代谢矿井CH_(4)和CO气体的微生物提取及生长代谢特性

为了降低采空区CH_(4)和CO等可燃性气体的产生和蓄积,抑制可燃性气体爆炸,保障煤矿安全开采,采用生物治理方法,对矿井不同环境样品中的微生物进行了定向富集和驯化,利用高通量测序方法,分析了富集后的菌液生长特性以及菌群结构关系,通过分离和提纯,确定了代谢CH_(4)和CO气体微生物的形态特征及其生长代谢特性。结果表明:唯一碳源方法可以显著提高目标微生物的富集程度,且不同样品中的优势菌群表现不一,富集后菌群的CH_(4)代谢率达到80%,CO代谢率超过95%;纯化后提取到2株甲烷氧化菌(S2、T7)和3株CO氧化菌(M1、M7、M13),并确定了微生物的生长周期,其中CO氧化菌在对数期内完成了CO气体代谢,CO代谢率超过95%,而CH_(4)气体代谢伴随甲烷氧化菌的生长全过程,代谢相对缓慢,CH_(4)代谢率分别为76.1%、74.5%;此外,甲烷氧化菌利用了更多的CH_(4)气体进行生长繁殖,表现出比CO氧化菌更高的菌液浓度、更高的O_(2)消耗量以及更低的CO_(2)产生量,但CO氧化菌具有比甲烷氧化菌更强的气体代谢能力。研究结果可为采空区CH_(4)和CO等可燃性气体的综合防治提供基础,对防止采空区因自燃而引发热动力灾害事故,确保煤矿安全绿色开采具有重要意义。

雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞P-糖蛋白和多药耐药基因表达的影响

目的:研究雄黄微生物提取液(RBS)诱导K562/ADM细胞凋亡的作用,并探讨其对P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药基因(MDRI)表达的影响。方法:采用"微生物浸出"法制备RBS,并以H3AsO3作为阳性对照,AnnexinV-PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞P-gp表达率;逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)检测细胞MDRI mRNA表达水平。结果:RBS可诱导多药耐药白血病细胞发生典型凋亡,抑制P-gp的表达,下调MDRImRNA表达水平。在含砷量相同的条件下,RBS诱导效应明显强于H3AsO3。结论:诱导细胞凋亡、下调P-gp/MDRI蛋白的表达,可能是雄黄逆转白血病耐药的重要分子机制。

雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的:观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、Annexin V-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM)观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3(As2O3在该溶液中的主要存在形式)作为阳性对照。结果:雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示:G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强。结论:雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡。砷酸(V)、甲基砷酸盐(V)可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种。

响应面法优化微生物发酵法提取玉米黄粉色素工艺研究

以玉米黄粉为原料,采用微生物发酵法提取玉米黄色素。在单因素实验基础上采用响应面试验确定了玉米黄粉色素微生物发酵提取的最佳工艺为:接种量4%、温度为35.9℃、培养时间为6 h、pH 7.26,此条件下玉米黄粉色素得率为10.362%。

香蕉茎纤维提取微生物初筛的一种新策略

我国是香蕉的主产国之一,随着香蕉茎杆的综合处理、利用技术的不断深化,香蕉纤维的开发和利用在我国呈现出良好的应用前景。然而目前香蕉纤维开发利用程度不高,主要原因是还没有获得高效的微生物提取菌株。本文以香蕉茎杆纤维脱胶为背景,采用脱胶菌侵染新鲜土豆片的方法,探讨了一种香蕉茎纤维提取微生物初筛的新策略,为香蕉纤维产业的开发利用提供了一个可资利用的新思路。

两种微生物提取技术确定初始污染菌数的比较

目的比较两种微生物提取技术对初始污染菌数结果的影响。方法依据IS011737-1:2006标准方法分别用涡旋式混合和琼脂覆盖两种提取技术酒精片初始污染菌数进行了检测比较。结果两组细菌总数t检验结果无显著差异,但琼脂覆盖提取技术检出率为100%,涡旋式混合提取技术的检出率为10%。结论对于初始污染菌较低、构型合适的样品选择大小合适的平皿直接用琼脂覆盖法提取微生物,能提高检出率,获得更客观的结果。

不同破壁方法提取绍兴黄酒麦曲中的微生物总DNA

分别采用超声波、Yatalase酶法、氯化苄法对黄酒麦曲样品进行破壁,提取微生物总DNA,并通过细胞裂解率、DNA的纯度、片段的分布情况、ITS(内转录间隔区)序列扩增产物的多态性来评估不同的破壁方法对麦曲样品总DNA提取效果的影响。实验结果表明,采用氯化苄法能裂解86%的孢子,OD260/OD280在1.5左右,所得DNA片段分布在100bp～20kbI,TS-PCR扩增出的条带最多,而且简单、经济、提取效果好,可以作为麦曲中微生物总DNA的提取方法。

微生物转化对山楂提取物挥发性香气成分的影响

为了研究食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)J4-1生物转化对山楂提取物挥发性成分的影响,采用同时蒸馏萃取、GC/MS对比分析经回流提取后由J4-1转化的山楂提取物和对照的挥发性成分。结果表明:1微生物转化山楂提取物鉴定出58种挥发性成分,新增35种,包括己酸、乙酸己酯、丁酸己酯、松油醇、二氢猕猴桃内酯、光黄素等,占总相对百分含量21%以上;对照样品鉴定出34种挥发性成分;2相对百分含量显著增加的有己醛、糠醛、葵醛、棕榈酸乙酯、柠檬酸三丁酯等15种,刺激性成分如邻苯二甲酸异丁酯、邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯显著降低,14种挥发性成分消失。经微生物转化的山楂提取物挥发性成分改变大,具有酸甜、奶香丰富香气,刺激性成分减少,香气质提高。

紫色水稻土水稳性团聚体土壤微生物基因组DNA提取方法探讨

为了找到提取土壤微生物总DNA的最佳方法,通过OD值检验、凝胶电泳、PCR和DGGE分析,比较了Reddy法、基于DNAout kit试剂盒改进的实验方法、以及Kuske修订法、Edgcomb改进法、SDS高盐提取法、Eichner调整法等常用的不同土壤微生物基因组的DNA提取方法在亚热带地区长期免耕紫色水稻土水稳性团聚体0.25-2.0 mm粒径上的提取效果。结果表明,6种方法都可以从团聚体中提取到长度大于23.1 kb的DNA片段,但不同方法提取的DNA的产量存在明显差异,土壤总DNA均不需纯化就可以用于PCR扩增,使用细菌16S rDNA基因V3区的通用引物可扩增得到相应的片段。研究表明,改进的DNAout kit试剂盒法是长期免耕紫色水稻土水稳性团聚体中微生物基因组DNA的最佳提取方法。

微生物源杀菌剂先导化合物筛选研究

以番茄早疫病菌(Alternaria solani)作为产孢病原菌的代表,进行了孢子浓度和培养时间对其敏感性影响的筛选试验;以小麦颖枯病菌(Septoria nodorum Berk)作为不产孢病原菌的代表,进行了菌丝碎片计数,同时比较了接菌浓度和培养时间对其敏感性影响的筛选试验;用两个杀菌剂标准样品进行了筛选稳定性比较试验,同时对576个微生物源提取物进行了筛选试验。结果表明,杀菌剂筛选必须控制接菌浓度和培养时间,从而保持适当的活性敏感度,才能得到稳定的筛选结果。适当降低接菌浓度和缩短培养时间可以提高活性样品的敏感度,有效的减少低活性样品的漏筛。

仙人掌多糖发酵提取工艺优化及其抗炎功效研究

本文分别采用乳酸菌与酵母菌发酵提取仙人掌多糖,并探究仙人掌多糖的抗炎功效。在三个单因素液料比、时间、pH方面探究仙人掌多糖的提取工艺,得到三因素最适组合,乳酸菌发酵最适提取工艺为发酵时间7 h、液料比25∶1 (mL/g)、pH为5,此工艺下多糖得率为0.26%。黄酒酵母发酵最适提取工艺为发酵时间48 h、液料比25∶1 (mL/g)、pH为3,此工艺下多糖得率为0.53%。应用实时荧光定量PCR法检测仙人掌多糖对IL-6、IL-8炎症细胞因子相关基因表达的影响,得知仙人掌多糖通过抑制IL-8的表达,促进IL-6的表达来抑制炎症的发生和发展。

生物法防治黄曲霉毒素B_1研究进展

黄曲霉毒素具有极强的致癌、致畸和致突变作用。受黄曲霉毒素污染的粮食不仅给人体和动物的健康带来严重危害,也给食品、畜牧等行业造成巨大经济损失。目前,黄曲霉毒素降解方法研究已成为各国科研工作者的一个热点。生物法降解黄曲霉毒素较物理、化学等方法具有安全系数高、特异性强、绿色清洁等独特优势,被视为最具发展前景和潜力的降解方法。利用微生物菌体的吸附作用、微生物酶解作用、微生物代谢作用等对黄曲霉毒素进行脱除,已逐渐成为生物法消减黄曲霉毒素的重要研究方向。通过筛选和改造获得可脱除黄曲霉毒素的优良菌株;通过分离、提取、纯化等手段获得高纯度和高活性的微生物源解毒产物;通过改进和优化获得最佳脱除工艺等,已成为研究生物法脱除黄曲霉毒素的重要手段和突破口。本文主要对国内外生物法防治黄曲霉毒素B_1的研究进行综述,并对今后生物防治的发展方向提出一些设想。

典型水稻土微生物RNA的提取方法比较

采用4种方法分别提取和纯化2种典型土壤微生物RNA(水稻土和旱地土),并对RNA产量和质量进行比较评价.结果表明,方法1用液氮研磨法提取的RNA提取量最高,但需要纯化后才能满足RT-PCR等后续分子生物学要求;方法2用玻璃珠破碎法提取的RNA提取量稍低,但RNA纯度较高,可以直接用于RT-PCR等后续实验;方法3用试剂盒提取的RNA纯度高,但提取量最低,成本高,且对土壤样品有选择性;方法4未能提出供试土壤的微生物RNA.选择RNA提取效果较好的方法1和方法2并应用于3种典型水稻土(紫潮泥、红黄泥、麻沙泥),结果表明,这2种方法也适合于这3种水稻土微生物RNA的提取.

高含固率木质纤维素厌氧发酵物总DNA的4种提取方法比较

不同的样本特性和提取方法对获得微生物总DNA的质量有重要影响。文章基于高含固率木质纤维素厌氧发酵物腐殖酸、酚类物质含量高、质地均一性差、微生物浓度低的特点,研究了4种方法提取不同高含固率粪秸厌氧发酵物中微生物总DNA的效果。结果表明,常规的十二烷基磺酸钠法(sodium dodecyl sulfate,SDS)、十二烷基磺酸钠和溴化十六烷基三甲铵结合法(sodium dodecyl sulfate and cetyltrimethyl ammonium bromide,SDS-CTAB)和商业的粪便试剂盒法提取的DNA质量均较差,SDS法和试剂盒法未能获得聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增目的条带,SDS-CTAB法得到的条带较模糊;改进SDS-CTAB法获得的DNA杂质少、纯度高,具有较好的稳定性,A260/A280和A260/A230值分别为1.74~1.86和1.65~1.86,每克样品的DNA浓度在50 ng·μL^-1以上,电泳条带单一齐整、清晰明亮,PCR扩增的目的条带清晰度高,适宜后续分子生物学技术的分析。林格氏液洗脱、聚乙烯吡咯烷酮-40(Polyvinyl Pyrrolidone-40,PVP-40)洗涤液除杂以及裂解液和多种酶联合破壁是改进SDS-CTAB法获得该类专一性样本高质量微生物总DNA的关键步骤。

土壤DNA提取技术在本科教学实验教学中的应用

开展科研训练、提高学生科学素养,一直是本科教学改革研究热点之一。以课题组常用的实验技术"土壤DNA提取"为基础,结合"大学生科技创新"等活动,设计综合创新实验,对可能参与课题组科研工作的学生进行选拔和培训。综合创新实验提高了学生的科研能力、训练了学生的科研思维,使学生顺利的参与到教师的科研工作中,实现了教学与科研的相互融合。

郭家沟富油煤细菌降解产腐殖酸研究

通过单因素实验和正交实验,分别得到荧光假单胞菌和蜡样芽孢杆菌降解郭家沟富油煤提取腐殖酸的最优工艺条件,将最优工艺条件下得到的2种生物腐殖酸与碱性萃取剂法得到的化学腐殖酸利用元素分析、UV-vis、FTIR、XRD及有机质元素检测法进行了对比。研究发现,荧光假单胞菌和蜡样芽孢杆菌在煤浆浓度为0.5 g/50 mL、提取时间14 d时,对煤样腐殖酸的最高提取率分别为32.87%和38.23%;而碱提取法对煤样腐殖酸最高提取率为42.70%。元素分析表明,2种生物腐殖酸与化学腐殖酸相比,H、N及S含量较高,O、C含量较低;UV-vis、FTIR表明2种生物腐殖酸与化学腐殖酸相比分子量较小,芳香度较低;XRD表明2种生物腐殖酸与化学腐殖酸相比芳香层片间距较大,碳层数较少;营养元素分析表明2种生物腐殖酸与化学腐殖酸相比,N、P、K、Ca、Mg的含量远远大于化学腐殖酸。虽然生物腐殖酸的提取率比化学腐殖酸低,但微生物提取具有反应条件温和、清洁无污染、有机质元素含量高等优点。

海藻糖的研究现状及其应用前景

综述海藻糖的理化特性、生物活性、生产制备及应用前景。海藻糖对生物物质具有保护作用。制备方法包括微生物提取法、微生物发酵法、酶合成法和基因工程法等。海藻糖广泛应用于生物药物、食品及化妆品等行业。

抗癌药物6-MP对小白鼠染色质小体的影响和EMX效果

将5周龄的DDY系小白鼠40只,分对照、6-巯基嘌呤腹腔注射(6-MP组)、6-MP+500倍稀释的EMX饮水(EMX饮水组)、6-MP+EMX腹腔注射(EMX注射组)4个组,每组10只。试验8周后断头屠杀,取左侧大腿骨骨髓制作涂片,分别用姬姆萨和吖啶橙(AO)荧光染色,用普通显微镜和荧光显微镜观察1 000个多染性红细胞(PCE),记录其中出现染色质小体的比例(MNPCE/1000PCE)。结果表明:抗癌药物6-MP组和对照组之间的染色质小体数差异极显著(P<0.01),而且EMX饮水和EMX注射能显著降低染色质小体的出现率(P<0.01)。说明EMX能有效减少抗癌药物引起的染色体异常。姬姆萨染色和吖啶橙(AO)荧光染色结果呈正高度相关(r=0.999),姬姆萨染色可以替代吖啶橙(AO)荧光染色做染色质小体试验的测定。

除草剂组合靶标筛选的研究

主要研究了几种单、双子叶植物种子在人工环境条件下的发芽率及对几种常用溶剂的反应,并选用了几种合适的种子以及小球藻(Chlorella vulgaris)、浮萍(Lemnaceae)对9种除草剂进行了除草活性试验。结果表明,不同备选靶标在室内人工环境适应性及对除草剂活性反应均不同;综合比较各备选靶标的发芽率、培养温度、对常用溶剂及除草剂的敏感性等因素,确定了几个可用于除草剂组合筛选的靶标。以组合靶标方式建立的除草剂筛选流程提供的是一个多重筛选模型,可减少对低活性先导化合物的漏筛。近3年来对30 000多个微生物源提取物的筛选结果表明,运用组合靶标是一种稳定、高效的除草活性筛选模式。

谷胱苷肽转移酶抑制剂高通量筛选模型的建立和初步应用

谷胱苷肽 - S-转移酶 -π( GST-π)的活性在某些类型的癌症患者中有显著的升高并且在癌症细胞对抗癌药物抗药性的形成过程中起着重要的作用。抑制过量表达的 GST-π酶的活性将有助于克服肿瘤细胞的耐药性 ,因此 ,GST-π被认为是一个潜在的药物作用的靶位点。为了筛选新的抗癌药物的增敏剂 ,我们建立了一个 GST-π酶抑制剂的高通量筛选模型 ,该模型以 CDNB和 GSH为底物 ,在 96 -孔板上通过对 340 nm处吸光度的变化来检测样品对 GST-π酶的抑制活性。经过初筛和复筛 ,从 4 80 0个微生物发酵提取物中筛选到10个阳性样品 ,阳性率为 0 .2 %。