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微测序技术分析人类单核苷酸多态性 被引量:2
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作者 苏畅 刘敬忠 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第4期36-38,共3页
关键词 微测序技术 人类 单核苷酸多态性 DNA列多态性
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基于多重PCR-质谱微测序技术的结核分枝杆菌对一线治疗药物耐药性检测系统构建 被引量:1
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作者 徐晓娜 赵欣 +3 位作者 欧喜超 肖迪 宋衍燕 赵雁林 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期586-593,共8页
目的构建一种基于多重聚合酶链式反应-质谱微测序技术的结核分枝杆菌耐药基因多位点检测方法和检测模块,实现结核分枝杆菌对一线抗结核药物的高通量快速检测,为结核病诊疗提供一种新型技术支撑。方法通过对5个单核苷酸多态性位点靶基因... 目的构建一种基于多重聚合酶链式反应-质谱微测序技术的结核分枝杆菌耐药基因多位点检测方法和检测模块,实现结核分枝杆菌对一线抗结核药物的高通量快速检测,为结核病诊疗提供一种新型技术支撑。方法通过对5个单核苷酸多态性位点靶基因进行多重PCR扩增、单碱质量探针延伸及分子质量测定,同时完成16个突变位点、26种突变型的检测,实现结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、吡嗪酰胺和乙胺丁醇等一线治疗药物抗性的通量检测。采用40例结核分枝杆菌样本、50例呼吸道感染患者咽拭子样本进行检测体系准确性及特异性验证。结果本研究构建了基于5重PCR-质谱联用的结核分枝杆菌对一线治疗药物的泛耐药检测方法,并开发了质谱配套检测系统。采用该系统,结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇抗性检测的准确率和特异性均为100.00%,且具有7 h内完成96个样本的检测通量。结论本研究构建的方法有操作简便、低成本、高通量特点,耐药位点检测全面且准确,并具扩展性,可根据需要增添新突变位点,在结核分枝杆菌耐药性检测中具有良好应用前景。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 一线治疗药物 耐药性 多重聚合酶链式反应-质谱微测序技术
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噬菌体展示随机肽克隆的一种快速、高通量测序技术
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作者 杨芳 张文红 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2011年第3期453-455,共3页
目的:探索应用焦磷酸微测序(Pyrosequencing)技术建立一种针对噬菌体展示随机肽的高通量序列测定方案。方法:环7肽噬菌体展示随机肽库的淘筛后随机挑选10个蓝色噬菌斑作为模板,PCR扩增随机7肽区序列,应用Pyrosequencing技术进行实时测... 目的:探索应用焦磷酸微测序(Pyrosequencing)技术建立一种针对噬菌体展示随机肽的高通量序列测定方案。方法:环7肽噬菌体展示随机肽库的淘筛后随机挑选10个蓝色噬菌斑作为模板,PCR扩增随机7肽区序列,应用Pyrosequencing技术进行实时测序和分析。结果:应用Pyrosequencing技术对10例样品的随机7肽区进行序列分析,得到一个GXXXHPQ的同源基序(X为任意氨基酸),此基序为链亲合素的结合肽基序,结果与预期相符合。结论:Pyrosequencing技术具有操作简易快速、高通量的优点,必定可以广泛应用于各种随机肽库的筛选测序。 展开更多
关键词 随机肽 焦磷酸微测序技术
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植入前遗传学诊断新进展 被引量:1
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作者 李雷 金帆 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2009年第5期320-323,共4页
植入前遗传学诊断是辅助生殖技术的一个重要方面,其发展日新月异。新方法、新技术不断出现并应用于临床植入前遗传学诊断中,如微阵列比较基因组杂交、微测序技术、多重置换扩增等。这些方法及两个或两个以上方法的综合应用大大增加了诊... 植入前遗传学诊断是辅助生殖技术的一个重要方面,其发展日新月异。新方法、新技术不断出现并应用于临床植入前遗传学诊断中,如微阵列比较基因组杂交、微测序技术、多重置换扩增等。这些方法及两个或两个以上方法的综合应用大大增加了诊断的准确性,减小误诊风险。同时,也有一些关于植入前遗传学诊断的争议,如胚胎植入前遗传学筛查,以及对植入前遗传学诊断远期安全性的担忧。就该领域一些新方法及其原理和争议等进行综述。 展开更多
关键词 植入前遗传学诊断 比较基因组杂交 微测序技术 多重置换扩增 胚胎植入前遗传学筛查
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Metagenome of microorganisms associated with the toxic Cyanobacteria Microcystis aeruginosa analyzed using the 454 sequencing platform 被引量:2
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作者 李楠 张蕾 +5 位作者 李富超 王玥珠 朱永强 康慧 王升跃 秦松 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2011年第3期505-513,共9页
In this study, the 454 pyrosequencing technology was used to analyze the DNA of the Microcystis aeruginosa symbiosis system from cyanobacterial algal blooms in Taihu Lake, China. We generated 183 228 reads with an ave... In this study, the 454 pyrosequencing technology was used to analyze the DNA of the Microcystis aeruginosa symbiosis system from cyanobacterial algal blooms in Taihu Lake, China. We generated 183 228 reads with an average length of 248 bp. Running the 454 assembly algorithm over our sequences yielded 22 239 significant contigs. After excluding the M. aeruginosa sequences, we obtained 1 322 assembled contigs longer than 1 000 bp. Taxonomic analysis indicated that four kingdoms were represented in the community: Archaea (n = 9; 0.01%), Bacteria (n = 98 921; 99.6%), Eukaryota (n = 373; 3.7%), and Viruses (n = 18; 0.02%). The bacterial sequences were predominantly Alphaproteobacteria (n = 41 805; 83.3%), Betaproteobacteria (n = 5 254; 10.5%) and Gammaproteobacteria (n = 1 180; 2.4%). Gene annotations and assignment of COG (clusters of orthologous groups) functional categories indicate that a large number of the predicted genes are involved in metabolic, genetic, and environmental information processes. Our results demonstrate the extraordinary diversity of a microbial community in an ectosymbiotic system and further establish the tremendous utility of pyrosequencing. 展开更多
关键词 Microcystis aeruginosa ectosymbiosis DIVERSITY COGs algal bloom METAGENOME
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高分辨率HLA-DRB基因型分析方法的研究 被引量:2
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作者 袁建林 薛丽 +7 位作者 白玉杰 赵锦荣 杨芳 武国军 王禾 张运涛 张波 李欣 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期739-742,共4页
目的采用焦磷酸微测序技术,建立一种高通量、高分辨率的HLADRB基因型分析新方法,为临床应用提供依据。方法对HLADRB外显子2DNA序列进行同源性分析,设计PCR引物,提取健康人外周血淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增外显子2基因片段,克隆构建含有... 目的采用焦磷酸微测序技术,建立一种高通量、高分辨率的HLADRB基因型分析新方法,为临床应用提供依据。方法对HLADRB外显子2DNA序列进行同源性分析,设计PCR引物,提取健康人外周血淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增外显子2基因片段,克隆构建含有外显子2的重组质粒pMD/DRB302023。扩增产物经链亲和素包被磁珠纯化、变性、分离制备单链DNA测序模板,采用PSQ96焦磷酸测序仪进行实时测序,分析判断HLADRB基因型。结果扩增并克隆了HLADRB外显子2,焦磷酸微测序结果与克隆质粒常规测序结果比较,测序正确,与HLA数据库基因序列比较,可准确进行HLADRB基因型分析。采用重组质粒pMD/DRB302023和pMD/DRB10405等比例混合模拟杂合子基因型,焦磷酸微测序分析获得预期结果。结论焦磷酸微测序技术应用于HLADRB基因型分析具有高分辨率和快速等优点,可有效分析杂合子基因型,该新方法有望应用于器官及骨髓移植的供体/受体筛查。 展开更多
关键词 分辨率 HLA-DRB 基因型 分析方法 焦磷酸微测序技术 器官移植
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