创伤弧菌微球口服疫苗的制备及其免疫效果研究

为了研究创伤弧菌灭活疫苗的免疫效果,本研究将实验室保存的创伤弧菌菌株EPL0201经0.3%甲醛灭活,采用海藻酸钠包裹灭活菌液制备了创伤弧菌微球疫苗,通过口服途径免疫健康的珍珠龙胆石斑鱼(Pearl gentian grouper),在免疫后第28天用1×107cfu/mL创伤弧菌腹腔注射珍珠龙胆石斑鱼,检测了免疫后珍珠龙胆石斑鱼部分免疫相关基因的表达趋势和攻毒后的免疫保护率。创伤弧菌微球口服疫苗的粒径为(34.55±5.33)μm,包覆率为90.5%。测其安全性良好。实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)结果显示,与对照组相比,各免疫基因先后出现不同的表达变化。TLR信号通路上的基因TLR1、TLR2、TLR3、TLR5和M y D88及炎性细胞因子IL-1β、IL-12p40和TNF-α在肾脏、脾脏、肝脏和肠组织中都参与免疫应答。TGF-β只在脾脏中有表达。免疫基因在各个组织中的表达变化不同,其中,表达量最高的是IL-1β在脾脏中,最高值为对照组的72.37倍。同一种免疫基因在鱼体不同器官和组织中的峰值表达量时间不同,同一组织中不同免疫基因的峰值表达量也不相同,说明各组织中的基因表达变化有差异性。攻毒试验结果显示,免疫保护率为61.3%。本研究结果显示创伤弧菌微球口服疫苗能够引起免疫基因参与免疫应答反应,对珍珠龙胆石斑鱼具有免疫保护作用,也为微球口服疫苗防治创伤弧菌引起的疾病提供试验数据支持。

响应面法优化爱德华菌口服微球疫苗制备工艺及其特性分析

为优化渔用口服微球疫苗制备工艺,实验以海藻酸钠及爱德华菌灭活疫苗为原材料,采用乳化离子交联法制备爱德华菌口服微球疫苗。通过单因素实验研究海藻酸钠浓度、水油相比例、乳化剂浓度以及乳化时间对微球疫苗包封效率的影响,根据Box-Behnken中心组合实验设计,采用4因素3水平响应面法优化爱德华菌海藻酸钠微球疫苗的制备工艺。结果表明最佳制备工艺条件为海藻酸钠浓度3.5%,水油相比例2.4∶7.6,乳化剂浓度5.4%,乳化时间13 min。研究表明,在最佳工艺条件下制备的爱德华菌口服微球疫苗成球性好,粒径分布均匀,粒径(8.88±1.26)μm,跨距0.38,包封效率96.37%,具有较好抗酸性、肠溶性以及高安全性的特点。

中华鳖温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的研究:疫苗用菌液培养条件的优化

以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)口服缓释微球疫苗生产菌株 Z- 1株培养菌液含菌量和胞外产物溶血性为指标 ,考察了培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等因素对 As Z- 1株繁殖和产毒的影响 ,并采用正交试验方法 ,对培养基配方进行了优化试验。结果表明 :不同的培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等均会影响As Z- 1株的菌体产量和溶血性 ,其中 2 8℃振荡 (2 0 0 r/ min)培养 36 h菌液的含菌量和溶血价均较高 ;在营养肉汤中添加适量的硫酸铜、磷酸二氢钾、硫酸锰和硫酸铵 ,可显著提高菌液的含菌量和溶血价。

中华鳖温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的研究:疫苗生产菌株灭活方法的优化

以灭活后中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)残存数、胞外产物溶血性及菌体抗原性为指标 ,考察不同的甲醛浓度、不同温度、不同灭活时间对中华鳖 As Z- 1株灭活的影响。结果表明 :As Z- 1株菌体和胞外产物的灭活时间与所采用的温度和甲醛浓度成反比 ;在相同的甲醛浓度和灭活温度下 ,菌体和胞外产物所需的灭活时间有很大差异 ;在使菌体灭活的各种灭活方法中 ,以 2 8℃、0 .2 %甲醛作用 2 d的菌体抗原性为最佳。

可生物降解微球作为口服疫苗载体的研究进展

本文主要介绍可生物降解微球作为口服疫苗载体的优越性 ,以及微球疫苗的制备工艺、体外释放动力学、口服后的体内分布、免疫机理、口服质粒

鸡新城疫病毒口服微球的制备研究

目的:研究口服疫苗微球的最佳制备工艺。方法:以鸡新城疫病毒(NDV)作为疫苗模型药物、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,采用W/O/W复乳-溶剂挥发法制备NDV-PLGA口服微球。采用正交设计试验,考察活NDV体积、PL GA浓度、初乳搅拌速度、内水相中的保护剂对微球形状、粒径、粘连情况和药物活性的影响,其中以血凝法测定微球中释放药物的效价。结果:NDV口服微球的最佳制备工艺系活NDV体积为200μl、PLGA浓度为4%、初乳搅拌速度为8000r/min、内水相中的保护剂为牛血清白蛋白。结论:本方法为制备口服疫苗微球的最佳制备工艺。