microRNA-223-3p靶向微管相关蛋白1B抑制肝星状细胞活化的机制研究

目的探讨microRNA-223-3p(miR-223-3p)对肝星状细胞活化的影响及机制。方法选取人肝星状细胞系LX2细胞为研究对象,采用TGF-β刺激LX2细胞的方式构建肝星状细胞活化模型,通过实时荧光定量PCR检测miR-223-3p在肝星状细胞活化过程中表达水平变化;转染miR-223-3p mimic至LX2细胞,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法(Western Blot)及细胞免疫荧光明确miR-223-3p对肝星状细胞活化的调控作用;通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与靶基因MAP1B的关系;转染MAP1B的siRNA至LX2细胞,通过Western Blot明确抑制MAP1B表达对肝星状细胞活化的影响;转染miR-223-3p至LX2细胞,通过实时荧光定量PCR和Western Blot验证miR-223-3p对MAP1B的调控作用。计量资料两组间比较采用成组t检验。结果与静息状态相比,肝星状细胞处于活化状态时,miR-223-3p表达水平下降(t=9.12,P<0.001)。过表达miR-223-3p能抑制肝星状细胞活化标志物平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原的mRNA(t值分别为8.35、12.23,P值均<0.01)和蛋白(t值分别为16.24、20.90,P值均<0.001)表达水平。双荧光素酶报告基因实验证实MAP1B是miR-223-3p的潜在靶基因。与对照组相比,过表达miR-223-3p的LX2上MAP1B的mRNA表达(t=5.95,P<0.01)及蛋白表达(t=11.12,P<0.001)水平均显著降低。结论miR-223-3p可通过靶向MAP1B抑制肝星状细胞活化。

EGF和bFGF对脐血单个核细胞τ蛋白及微管相关蛋白-2 mRNA表达的影响

目的探讨脐血单个核细胞在细胞因子诱导作用下τ蛋白及微管相关蛋白-2(MAP2)mRNA的表达。方法用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,接种于含20%胎牛血清H-DMEM培养瓶内。以不加任何生长因子的培养为对照组,其余3组分别加入细胞因子EGF+bFGF、bFGF、EGF,终浓度均为20μg/L。倒置显微镜下观察细胞形态变化,RT-PCR方法检测脐血单个核细胞培养前后τ蛋白及MAP2mRNA,免疫细胞化学方法检测τ蛋白及MAP2阳性细胞。结果培养前,脐血单个核细胞胞体小呈圆形;培养后EGF+bFGF组细胞胞体较大,突起粗而长,EGF组细胞胞体呈梭形,有1-2个长突触,bFGF组细胞胞体较小、有多个细长突起,形似星形细胞,对照组细胞形态类似于bFGF组,但数量较少。RT-PCR检测未培养脐血单个核细胞MAP2mRNA表达阳性而τ蛋白mRNA呈阴性,培养后MAP2mRNA表达增强,τ蛋白mRNA亦呈阳性;免疫细胞化学方法可检测MAP2及τ蛋白阳性细胞在EGF+bFGF组、EGF组、bFGF组、对照组分别为335%、256%、196%、144%和298%、214%、153%、135%。结论脐血单个核细胞中存在的神经元特异性分子,经培养和生长因子调控后表达增强,联合使用bFGF、EGF具有协同作用。

微管相关蛋白样激酶1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的研究微管相关蛋白样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法回顾性分析2006年5月至2011年7月在河南省人民医院住院治疗的267例胃癌病人临床病理资料,免疫组化染色法检测267例胃癌组织和138例癌旁正常组织中DCLK1的表达,分析DCLK1表达与胃癌病人临床病理特征之间的关系,Cox风险回归模型回归分析影响胃癌病人预后生存的影响因素,Kaplan-Meier法绘制不同DCLK1表达水平病人的5年总体生存和无复发生存曲线,Log-rank法比较5年总体生存和无复发生存的差异。结果 DCLK1在胃癌组织中的高表达率71.9%(192/267)高于癌旁正常组织26.1%(36/138)。单因素分析显示DCLK1高表达与病人性别、年龄,肿瘤大小,位置等临床病理因素之间无显著关联(P>0.05),与肿瘤分化程度、浸润深度、神经侵犯、脉管侵犯、淋巴转移及临床分期等临床病理因素之间有关(P<0.05)。Cox回归分析显示DCLK1高表达、临床分期和肿瘤分化程度是胃癌病人总生存率和无复发生存率的独立影响因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,DCLK1高表达的胃癌病人的总生存率和无复发生存率较低(P<0.05)。结论 DCLK1在胃癌组织中高表达是胃癌病人预后生存的独立影响因素。

NEP1-40对局灶性脑缺血大鼠生长相关蛋白43和微管相关蛋白2表达的影响

目的观察局灶性脑缺血大鼠生长相关蛋白43(GAP-43)和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达变化,及轴突生长抑制因子A(NogoA)拮抗剂NEP1-40给药后对其表达的影响,探讨NogoA抑制神经再生的可能机制。方法雄性SD大鼠48只,随机分为3组:假手术组、模型组和给药组,每组16只,采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,给药组于脑缺血术后1d给予NEP1-40溶液侧脑室注射。术后1、3、7和14d用免疫组织化学法检测缺血侧纹状体区域GAP-43和MAP-2的表达变化。结果脑缺血后缺血侧纹状体区域,在模型组和给药组脑缺血后1、3和7d GAP-43阳性表达的吸光度值逐步增高,14dGAP-43表达有所下降,但均明显高于假手术组。给药组1、3、7和14dGAP-43阳性表达的吸光度值均明显高于模型组(0.19±0.18 vs 0.17±0.23,0.24±0.10 vs 0.21±0.04,0.30±0.21 vs 0.25±0.06和0.26±0.23 vs 0.23±0.08,P<0.05)。模型组和给药组各时间点MAP-2阳性表达的吸光度值逐渐升高,但均明显低于假手术组。给药组各时间点MAP-2阳性表达的吸光度值均明显高于模型组。结论抑制NogoA后可以通过增加缺血区GAP-43和MAP-2的表达,促进神经修复,这可能是NogoA抑制神经再生的机制。

大鼠脑挫伤后微管相关蛋白2 mRNA表达变化

目的观察大鼠脑挫伤后脑组织中微管相关蛋白2(microtubule associated protein 2,MAP-2)mRNA表达变化,探讨其时序性变化与脑损伤时间的相关性。方法参照Feeney法建立大鼠右顶叶脑挫伤模型,应用实时定量PCR技术检测挫伤区脑组织MAP-2 mRNA的表达情况。结果对照组大鼠脑组织内有低水平的MAP-2 mRNA表达;伤后1h,挫伤灶脑组织MAP-2 mRNA表达较正常对照组下降,伤后6 h降至最低;12 h～14 d逐渐增高,至14 d时仍维持在高表达水平。结论脑挫伤后MAP-2 mRNA的表达规律,在法医学实践中可以作为脑损伤时间推断的新方法之一。

微管相关蛋白和NF-κB在大鼠脑缺血预处理中的神经保护作用

目的探讨微管相关蛋白(doublecortin)和NF-κB在脑缺血预处理后介导的神经保护作用。方法取清洁级雄性6周龄Wistal大鼠54只,按数字法随机分为缺血组、缺血预处理组、假手术组,每组各18只;再按三个观察时间分为24、48、72h组,每个时间点各6只。对缺血预处理组的大鼠,先行左颈内动脉暂时性血流阻断,同时以0.25 ml/min的速度,从左颈外动脉处输入等渗盐水,3 min后恢复血流,停止输液7 min,共重复3次。3 d后,再与缺血组同时采用大脑中动脉线栓法,建立局灶性脑缺血损伤模型;对假手术组大鼠仅分离颈总动脉。在术后相应时间点评价大鼠的神经行为、实时荧光定量PCR检测其脑组织中doublecortin mRNA和NF-κB mRNA的表达。结果①缺血预处理组大鼠在24、48、72 h的神经功能缺损评分与缺血组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②同一时间点各组间比较:doublecortin mRNA和NF-κB mRNA表达,两缺血组均高于假手术组,预处理组的doublecortin mRNA又高于缺血组;预处理组的NF-κB mRNA则低于缺血组,均P<0.01。③动态比较:doublecortin mRNA表达随时间延长而增加,NF-κB mRNA则随时间延长而降低,均P<0.01。结论脑缺血损伤可诱导一定程度的doublecortin的表达和NF-κB信号通路的激活。缺血预处理可能通过上调doublecortin和下调NF-κB的表达,促进神经细胞再生,介导神经保护效应。

不同剂量纳洛酮后处理对大鼠脑微管相关蛋白的影响

目的评价不同剂量纳洛酮后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑微管相关蛋白(MAP2)蛋白的影响。方法成年SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,生理盐水对照组(P组),纳洛酮1mg/kg后处理组(N1组),纳洛酮5mg/kg后处理组(N2组),纳洛酮10mg/kg后处理组(N3组)。4组均采用阻断右侧大脑中动脉90min,再灌注24h的方法制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型。在再灌注初始,腹腔注射生理盐水或不同剂量纳洛酮。实验过程中连续监测心率(HR)和平均动脉压(MAP);再灌注24h后,各组大鼠用1%戊巴比妥钠(90mg/kg)腹腔注射麻醉后,迅速断头取脑,测定缺血侧和健侧脑组织MAP2表达。结果缺血前和缺血再灌注期间各时间点的心率和MAP在4组之间差异无统计学意义(P>0.05)。对于缺血侧,与P组比较,N1、N2组再灌注24h后脑组织MAP2表达无明显改变(P>0.05);与P组、N1、N2组相比,N3组的上述指标显著增高(P<0.05)。对于健侧,4组间MAP2表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论大剂量纳洛酮后处理可增强大鼠脑MAP2蛋白的表达,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。

实验性脑梗死及再灌注后的微管相关蛋白、热休克蛋白及胶质原纤维酸性蛋白的动态变化

目的:动态观察实验性脑梗死及再灌注后的微管相关蛋白2(microtubuleassociatedprotein2,MAP2)、热休克蛋白70(heatshockpro-tein70,HSP70)及胶质原纤维酸性蛋白(gliafibrilacidprotein,GFAP)的变化,同时观察脑缺血的分子病理及形态学上的演变。方法:实验于1999-05/2000-02在中山医科大学神经科实验室进行,用90只SD大鼠行易卒中型肾血管性高血压模型术(RHRSP),在术后10周按Longa's方法改良行左侧大脑中动脉闭塞术。分别在闭塞12h内的不同时间点及再灌注48h完成检查后将大鼠处死行苏木精-伊红染色及MAP2,HSP70,GFAP免疫组化检查。结果:所有的RHRSP均表现出高血压性脑血管病变,主要表现为小动脉管壁增厚和管径小。自大脑中动脉闭塞30min～12h,缺血中心无HSP70染色阳性神经元,在其周边区有散在的HSP70阳性神经元,随着大脑中动脉闭塞的持续,其数目逐渐减少(P<0.01);缺血周边区内出现MAP2阳性神经元增多,可见树突卷曲,在中心区MAP2阳性信号密度逐渐减少(P<0.01),可见断裂的树突;同侧皮质及基底核区GFAP染色阳性细胞逐渐增多(P<0.001),细胞体积增大,突起增多。恢复血流48h后,梗死灶周边区仍可见少量的HSP70阳性神经元;梗死灶周边区卷曲的树突已变直,而梗死灶内断裂的树突则消失;GFAP免疫反应增强更明显,并遍及?

氦氖激光对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑组织内微管相关蛋白2表达的影响

目的:观察氦氖激光治疗改善血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的作用,并以脑神经元特有的细胞骨架蛋白微管相关蛋白2表达的变化评估脑组织损伤程度。方法:实验于2004-04/07在郑州大学基础医学院人体解剖教研室完成。45只成年健康Wistar大鼠随机分为3组,每组15只。①氦氖激光治疗组和血管性痴呆模型组制备血管性痴呆大鼠模型。氦氖激光治疗组采用氦氖激光照射百会、大椎两穴,1次/d,30min/次,7d为1个疗程,共2个疗程,疗程间隔3d。模型组未做治疗。②假手术组不造成脑缺血,未做治疗。用Y-型迷宫检测3组大鼠的空间记忆和学习记忆能力,以连续10次测试中有9次正确反应时所需的电击次数为评估标准。取3组大鼠组织切片,进行微管相关蛋白2免疫组织化学染色检测,用灰度值大小说明其在脑组织内表达的高低。结果:41只大鼠进入结果分析。①大鼠的学习和记忆能力:氦氖激光治疗组第1次和第2次连续10次测试中有9次正确反应时所需的电击次数少于模型组(7.71±1.59,4.71±1.94,18.50±1.68,15.58±2.64,P<0.01),接近假手术组(6.60±1.55,4.20±1.74)。②大鼠脑组织海马CA1区微管相关蛋白2阳性反应灰度值:氦氖激光组明显高于模型组(0.69±0.03,0.45±0.07,P<0.01),与假手术组比较无显著差别。结论:氦氖激光照射疗法可以改善血管性痴呆大鼠的空间定向能力和学习记忆能力,并使微管蛋白2活性提高,从而保持神经元细胞骨架的完整,减轻脑组织的损伤。

黄体酮对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响

目的观察并探讨黄体酮对视神经损伤早期视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响,以期为黄体酮在视神经保护方面的作用提供实验依据。方法 60只大鼠随机分为3组,每组20只。正常对照组不做任何处理,损伤1组制作右眼视神经夹伤模型,给予0.9%氯化钠溶液腹腔注射,损伤2组制作右眼视神经夹伤模型,给予黄体酮腹腔注射。分别于损伤后1、3、7、14、28 d将3组大鼠右眼球摘除,取视网膜组织,HE染色光学显微镜观察视网膜形态学变化,并计数视网膜神经节细胞存活数量,免疫组织化学染色观察视网膜组织中MAP-1B在视网膜神经节细胞的表达情况。结果视神经损伤后损伤1组视网膜神经纤维层明显水肿,视网膜神经节细胞数目迅速减少,经黄体酮治疗的损伤2组视网膜形态改变轻微,视网膜神经纤维层轻度水肿,视网膜神经节细胞数目减少缓慢。损伤2组各时间段视网膜MAP-1B平均光密度值较损伤1组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄体酮可以通过增加细胞骨架蛋白MAP-1B减轻视神经损伤早期视网膜神经节细胞的损害,对视神经及视网膜有保护作用。

宫内缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑组织中微管相关蛋白2 mRNA的表达

目的:观察宫内缺血缺氧性脑损伤(hypoxiaischemiabraindamage,HIBD)新生鼠脑组织中微管相关蛋白2(microtubuleassociatedprotein-2,MAP-2)表达的变化。方法:通过钳夹右侧子宫内动脉造成胎鼠HIBD动物模型,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,动态观察脑组织中MAP-2mRNA水平变化。结果:各实验组MAP-2mRNA随着缺血时间的延长而表达减弱,其中缺血20min(A3组)、25min(A4组)以及30min(A5组)的MAP-2mRNA灰度扫描值较对照组(B3、B4、B5组)明显降低,差异有显著性(P<0.05)。结论:HIBD可造成新生鼠脑组织中MAP-2转录水平的下降。

调肝理脾法对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型脂质代谢及微管相关蛋白轻链3B表达的影响

目的观察调肝理脾法对大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的改善作用及对大鼠肝组织微管相关蛋白轻链3B(LC3B)表达的影响,探讨调肝理脾法治疗NAFLD的作用机制。方法 SD雄性大鼠(清洁级)30只,随机分为对照组、模型组、调肝理脾法组,每组10只。模型组、调肝理脾法组大鼠皆予以高脂饮食,共12周。调肝理脾法组大鼠造模同时给予调肝理脾方2 ml·100 g-1·d-1灌胃(相当于成人剂量的5倍),对照组大鼠给予普通饲料及等量生理盐水灌胃。第12周末处死动物,采集血液、肝脏标本,检测各组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,并通过HE染色观察肝脏脂肪变性情况,免疫组化法检测LC3B在肝脏组织中表达的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;计数资料组间比较采用χ2检验;等级资料多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用Mann-Whitney U检验。结果 HE染色提示模型组大鼠肝细胞脂肪变性程度和炎症活动度计分与正常对照组相比,差异均有统计学意义(P值均<0.001);调肝理脾法组脂肪变性程度和炎症活动度计分明显减轻,与模型组相比差异均有统计学意义(P值均<0.01)。与正常对照组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C的水平均升高,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。与模型组比较,除HDL-C外,调肝理脾法组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C的水平均降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠肝组织LC3B表达水平略增高,差异无统计学意义(χ2=1.250,P>0.05);与模型组比较,调肝理脾法组肝组织LC3B表达水平明显增高,差异有统计学意义(χ2=5.051,P<0.05)。结论调肝理脾法对实验性SD雄性NAFLD大鼠肝功能、血脂等有较好的改善作用,其作用机制可能与升高SD雄性大鼠肝组织内的自噬水平有关。

微管相关蛋白9编码基因rs1058992位点多态性与EBV相关肿瘤易感性

目的探讨微管相关蛋白9(MAP9)编码基因rs1058992位点多态性与EB病毒(EBV)相关肿瘤的关系。方法采用飞行时间质谱技术,检测3种EBV相关肿瘤(胃癌、鼻咽癌、淋巴瘤)与正常人外周血MAP9基因rs1058992位点基因型,比较肿瘤病人与正常人、EBV阳性肿瘤与EBV阴性肿瘤间基因型与等位基因频率的差异。结果 EBV相关胃癌(EBVaGC)与EBV阴性胃癌(EBVnGC)MAP9基因rs1058992位点TT、CT、CC基因型分布及T、C等位基因频率比较差异均有显著性(χ2=7.687、6.154,P<0.05);EBVaGC与正常对照组C等位基因频率比较差异有显著性(χ2=4.442,P<0.05);EBVnGC与正常对照组比较,TT、CT、CC基因型分布及T、C等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。EBV阳性鼻咽癌与EBV阴性鼻咽癌、正常对照组比较,TT、CT、CC基因型分布及T、C等位基因频率差异均无显著性(P>0.05)。EBV阳性淋巴瘤与EBV阴性淋巴瘤、正常对照组间比较,TT、CT、CC基因型分布及T、C等位基因频率差异均无显著性(P>0.05)。结论 MAP9基因rs1058992位点多态性和等位基因均与EBVaGC易感性有关,C等位基因可能是EBVaGC的危险因素。

二氢杨梅素对间歇低氧大鼠认知功能及海马齿状回微管相关蛋白2表达的影响

目的探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对间歇低氧大鼠认知功能及海马齿状回微管相关蛋白2(MAP-2)表达的影响。方法54只Wistar大鼠随机分为正常组、间歇低氧组及DHM组(n=18),在实验6周、8周、12周3个时间点每组各取6只大鼠,应用Morris水迷宫检测大鼠的记忆功能;免疫组织化学法观察海马齿状回MAP-2表达;透射电镜观察海马齿状回突触的超微结构。结果在相同时间点,与正常组比较,间歇低氧组及DHM组大鼠逃避潜伏期明显延长,跨越目标象限时间明显缩短,MAP-2表达明显降低(P<0.05);与间歇低氧组比较,DHM组大鼠实验6周、8周、12周逃避潜伏期明显缩短[(37.57±3.55)s vs(67.88±3.17)s,(49.05±3.30)s vs(75.13±2.85)s,(57.90±3.42)s vs(84.22±3.59)s],跨越目标象限时间明显延长[(39.38±2.69)s vs(20.96±2.25)s,(30.60±3.02)s vs(17.32±2.91)s,(24.59±2.59)s vs(11.26±3.11)s],MAP-2表达明显升高(47.26±4.18 vs 33.89±2.64,39.08±4.59 vs 24.64±2.43,27.24±3.51 vs 14.15±4.01),差异有统计学意义(P<0.05)。电镜下正常组大鼠海马齿状回突触小泡丰富,突触及细胞器结构正常;与正常组比较,间歇低氧组突触小泡减少,结构不清,细胞器损伤;与间歇低氧组比较,DHM组大鼠海马齿状回突触损伤减轻。结论DHM可改善间歇低氧大鼠认知功能,这可能与增加海马齿状回MAP-2表达改善突触可塑性有关。

风湿性心脏病患者瓣膜组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ和骨唾液蛋白与胶原容积分数的相关性

目的探讨风湿性心脏病(RHD)患者瓣膜组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和骨唾液蛋白(BSP)与胶原容积分数(CVF)的相关性及发病危险因素。方法选取行手术切除的二尖瓣瓣膜患者260例,其中RHD患者188例(RHD组),非RHD患者72例(非RHD组)。采用Western blot法检测瓣膜组织中LC3-Ⅱ和BSP水平,采用Masson法进行胶原纤维染色,并检测CVF。比较2组LC3-Ⅱ、BSP、CVF水平,采用Pearson相关分析LC3-Ⅱ、BSP与CVF的相关性,用ROC曲线分析LC3-Ⅱ和BSP对RHD的诊断价值,采用logistic回归分析发生RHD的独立危险因素。结果 RHD组LC3-Ⅱ、BSP、CVF水平明显高于非RHD组,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,LC3-Ⅱ、BSP与CVF呈正相关(r=0.642,r=0.607,P<0.01)。ROC曲线分析显示,LC3-Ⅱ诊断RHD的曲线下面积为0.738(95%CI:0.694~0.787),截断值为0.55。BSP诊断RHD的曲线下面积为0.759(95%CI:0.708~0.803),截断值为0.86。LC3-Ⅱ和BSP联合诊断RHD的曲线下面积为0.841(95%CI:0.796~0.885),敏感性、特异性分别为94.68%和76.39%。logistic回归分析显示,LC3-Ⅱ、BSP、高血压、年龄以及地区均是发生RHD的影响因素(P<0.05,P<0.01)。结论 RHD患者瓣膜组织中LC3-Ⅱ和BSP均呈高表达,与CVF相关,是RHD发生的独立危险因素,LC3-Ⅱ和BSP联合检测具有较高的诊断效能。

微管相关蛋白tau基因突变相关额颞叶痴呆临床研究进展

额颞叶痴呆(FTD)是仅次于阿尔茨海默病的第二大早发型痴呆。30%~50%的FTD患者与遗传相关。微管相关蛋白tau(MAPT)基因突变是一种常见的常染色体显性基因突变,是遗传性额颞叶痴呆的第三大常见原因。本文就MAPT基因的结构、编码蛋白、致病机制、病理特点、MAPT基因突变所致FTD的临床表型,影像特点及治疗作出综述。

山茱萸多糖对HeLa细胞的抑制作用及相关凋亡抑制蛋白表达的影响

目的探讨山茱萸多糖对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及对相关凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2表达的影响。方法采用MTT法、流式细胞术及免疫组化SP法检测山茱萸多糖对HeLa细胞抑制作用及Survivin和Bcl-2蛋白表达的变化。结果山茱萸多糖对HeLa细胞抑制作用明显,抑制程度与浓度、时间相关;6.25g/L、12.5g/L、25g/L的山茱萸多糖对HeLa细胞的凋亡率分别为10.1%、21.6%和28.9%,明显高于对照组的1.2%。山茱萸多糖致使HeLa细胞凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2的表达量降低。结论山茱萸多糖对HeLa细胞增殖有较强的抑制作用,能够降低Survivin和Bcl-2的表达,诱导细胞凋亡。

间歇低氧对大鼠海马神经细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的通过模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的发病特征,建立大鼠间歇性低氧(IH)模型,观察IH后大鼠海马CA1区神经细胞线粒体自噬及相关蛋白的表达。方法 72只雄性Wistar大鼠随机分为对照组36只和间歇低氧(5%IH)组36只,对照组向低氧箱内持续注入压缩空气,5%IH组每天放入低氧箱内IH暴露7h,模型完成后分别于1、3、5、7、10和14d采用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞线粒体超微结构的改变;免疫组织化学法检测Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。结果与对照组比较,5%IH组3d开始出现线粒体超微结构的明显改变,可见线粒体自噬体形成;1、3、5、10和14dBeclin-1及LC3蛋白表达均明显升高(P<0.05),于10d达高峰(P<0.05),14d开始下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IH早期可诱导大鼠海马神经细胞线粒体发生自噬及自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达。

CXC趋化因子受体4通过S期激酶相关蛋白2调控乳腺癌细胞周期的机制

目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)通过PI3K/Akt和ERK信号通路调控S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,进而影响乳腺癌细胞周期的机制。方法:利用干扰及过表达技术下调或上调CXCR4的表达后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CXCR4与Skp2调控的关联性;蛋白质印迹法检测CXCR4干扰及过表达后对信号蛋白及Skp2下游相关基因表达的影响;通过碘化丙啶(PI)染色法检测CXCR4、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002及ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞周期的影响。结果:干扰CXCR4后,Skp2表达下调;过表达CXCR4后,Skp2表达上调。CXCR4可通过对信号蛋白的调控影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达。干扰CXCR4后,G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞比例相应减少,CXCR4与LY294002及U0126联合作用对细胞周期的阻断更加明显。结论:CXCR4能够通过对信号蛋白PI3K/Akt及ERK的调控,影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达,阻断CXCR4/Akt/Skp2或CXCR4/ERK/Skp2信号通路后可有效诱导细胞周期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。

组蛋白去甲基化酶JMJD2和雌激素受体相关受体α在绝经后骨质疏松症的表达

背景:研究发现组蛋白去甲基化酶具有促进成骨细胞分化的作用;雌激素相关受体α可促进成骨细胞分化,增加骨形成。然而绝经后骨质疏松症组蛋白去甲基化酶表达以及与雌激素受体相关受体α的相关性未见报道。目的:观察绝经后骨质疏松症患者组蛋白去甲基化酶2家族的变化及其对组蛋白甲基化(H3K9me3、H3K36me3)水平的影响,以及与雌激素受体相关受体α的相关性。方法:选择年龄50-70岁因髋关节骨性关节炎行关节置换的绝经后患者,通过检测腰椎骨密度,收集10例绝经后骨质疏松症患者(实验组)和10例非骨质疏松症患者(对照组),术中提取股骨头松质骨标本,免疫组织化学、蛋白质印迹法检测骨组织中组蛋白去甲基化酶(JMJD2A、JMJD2B)、组蛋白甲基化(H3K9me3、H3K36me3)以及雌激素受体相关受体α的表达。结果与结论:绝经后妇女组蛋白去甲基化酶2A、组蛋白去甲基化酶2B、雌激素受体相关受体α表达为弱阳性到阳性不等,骨质疏松症患者组表达水平低于非骨质疏松症患者组,组间差异有显著性意义(P<0.05);骨质疏松症患者组H3K9me3、H3K36me3表达水平高于非骨质疏松症患者组,组间差异有显著性意义(P<0.05)。结果说明,绝经后骨质疏松症患者组蛋白呈高甲基化状态,组蛋白去甲基化酶2A、组蛋白去甲基化酶2B低表达,雌激素受体相关受体α水平与组蛋白去甲基化酶相一致;组蛋白去甲基化酶可能为骨质疏松的一种拮抗酶。