海洋微生物溶菌酶体外抗菌抗病毒活性研究

【目的】初步研究海洋微生物溶菌酶S-12-86(MMLS)体外抑菌与抗病毒活性。【方法】采用最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度法(MBC)测定MMLS对部分模式菌的抑菌和杀菌作用;通过细胞病变抑制实验法(CPE),研究MMLS在猪肾细胞(PK-15)中对伪狂犬病毒(PRV)的抑制作用。【结果】MMLS对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌及真菌均有抑菌作用,抑菌作用的浓度范围在0.25～4.00mg·ml-1之间,杀菌作用的浓度范围一般在0.25～8.00mg·ml-1之间。在电镜下,可见MMLS能够使大部分白色念珠球菌的细胞壁出现严重变形,细胞质出现不均匀,细菌胞质中的空腔增多。MMLS的TC50为100.0μg·ml-1,抑制伪狂犬病毒的半数有效浓度(EC50)为0.46μg·ml-1,治疗指数(TI)为217;在病毒感染后的0、2、4、6和8h添加MMLS,均有抑制伪狂犬病毒的作用。【结论】MMLS具有广谱的抑菌作用和抗伪狂犬病毒作用。

海洋微生物溶菌酶的发酵优化与中试生产

以海洋细菌S-12-86为试验菌株,采用摇瓶发酵优化的方式,研究培养基组分(碳源、氮源、碳源与氮源的比例、金属离子)与发酵条件(培养温度、接种体积分数、装液体积分数、起始pH值、产酶周期)对海洋微生物溶菌酶产量的影响,并进行中试放大试验。结果表明:该菌产酶最佳培养基组分为:葡萄糖10 g/L,蛋白胨5 g/L,MgSO45 g/L,CaCl22 g/L;最适发酵培养温度为30℃,接种体积分数为4.0%,装液体积分数为10.0%,起始pH值为8.0,发酵周期24 h。海洋细菌S-12-86发酵优化后的产酶量(25636.8 U/mL)较优化前的产酶量(14454.4 U/mL)提高了75.4%。海洋微生物溶菌酶中试发酵的产酶量达26697.87 U/mL。说明摇瓶发酵优化条件可以应用于海洋微生物溶菌酶中试生产上。

微生物溶菌酶酶学性质及抑菌特性研究

通过溶菌酶试剂盒对微生物溶菌酶酶学性质进行研究,并采用抑菌圈法分析其对溶壁微球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、嗜水气单胞菌、哈维氏菌、沙门氏菌、啤酒酵母菌、黑曲霉及青霉的抑菌特性。结果表明,微生物溶菌酶的最适pH值约为7.0,最适反应温度为40℃,反应温度为40～70℃时其湿热稳定性较高,而pH值在2.5～6.0的范围内处理2 h后,仍显示出较高的稳定性,即具有较好的耐酸性;微生物溶菌酶对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有抑菌作用,最低抑菌浓度范围在0.005～0.6 mg/mL,对啤酒酵母的最低抑制浓度为2 mg/mL。

微生物溶菌酶的研究及应用

微生物溶菌酶是区别于卵清溶菌酶,而是由微生物分泌产生的一种能溶解细菌细胞壁的酶,介绍了微生物溶菌酶的研究历史、分类以及其作用机制。对近年来其在食品、医学、酶工程和饲料工业上的应用进行了综述;分析了溶菌酶应用中存在的主要问题,并对其应用前景进行了展望。

响应面分析法优化微生物溶菌酶微胶囊制备工艺

以海藻酸钠、壳聚糖为壁材,采用响应面法试验对微生物溶菌酶微胶囊制备条件进行优化。选取7种因素进行Plackett-Burman筛选,得出海藻酸钠质量浓度、壳聚糖质量浓度及醋酸质量浓度是影响包埋率的3个主要因素。进一步进行最陡爬坡试验逼近中心区域。最后,通过Box-Behnken试验建立回归方程,获得主因素的最佳水平,即质量浓度分别为:海藻酸钠2.00 g/100 mL、壳聚糖0.35 g/100 mL、醋酸0.33 g/100 mL,预测微生物溶菌酶最高包埋率为94.635%,经实验验证后所得的包埋率为92.10%。

微生物溶菌酶微胶囊制备方法及其特性研究

利用锐孔法包被一种微生物溶菌酶,探讨单一海藻酸钠为壁材制备微胶囊的最佳工艺参数,比较添加与不添加辅助壁材卡拉胶或壳聚糖,以及利用一步法与二步法静电络合壳聚糖制得的微胶囊的强度性能、载酶量和酶活包埋率。结果确定最佳工艺参数为:海藻酸钠浓度2.0%,微生物溶菌酶浓度0.2%,氯化钙浓度2.0%,固定化时间1 h。添加辅助壁材卡拉胶或壳聚糖均有利于增加微胶囊的机械强度及载酶量,添加卡拉胶比不添加卡拉胶制得的微胶囊抑菌效果无明显差异。壳聚糖一步法酶活包埋率最高,两步法最低。

表面活性剂对海洋微生物溶菌酶活性的影响

以海洋微生物溶茵酶(MBL)为研究对象,分别检验几种表面剂对MBL活性的影响,着重研究烷基多苷(APG)对其活性的影响。结果表明,APG与阳离子烷基多苷(cAPG)分别提高MBL相对酶活性为21%,15%,SDS降低该酶活性约为15%,Tween 20和Tween 80对MBL活性的影响不明显。MBL含量大于5.0mg/mL时,对大肠杆菌、金黄色葡萄、白色念珠球茵有抑茵作用。0.5%～1.5%的APG无明显抑菌作用。将5.0 mg/m MBL与1.0 mg/mL APG复配后(简称CEP),发现APG能明显增强MBL抑菌作用,CEP具有较好地杀菌作用;CEP在54℃培养箱中放置14d后,其杀菌率保持不变,说明CEP的杀菌性能的稳定性良好。

乳酸菌培养液提高微生物溶菌酶抗菌活性的研究

为了提高微生物溶菌酶对大肠杆菌的抗菌作用,试验采用试管法和肉汤稀释棋盘法测定了微生物溶菌酶、乳酸菌培养液、乳酸菌培养液和微生物溶菌酶联合应用对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果。结果表明:乳酸菌培养液和微生物溶菌酶联合应用,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的平均抑菌浓度指数(FIC指数)分别为0.50,0.25;乳酸菌培养液和微生物溶菌酶联合应用对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性均为协同作用。说明乳酸菌培养液与微生物溶菌酶的联合应用提高了微生物溶菌酶的抗菌活性。

海洋微生物溶菌酶的纯化与性质研究

海洋微生物溶菌酶发酵上清液经超滤、CM_SepharoseFF阳离子交换层析和SephadexG_10 0凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶,纯化倍数为34 7,活力回收为2 4 1%。对纯化溶菌酶性质研究表明,该酶分子量约为39kD ,对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,最适作用pH为8 0 ,在5 0℃以下和pH 5 0～10 0之间都有较好的稳定性,与常见金属离子和化学试剂有良好的配伍性,广谱杀菌,对多种致病菌也有较强的溶菌作用。

微生物源溶菌酶的抑菌及抗炎活性

为研究微生物源溶菌酶对14种供试菌的体外抑菌活性及对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞炎症的抑制作用,该文采用二倍稀释法测定微生物源溶菌酶对供试菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),评价其体外抑菌活性,通过构建LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,以细胞中一氧化氮(nitric oxide,NO)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌量为指标,评价微生物源溶菌酶的抗炎活性。结果表明,微生物源溶菌酶对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、耐热芽孢杆菌、酿酒酵母、酪丁酸梭菌、产黄青霉、黑曲霉和根霉11种菌均表现出良好的抑菌效果,具有较强的广谱抑菌性;在试验浓度范围内,对保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌乳亚种3种益生菌无抑制效果,反而具有生长促进效果。微生物源溶菌酶对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型表现出明显的抗炎作用,可显著降低NO及TNF-α的分泌,且与微生物源溶菌酶的作用浓度呈正相关。在试验浓度范围内,与模型组相比NO分泌量最高可降低57.92%,TNF-α分泌量最高可降低36.75%。微生物源溶菌酶具有良好的抑菌和抗炎活性,为其作为食品添加剂在抑制腐败菌生长、促进益生菌增殖等方面应用提供了理论基础。

灰色链霉菌RX-17溶菌酶防治龋病的实验研究

目的:研究灰色链霉菌RX-17溶菌酶在动物口腔内对致龋菌变形链球菌的溶解作用及对龋病发生、发展的抑制作用,为将该溶菌酶用于人类龋病防治提供依据。方法:给大鼠口腔接种变形链球菌,并饲以致龋饲料2000#,分别喂以蒸馏水、氟化钠水溶液、RX-17溶菌酶液,测定牙菌斑pH值,菌斑取样、细菌培养计数,取上下颌骨进行Keyes龋齿计分。结果:RX-17溶菌酶组大鼠牙菌斑pH值高于蒸馏水组(P<0.05),低于氟化钠组(P<0.05)。变形链球菌计数在RX-17溶菌酶组少于蒸馏水组(P<0.01)和氟化钠组(P<0.05)。Keyes计分结果显示,RX-17溶菌酶组E级龋损和Ds级龋损均低于蒸馏水组(P<0.01),但与氟化钠组无差异(P>0.05)。结论:RX-17溶菌酶可以抑制大鼠口腔内变形链球菌的生长和龋病的发生、发展,其防龋效果与氟化钠相当,有可能成为一种新的防龋药物。