远志提取物清除β淀粉样蛋白的途径及其信号通路的研究

目的探讨中药远志提取物(PTE)清除β淀粉样蛋白(Aβ)的途径及其可能的信号通路。方法采用MTT法观察不同浓度(100、40、20、10、5、0μg/ml)的PTE对神经细胞株(SH-SY5Y)的毒性作用。ELISA法检测PTE对转染过表达淀粉样前体蛋白(APP)和β分泌酶(BACE1)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养液中Aβ水平的影响。单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测PTE处理后的神经细胞内自噬小体的变化。Western blot检测微管关联蛋白轻链3(LC3)的表达水平,以及mTOR、p70s6k、Raptor、Akt、AMPK等蛋白的磷酸化水平。结果 MTT结果显示PTE对神经细胞活力没有影响(P>0.05)。CHO-APP/BACE1经药物处理后,Aβ分泌水平明显降低,并呈浓度依赖性。荧光显微镜下观察药物处理组细胞自噬增强,另外,自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平升高。结论 PTE通过增强AMPK/Raptor通路,抑制mTOR和p70s6k的磷酸化,诱导自噬发生,使细胞清除Aβ的能力增强,减少Aβ的分泌。

肺腺癌患者癌组织中MAP4的表达水平及其与病理参数、预后的关系

目的:分析肺腺癌患者癌组织中微管关联蛋白4(MAP4)的表达水平及其与病理参数、预后的关系。方法:选取我院2014年1月至2015年1月82例非小细胞肺癌(NSCLC)患者,利用免疫组织化学染色法对手术切除的癌组织及其癌旁正常组织的MAP4蛋白表达水平进行检测,并分析MAP4蛋白表达与患者临床病理参数和预后的关系。结果:MAP4蛋白在肺腺癌组织中的高表达率和表达水平均明显高于癌旁正常组织(P <0.05);其表达水平与肺腺癌患者的肿瘤浸润分期、淋巴结转移、分化等级相关(P <0.05)。3年随访显示MAP4蛋白高表达组患者的中位生存时间、无病生存率、总生存率明显低于低表达组(P <0.05);Logistic回归分析MAP4表达水平、肿瘤浸润分期、淋巴结转移、TNM分期、分化等级均是肺腺癌患者预后不良的危险因素。结论:肺腺癌患者肿瘤组织中MAP4蛋白水平高表达可能会促进患者的病程发展,且是预测患者不良预后的危险因素。

CircFAT1调节miR-296-3p/MAPRE1轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和放疗敏感性的影响

目的研究环状RNA脂肪非典型钙黏蛋白1(CircFAT1)调节miR-296-3p/微管关联蛋白RP/EB家族成员1(MAPRE1)轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和放疗敏感性的影响。方法以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测鼻咽上皮细胞NP69、人鼻咽癌细胞株CNE2及其放射线抵抗细胞CNE2-RR中CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1表达。将体外培养的CNE2细胞随机分为对照组、CircFAT1敲低组、阴性对照组、CircFAT1敲低+miR-296-3p inhibitor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1表达;以CCK-8法、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(Edu)染色与流式细胞实验检测各组CNE2细胞增殖、凋亡。将体外培养的CNE2-RR细胞随机分为对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircFAT1敲低组、放射+CircFAT1敲低+miR-296-3p inhibitor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2-RR细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1表达;以CCK-8法、Edu染色与流式细胞实验检测各组CNE2-RR细胞增殖、凋亡。以双荧光素酶报告基因实验检测CNE2-RR中CircFAT1对miR-296-3p的靶向调节与miR-296-3p对MAPRE1的靶向调节。结果与NP69细胞相比,CNE2、CNE2-RR细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05);与CNE2细胞相比,CNE2-RR细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,CircFAT1敲低组CNE2细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);阴性对照组CNE2细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1对CNE2细胞各指标的影响。与对照组、放射组分别相比,放射+CircFAT1敲低组CNE2-RR细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);放射组、放射+阴性对照组CNE2-RR细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1对放射处理下CNE2-RR细胞各指标的影响。CircFAT1可靶向下调CNE2-RR细胞miR-296-3p表达,而miR-296-3p可靶向下调CNE2-RR细胞MAPRE1表达。结论敲低CircFAT1可通过上调miR-296-3p而降低MAPRE1表达,从而抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡并增强其放射敏感性。