因子表达(P<0.01),上调紧密连接蛋白Occludin表达。结论:在THP-1与Caco-2细胞共培养体外模拟肠道上皮屏障功能模型中,人参皂苷Rg_(1)和Rb_(1)通过调节THP-1细胞释放炎性细胞因子,进而调控Caco-2细胞的炎性反应和细胞屏障完整性,在LPS诱导的体外肠上皮屏障损伤中发挥保护作用。