不同激素配比对花魔芋愈伤组织诱导微球茎效果研究

为了促进魔芋种植业的生产,解决魔芋生产中缺乏优质芋种的一问题,设计了不同激素配比对魔芋愈伤组织诱导出微球茎影响实验,探究可利用魔芋愈伤组织高效诱导出微球茎,提供能快速生产优质芋种的途径。以花魔芋的愈伤组织为试验材料,设计了不同激素不同浓度的正交试验。结果表明:促进魔芋愈伤组织高效诱导出微球茎的最佳组合A1B3C3,即6-BA0.4 mg/L+2,4-D0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L,此时魔芋微球茎的出球率为26.667%。

产微球茎属(Microbulbifer sp.)FG4菌株琼胶酶功能基因的克隆与表达

以FG4菌株琼胶酶基因侧翼序列为基础,构建重组质粒与载体,从而获得高效产琼胶酶的表达菌株。本研究利用染色体步移法获得FG4菌珠琼胶酶基因功能的侧翼序列之后,将基因组端序列克隆基因片段与表达载体进行重组,并转入到受体细胞BL21中,在鉴定表达菌株的成功构建后利用IPTG诱导表达琼胶酶。实现产微球茎属(Microbulbifer sp.)FG4菌株琼胶酶功能基因的克隆与表达,以期为琼胶酶类在不同领域的实际应用提供理论支持。

不同外植体诱导魔芋微球茎的比较研究

魔芋作为一种以无性繁殖的重要经济作物,在栽培中用种量大,播后容易感病腐烂,种源成为魔芋优质栽培和新品种推广的一个重要限制因子。本实验利用白魔芋、花魔芋、黄魔芋、红魔芋的鳞叶、花序、叶柄、根状茎、球茎、茎尖组织等器官为外植体,成功研究了能诱导可用于大规模生产魔芋试管微球茎生产技术,初级诱导率(在试管内诱导的微球茎总数/接种外植体数目)达到300万倍以上,为魔芋大规模生产优质种苗栽培提供了有力的支持。

魔芋试管微球茎繁殖技术研究

针对目前魔芋生产存在种芋繁殖系数低的问题,研究可用于大规模生产魔芋试管微球茎的诱导技术。实验通过3种不同方法切割魔芋愈伤组织分化的幼苗,分别置入不同激素配比的4种培养基中培养。培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖6%和MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖6%适合愈伤组织的形成和不定芽的分化。培养基1/2MS+NAA0.08mg/L+蔗糖6%和1/2MS+BA0.8mg/L+蔗糖6%适合叶柄基部带愈伤组织的幼苗生根培养,其中1/2MS+NAA0.08mg/L+蔗糖6%的培养基适合叶柄基部带少量愈伤组织的幼苗诱导微球茎,将形成的微球茎,从叶柄基部撇断,可看到微球茎上有芽点。通过研究发现魔芋试管微球茎的形成不仅与培养基的组成有关,还与叶柄基部的切割方式有关。

魔芋试管微球茎成熟度对其储藏及萌发率的影响

种子在母体植株上的干燥过程是种子完成从发育到萌发的一个重要转换点。魔芋组织培养中诱导试管微球茎过程中,在色泽上有1个明显的变化过程。本实验将这个过程分为3个阶段,对不同采收时期的微球茎进行储藏及萌发研究,结果表明,不同采收期的微球茎,储藏后的萌发率具有较大的差异,而且这种差异与魔芋种具有较大的相关性,这种差异与其保水性能有关。同时对试管微球茎收获度对储藏后萌发率影响的机制进行了初步的探讨。

包衣处理对魔芋试管微球茎萌发及生长的影响

魔芋试管微球茎TMB作为一种新型的魔芋组培繁育体系,对魔芋良种体系的建立具有重大的意义。实验以花魔芋、白魔芋为实验材料,在对魔芋TMB包衣处理部分工艺优化的基础上,对包衣处理的魔芋TMB进行了萌发及生长的对比实验。结果表明,包衣处理过程中包衣剂的最佳组分的最优条件组合为:Kt 0.07,GA3 0.1,NAA 0.06,褐藻酸纳7%,包衣过程中对其萌发率的影响的大小顺序为Kt浓度>NAA浓度>GA3浓度>褐藻酸浓度;包衣处理不仅可以提高TMB的萌发率,促进魔芋的生长,而且可以提高采收时子球茎的数量和大小。

魔芋叶片离体诱导试管微球茎发生的培养条件优化

以白魔芋、花魔芋、谢君魔芋的试管苗叶片为材料,利用正交设计对魔芋试管微球茎离体发生的诱导培养基及培养条件进行了优化筛选。结果表明,叶片诱导试管微球茎发生的培养温度、光照强度及碳源组合是主要的限制因子。改良MS培养基中添加NAA 0.5 mg/L、KT 0.5 mg/L,碳源组合为4%S(蔗糖)+4%M(甘露醇)为最佳诱导培养基;培养温度28℃、光照8 h/d、光照强度800 lx为最佳培养条件。在该条件下,3个魔芋种的3种外植体(复叶、复叶块、小叶片)的微球茎诱导率均在88%以上。

花魔芋试管微球茎休眠解除的研究

为了研究花魔芋试管微球茎的萌发特性,设置了贮存时间、硫脲和赤霉素处理的试验。结果表明,贮存4～8个月的试管微球茎,在合适的温湿度条件下,萌发率低(10%～13%),休眠深浅不同;当赤霉素浓度达到100 mg.L-1或硫脲浓度为1%时,试管微球茎的萌发率最高,分别为73.5%和75.0%;

魔芋脱毒微球茎的生长研究

对魔芋脱毒微球茎及根状茎的萌芽出苗特性、地上部性状、地下部性状、发病率及产量等方面进行研究。结果表明:原原种、原种球茎较小,播种后会因土壤干燥严重影响萌芽出苗。脱毒微球茎的分苗数多,繁殖系数高,球茎膨大倍数大、发病率低。但随着球茎体积的增大,膨大倍数逐渐减少,发病率也相应增高,因而播种前应对较大的脱毒种芋进行消毒。脱毒微球茎具有膨大倍数大、繁殖系数高、发病率低等优点,生产上加强栽培管理,在种芋繁殖上具有很好的推广应用前景。

魔芋微球茎栽培试验研究

通过魔芋微球茎移栽田间试验,结果表明:成活率可达93.6%;全生育期170d,平均株高19.9cm,叶色浓绿,单个微球茎上长出的植株最多达9个,收获的原种平均单球重55.4g;最大单球重128g,呈圆柱状,最小单球重7g,球形。魔芋微球茎在魔芋种芋生产中占绝对优势。

北川花魔芋愈伤组织与试管微球茎离体诱导研究

为解决我国地理标志性农产品北川花魔芋良种繁育体系的缺乏、种芋带病等难题,促进产业的发展,研究了不同外植体、不同激素及浓度配比对花魔芋愈伤组织诱导、试管微球茎形成的影响。结果表明:诱导愈伤组织的最佳外植体为幼嫩叶柄,在MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA培养基上,愈伤组织诱导率可达48.3%;经继代培养可获得3种不同愈伤组织类型,其中Ⅲ型愈伤组织具有最佳增殖频率,增殖频率为90.8%;以Ⅲ型愈伤组织诱导产生试管微球茎时,最适培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+5%蔗糖,培养4周后,可获得大量生长良好且带芽点的试管微球茎。

产微球茎菌琼胶酶基因的克隆及生物信息学分析

以琼脂为唯一碳源的培养基分离出一株产琼胶酶的海洋菌株AG1,16S rRNA基因序列分析显示,该菌株为产微球茎菌(Microbulbifer sp.)。以菌株AG1的基因组为模板,使用琼胶酶特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p MD18-T载体后进行测序。结果显示,克隆基因的大小为1302 bp,预测编码含有433个氨基酸残基的蛋白质。对该蛋白质进行生物信息学分析,结果表明,该蛋白质序列与来自耐热微泡菌(Microbulbifer thermotolerans)的琼胶酶氨基酸序列相似性为100%,预测本研究克隆的基因编码琼胶酶。该琼胶酶的理论分子质量大小为48.2 ku,理论等电点为5.42。采用同源建模法建立Microbulbifer sp.AG1琼胶酶的三维结构,富含β-折叠。

魔芋包衣试管微球茎的研究进展

魔芋包衣试管微球茎是一种新型的包衣种子,对优质魔芋推广和产业化生产具有巨大的推动作用。主要叙述了魔芋试管微球茎的培育、选择、包衣剂的配制、在包衣过程中应注意的问题、包衣试管微球茎的优点和研究现状及应用前景。

花魔芋愈伤组织诱导微球茎的效果研究

为了探索花魔芋离体培养再生微球茎体系,为魔芋产业的优良种源生产提供技术支持,本文以花魔芋愈伤组织为试材,MS培养基为基本培养基,研究不同激素组配对花魔芋愈伤组织诱导微球茎的影响。结果表明,不同激素组配和浓度水平对花魔芋愈伤组织诱导微球茎具有显著影响,当以MS为基本培养基,且转接愈伤组织培养基6-BA含量为1.0 mg/L、2,4-D含量为0.2 mg/L的配比时出球率最高(18.889%),并显著高于其他6-BA和2,4-D的配比组合;当以MS为基本培养基,且转接愈伤组织培养基中6-BA含量为1.0 mg/L、NAA含量为1.7 mg/L的配比时出球率最高(17.778%),并显著高于其他6-BA和NAA配比组合。上述结果表明,这2种不同激素的配比组合可作为花魔芋愈伤组织诱导微球茎的参选配方。

褐藻胶裂解酶发酵工艺优化及其中试放大

对产微球茎菌(Microbulbifer sp.)ALW1发酵产褐藻胶裂解酶5 L罐发酵工艺进行优化,建立褐藻胶裂解酶的高产发酵工艺。结果表明:海藻酸钠质量浓度为1 g/L时效果最好,浓度减半或加倍都会使酶活力下降;25℃比20℃更利于产酶;p H值控制在7.5时比自然条件下发酵产酶高峰提前,产酶量变化不大;在此基础上,对罐上工艺进行中试放大,20 L发酵罐酶活力最高为57.0 U/m L,200 L罐酶活力最高为43.5 U/m L,500 L罐酶活力最高为38.3 U/m L,分别是小试水平的39.6%、30.2%、26.5%。